一种用于角膜内皮细胞移植的液态载体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物工程医疗材料领域，具体涉及的是一种用于角膜内皮细胞移植的液态载体、制备方法及其应用。所述液态载体包括Laminin511和缓冲液，所述液态载体中Laminin511的浓度为10～50μg/mL。在角膜内皮细胞移植前，将制备的液态载体注射入前房，可在角膜后弹力层表面沉积从而形成一层载体膜，能显著促进移植的角膜内皮细胞贴附，并使其尽快形成细胞间连接而发挥屏障功能。

【技术实现步骤摘要】
一种用于角膜内皮细胞移植的液态载体及其制备方法和应用
本专利技术属于生物工程医疗材料领域，尤其涉及一种用于角膜内皮细胞移植的液态载体及其制备方法和应用。
技术介绍
角膜移植，包括穿透性角膜移植术，后弹力层剥离的角膜内皮移植术和后弹力层角膜内皮移植术，常被应用于治疗角膜内皮失代偿疾病。但是由于世界范围内移植级角膜供体的短缺，目前无法满足临床要求，研究者们正在进行体外培养角膜内皮细胞移植。传统细胞移植方法一般设计使用固态载体协助移植，如羊膜、胶原材料等，将培养的角膜内皮细胞与载体共培养以形成植片进行移植，手术方式采用穿透性角膜移植术或角膜内皮移植术，但要完整的单层剥离和移植的难度较大。目前很多研究都采取前房内皮细胞注射法进行细胞移植，即直接注射体外培养角膜内皮的单细胞进入前房，由于破坏了细胞间原有的屏障和连接结构，细胞移植后并不能快速且高效地附着在角膜后弹力层上，而且细胞在体内要重新形成连接，发挥功能较慢。其次，注射入前房内的细胞若不能贴附在后弹力层上，则会部分沉积到小梁网上，细胞堆积及局部迁移会引起房角粘连，导致青光眼发生，严重者可能致盲；还有部分未贴附的移植细胞可能通过小梁网及Schlemm管进入血液循环系统，进而到达全身的任何一个脏器，在安全性方面具有潜在的风险。此外，传统的后弹力层剥除的角膜内皮移植术手术创伤较大，术后炎症反应较重；羊膜等固态载体本身的透明度不佳，移植后会影响角膜透明度，且手术创口大、操作难度高，另外由于羊膜本身具有抗原性，移植入前房后易引起免疫排斥反应。专利技术内容有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种用于角膜内皮细胞移植的液态载体，包括Laminin511和缓冲液，在角膜内皮细胞移植前，将该液态载体注射入前房，可在角膜后弹力层表面沉积从而形成一层载体膜，能显著促进移植的角膜内皮细胞贴附，并使其尽快形成细胞间连接而发挥屏障功能。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了一种用于角膜内皮细胞移植的液态载体，所述液态载体包括Laminin511和缓冲液，所述液态载体中Laminin511的浓度为10～50μg/mL。其中，作为优选的，本专利技术所述液态载体中Laminin511的浓度为20μg/mL。在本专利技术中，所述缓冲液优选为杜氏磷酸缓冲液；所述杜氏磷酸缓冲液进一步优选为D-PBS，所述D-PBS的组分包括氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠和磷酸氢二钠。本专利技术还提供了上述液态载体的制备方法，包括：将所述Laminin511与缓冲液混合、过滤，得到液态载体。作为优选的，本专利技术制备方法中，所述混合步骤的温度为2～8℃。优选的，本专利技术制备方法中，所述过滤步骤的温度为2～8℃。优选的，本专利技术所述液态载体的储存温度为2～8℃。本专利技术还提供了上述液态载体在制备角膜内皮细胞移植的试剂中的应用。本专利技术还提供了上述液态载体在制备促进角膜内皮细胞粘附生长的试剂中的应用。本专利技术提供了一种用于角膜内皮细胞移植的液态载体，包括Laminin511和缓冲液，在角膜内皮细胞移植前，将该液态载体注射入前房，用于角膜内皮细胞移植术或角膜内皮移植治疗角膜内皮功能失代偿。与现有技术相比，本专利技术的优点在于：1、本专利技术液态载体可在角膜后弹力层表面沉积从而形成一层载体膜，能显著促进移植的角膜内皮细胞贴附，并使其尽快形成细胞间连接而发挥屏障功能。2、本专利技术液态载体减少了游离细胞的数量，进一步降低了并发症，安全性得到保证。3、本专利技术液态载体为透明、无色液体，不会影响移植后角膜透明度。4、由于本专利技术载体为液态，只需要使用注射器进行前房注射，操作难度低，不用扩大手术切口，避免手术创伤。