用于筛选抗肿瘤物质的系统及方法技术方案

提供一种用于筛选抗肿瘤物质的系统，该系统包含编码第一调控因子的第一表达载体和编码生物大分子的第二表达载体，且该生物大分子的表达可由第一调控因子和诱导剂共同调控。还提供制备该系统的方法、利用该系统筛选抗肿瘤物质的方法和筛选得到的抗肿瘤物质。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于筛选抗肿瘤物质的系统及方法
本申请涉及生物医药领域，具体涉及一种用于筛选抗肿瘤物质的系统及方法。
技术介绍
在传统的抗肿瘤药物筛选中，研究者通常将各种药物直接加入到所培养的肿瘤细胞中，通过各种手段分析药物对肿瘤细胞本身的增殖、分化或其他成瘤相关生物学活性的影响，从而找到能够直接对肿瘤细胞产生影响的药物。这种方法具有一个非常重要的局限，其把药物对肿瘤细胞本身的影响作为第一评价因素，而回避忽视了肿瘤复杂的微环境在肿瘤发生中的作用，导致筛选出的药物在体内并不能获得体外培养细胞上显示出的抑制效果。可见肿瘤在体外和体内的显著区别导致大量的体外筛选的抗肿瘤药物无法在体内或得效果。更重要的是，目前常见的体内抗肿瘤药物评价模型中，向裸鼠接种肿瘤细胞后进行药物干预。由于裸鼠缺乏正常的免疫系统，因此其接种的肿瘤与正常小鼠肿瘤所处的肿瘤微环境相去甚远，获得的评价结果也并不具有很好的参考意义。同时，近年来，肿瘤药物联合治疗已经成为一种趋势，然而目前也没有可靠地筛选抗肿瘤药物组合的体内筛选方法。
技术实现思路
本申请提供了一种用于筛选抗肿瘤物质(特别是抗肿瘤物质组合)的系统及方法。该系统和/或方法具有下列性质中的一种或多种：1)模拟、再现肿瘤发生的复杂的微环境；2)更好地适应于具有免疫系统或免疫能力的受试者；3)筛选出的抗肿瘤物质对体内肿瘤具有有效的抑制效果；4)有效地获得具有协同作用的多种抗肿瘤物质的组合；以及5)构建方法简单，使用方法简单易行。一方面，本申请提供了一种用于生物大分子受控表达的系统，所述系统包含：1)第一表达载体，所述第一表达载体编码第一调控因子；2)第二表达载体，所述第二表达载体编码生物大分子，且所述生物大分子的表达可由所述第一表达载体所表达的所述第一调控因子和诱导剂共同调控，其中所述生物大分子为待筛选的候选抗肿瘤物质。另一方面，本申请提供了一种用于筛选抗肿瘤物质的系统，所述系统包含：1)第一表达载体，所述第一表达载体编码第一调控因子；2)第二表达载体，所述第二表达载体编码生物大分子，且所述生物大分子的表达可由所述第一表达载体所表达的所述第一调控因子和诱导剂共同调控。在某些实施方式中，所述第一调控因子包括转录因子。在某些实施方式中，所述诱导剂改变所述第一调控因子的构象。在某些实施方式中，所述诱导剂通过与所述第一调控因子结合而改变其构象。在某些实施方式中，所述诱导剂与所述调控因子结合而形成转录复合物，且所述转录复合物激活所述第二表达载体所编码的所述生物大分子的表达。在某些实施方式中，所述第一表达载体与所述第二表达载体为独立于彼此而存在的不同的表达载体。在某些实施方式中，所述系统包含两种或更多种所述第二表达载体，且每种所述第二表达载体编码的所述生物大分子与所述系统中的至少另一种第二表达载体编码的生物大分子不同。在某些实施方式中，所述系统包含细胞，且所述细胞包含所述第一表达载体和/或所述第二表达载体。在某些实施方式中，所述系统包含两种或更多种细胞，每种所述细胞包含所述第一表达载体和所述第二表达载体，且每种所述细胞中的第二表达载体编码的生物大分子与所述系统中至少另一种细胞中的第二表达载体编码的生物大分子不同。在某些实施方式中，所述第一表达载体和/或所述第二表达载体被整合到所述细胞的基因组中。在某些实施方式中，所述细胞包括肿瘤细胞。在某些实施方式中，所述肿瘤细胞包括黑色素瘤细胞。在某些实施方式中，所述黑色素瘤细胞包括小鼠黑色素瘤细胞B16。在某些实施方式中，所述系统包含非人动物，且所述非人动物包含所述细胞或由所述细胞衍生的细胞。在某些实施方式中，所述非人动物包括啮齿类动物。在某些实施方式中，所述啮齿类动物包括小鼠。在某些实施方式中，所述系统还包括所述诱导剂。在某些实施方式中，所述第一表达载体和/或所述第二表达载体包括或衍生自病毒载体。在某些实施方式中，病毒载体包括或衍生自慢病毒载体。在某些实施方式中，所述第一表达载体包含第一启动子，且所述第一启动子与编码所述第一调控因子的序列可操作地连接。在某些实施方式中，所述第一启动子为组成型启动子。在某些实施方式中，所述第一启动子选自：CMV、EF、SFFV、RSV、PGK和MSCV。在某些实施方式中，所述第一表达载体包括或衍生自pLentis-CMV-IRES-Bsd载体。在某些实施方式中，所述第二表达载体包含第二启动子，所述第二启动子为可被经活化的所述第一调控因子激活的诱导型启动子，且其中所述第二启动子与编码所述生物大分子的序列可操作地连接。在某些实施方式中，所述第二启动子包括TRE启动子。在某些实施方式中，所述第一表达载体还包括第一筛选标记。在某些实施方式中，所述第二表达载体还包括第二筛选标记。在某些实施方式中，所述第一筛选标记和/或所述第二筛选标记各自独立地选自下组中的一种或多种：抗生素标记和报告蛋白。在某些实施方式中，所述报告蛋白选自下组中的一种或多种：萤光素酶、绿色荧光蛋白、红色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、青色荧光蛋白和黄色荧光蛋白。在某些实施方式中，所述抗生素标记选自下组中的一种或多种：嘌呤霉素、杀稻瘟菌素、新霉素、潮霉素和博来霉素。在某些实施方式中，所述第一表达载体还包含IRES。在某些实施方式中，所述生物大分子包括细胞因子、趋化因子和抗体。在某些实施方式中，所述细胞因子选自下组中的一种或多种：白细胞介素、干扰素、淋巴毒素和集落刺激因子。在某些实施方式中，所述白细胞介素选自下组中的一种或多种：IL12、IL2、IL7、IL15和IL21。在某些实施方式中，所述干扰素选自下组中的一种或多种：IFNγ、IFNα和IFNβ。在某些实施方式中，所述淋巴毒素选自LT-α和LT-β。在某些实施方式中，所述集落刺激因子选自下组中的一种或多种：FMS相关酪氨酸激酶3配体和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子。在某些实施方式中，所述生物大分子包括选自下述的组合：1)IFNγ、IL2和LT；2)IL12、GMCSF和IL7；以及3)IL12、FLT3L和IL7。在某些实施方式中，所述诱导剂选自下组中的一种或多种：强力霉素和四环素。另一方面，本申请提供了一种所述系统用于制备筛选抗肿瘤物质的试剂盒的用途。在某些实施方式中，所述抗肿瘤物质能够抑制肿瘤生长和/或引起肿瘤消退。在某些实施方式中，所述肿瘤包括恶性肿瘤。在某些实施方式中，所述肿瘤包括黑色素瘤。在某些实施方式中，所述试剂盒还包含使用说明书。在某些实施方式中，所述说明书记载：1)提供包含所述系统的所述第一表达载体和所述第二表达载体的细胞；2)施用所述诱导剂使其和所述第一调控因子共同激活所述第二表达载体所编码的所述生物大分子的表达；以及3)检测所述生物大分子的所述表达对肿瘤的生长和/或存活的影响，其中所述生物大分子为待筛选的候选抗肿瘤物质。另一方面，本申请提供了一种调控生物大分子的表达和/或活性的方法，所述方法包括：1)提供第一表达载体，所述第一表达载体本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于筛选抗肿瘤物质的系统，所述系统包含：/n1)第一表达载体，所述第一表达载体编码第一调控因子；/n2)第二表达载体，所述第二表达载体编码生物大分子，且所述生物大分子的表达可由所述第一表达载体所表达的所述第一调控因子和诱导剂共同调控，其中所述生物大分子为待筛选的候选抗肿瘤物质。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180108 CN 2018100138344一种用于筛选抗肿瘤物质的系统，所述系统包含：
1)第一表达载体，所述第一表达载体编码第一调控因子；
2)第二表达载体，所述第二表达载体编码生物大分子，且所述生物大分子的表达可由所述第一表达载体所表达的所述第一调控因子和诱导剂共同调控，其中所述生物大分子为待筛选的候选抗肿瘤物质。


根据权利要求1所述的系统，其中所述第一调控因子和所述诱导剂共同激活所述第二表达载体所编码的所述生物大分子的表达。


根据权利要求1-2中任一项所述的系统，其中所述系统包含两种或更多种所述第二表达载体，且每种所述第二表达载体编码的所述生物大分子与所述系统中的至少另一种第二表达载体编码的生物大分子不同。


根据权利要求1-3中任一项所述的系统，其中所述系统包含细胞，且所述细胞包含所述第一表达载体和/或所述第二表达载体。


根据权利要求4所述的系统，其中所述系统包含两种或更多种细胞，每种所述细胞包含所述第一表达载体和所述第二表达载体，且每种所述细胞中的第二表达载体编码的生物大分子与所述系统中至少另一种细胞中的第二表达载体编码的生物大分子不同。


根据权利要求4-5中任一项所述的系统，其中所述细胞包括肿瘤细胞。


根据权利要求1-6中任一项所述的系统，其中所述第一表达载体包含第一启动子，所述第一启动子与编码所述第一调控因子的序列可操作地连接，且所述第一启动子为组成型启动子。


根据权利要求1-7中任一项所述的系统，其中所述第二表达载体包含第二启动子，所述第二启动子为可被所述第一调控因子和所述诱导剂共同激活的诱导型启动子，且所述第...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晋宇，
申请(专利权)人：张晋宇，
类型：发明
国别省市：重庆;50