5、本专利技术液态载体主要成分为层粘连蛋白Laminin511，是角膜后弹力层的成分，无抗原性，载体本身不会引起免疫排斥。附图说明图1为不同浓度Laminin511促进角膜内皮细胞贴附能力比较；图2为进行角膜内皮细胞移植后，角膜后弹力层上的层粘连蛋白LAMA5表达情况比较；图3为进行角膜内皮细胞移植后，角膜的透明度和厚度恢复情况；图4为进行角膜内皮细胞移植后，共焦显微镜观察到的角膜内皮细胞形态及细胞密度；图5为进行角膜内皮细胞移植后，移植细胞形态及免疫荧光染色情况；图6为Laminin511作为液态载体进行角膜内皮细胞移植，与传统的后弹力层剥除的角膜内皮移植术DSEK对照比较。具体实施方式本专利技术提供了一种用于角膜内皮细胞移植的液态载体，所述液态载体包括Laminin511和缓冲液，所述液态载体中Laminin511的浓度为10～50μg/mL。作为优选的实施方式，本专利技术所述液态载体中Laminin511的浓度为20μg/mL。本专利技术对Laminin511来源并没有特殊限定，现有技术中的已知或市售Laminin511均可用于本专利技术中。作为一个可实施的方式，本专利技术中Laminin511优选应用厂家为BioLamina、产地为瑞典的松德比贝里市销售的Laminin511；更优选应用规格为100μg/mL的Laminin511。在本专利技术中，所述Laminin511为层粘连蛋白，是角膜后弹力层的成分，无抗原性，载体本身不会引起免疫排斥。所述Laminin511可通过其肽链的相应区域与细胞受体及基底膜成分连接，参与维持基底膜的完整性和调节细胞的多种生物学功能，应用Laminin511后可在角膜后弹力层表面沉积从而形成一层载体膜，能显著促进移植的角膜内皮细胞贴附，并使其尽快形成细胞间连接而发挥屏障功能。本专利技术对所述缓冲液来源没有特殊限定，现有技术中市售或自配的可用于细胞培养的冲液均可用于本专利技术。作为优选的实施方式，在本专利技术中，所述缓冲液优选杜氏磷酸缓冲液；所述杜氏磷酸缓冲液优选为北京索莱宝科技有限公司销售的D-PBS，所述D-PBS的组分优选包括氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠和磷酸氢二钠。在本专利技术中，所述杜氏磷酸缓冲液主要起稀释保护试剂作用。所述杜氏磷酸缓冲液优选为北京索莱宝科技有限公司销售的D-PBS，所述D-PBS不含钙镁和酚红，可以用于细胞培养，并且，应用于角膜内皮细胞移植时可以辅助稳定眼内微环境。本专利技术还提供了上述技术方案所述的液态载体的制备方法，包括：将所述Laminin511与缓冲液混合、过滤，得到液态载体。作为优选的实施方式，本专利技术应用Laminin511的市售规格为100μg/mL，将Laminin511与杜氏磷酸缓冲液按照1:4比例混合。本专利技术液态载体优选现用现配的方式制备；制备过程全程均在冷藏环境下进行。在本专利技术中，所述混合的温度优选为2～8℃，更优选为3～7℃。在本专利技术中，所述过滤的温度优选为2～8℃，更优选为3～7℃。本专利技术对过滤过程并无特殊限定，现有或已知的除菌过滤方式均可用于本专利技术中。作为一种优选的实施方式，本专利技术液态载体在超净台内使用0.22μm孔径的滤器本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于角膜内皮细胞移植的液态载体，其特征在于，所述液态载体包括Laminin511和缓冲液，所述液态载体中Laminin511的浓度为10～50μg/mL。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于角膜内皮细胞移植的液态载体，其特征在于，所述液态载体包括Laminin511和缓冲液，所述液态载体中Laminin511的浓度为10～50μg/mL。


2.根据权利要求1所述的液态载体，其特征在于，所述液态载体中Laminin511的浓度为20μg/mL。


3.根据权利要求1所述的液态载体，其特征在于，所述缓冲液为杜氏磷酸缓冲液。


4.根据权利要求3所述的液态载体，其特征在于，所述杜氏磷酸缓冲液为D-PBS，所述D-PBS的组分包括氯化钾、磷酸二氢钾、氯化钠和磷酸氢二钠。


5.权利要求1～4任一项所...

【专利技术属性】
技术研发人员：史伟云，周庆军，赵灿，李宗义，段豪云，
申请(专利权)人：山东省眼科研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37