一种新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条、试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条、试剂盒及其制备方法，新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条，包括基础板，基础板上沿长度方向设有依次相接的样品垫、金胶垫、硝酸纤维素膜层和吸水纸层，从样品垫到吸水纸层的方向上，硝酸纤维素膜层上依次设有两条检测线和一条质控线，两条检测线分别为包被鼠抗人IgM抗体的检测线和包被鼠抗人IgG抗体的检测线，一条质控线为包被兔抗鸡IgY抗体的质控线。金标垫上的金标抗体由分别被胶体金标记好的鸡IgY单克隆抗体和新型冠状病毒N蛋白组成。上述试纸条可以直接应用于新型冠状病毒的检测，实行对人体或者哺乳动物血清、血浆或全血中新型冠状病毒IgM和IgG抗体的体外定性检测。

【技术实现步骤摘要】
一种新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条、试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及一种新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条、试剂盒及其制备方法，属于医疗检测

技术介绍
2019新型冠状病毒，也被称为2019-nCoV，是刚刚被世界卫生组织命名的新型病毒，属于目前已知的可以感染人类的第7个冠状病毒。根据中科院的最新研究文章“EvolutionofthenovelcoronavirusfromtheongoingWuhanoutbreakandmodelingofitsspikeproteinforriskofhumantransmission”，证实2019-nCoV与2003年“非典”SARS冠状病毒和“中东呼吸综合征”MERS冠状病毒一样，同属于β属冠状病毒。通过基因序列比对，2019-nCoV与SARS-CoV的同源性达85％以上，与MERS-CoV有40％的相似性。对于新型冠状病毒的检测，《新型冠状病毒(2019-nCoV)感染的肺炎诊疗快速建议指南(标准版)》推荐对于疑似患者进行CT(电子计算机断层扫描)检查，并结合核酸检测进一步确诊。但在之前的临床中发现CT不论是在早期诊断、鉴别诊断、排除诊断，还是最终确诊方面都具有一定的局限性。目前的诊断方法以核酸检测(荧光PCR法)为主，但在临床使用过程中发现，该方法的阳性检测率也不过只有30％-50％，存在着很多已感染的患者多次采用核酸检测都显示阴性的情况。因新型冠状病毒的传染性极大，采用核酸检测的方法检测需要生物安全3级的实验室，对其设备、操作人员的技术及操作流程有着严格的规范及要求。目前的临床数据表明，核酸检测法存在着灵敏度特异性不够、检测结果不稳定等问题。胶体金免疫层析技术是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，其技术原理为以微孔滤膜(如硝酸纤维素膜)为固相载体，并利用微孔滤膜的毛细管作用，使添加于膜条一端的液体样品向另一端渗移，犹如层析一般。移动过程中，无关物越过该区域而被分离，然后通过标记物(胶体金)的聚集显色来判定检测结果。胶体金免疫技术具有操作简便、检测快速、稳定性强、特异敏感、便于携带且价格便宜、可进行双重或多重标记、结果判断直观等优点，目前已发展成为一项重要的免疫标记技术，并越来越受到相关研究领域的重视应用。
技术实现思路
本申请是利用胶体金免疫层析方法的快速、简便、稳定等优点，制备了可同时快速检测IgM/IgG二合一的快检的试纸条及试剂盒，可对新型冠状病毒IgM抗体和IgG抗体同时进行检测，从而达到降低假阴性结果出现的概率，有效提高检测灵敏度的目的，实现对广大群众的早筛普筛。为解决上述技术问题，本专利技术所采用的技术方案如下：一种新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条，包括基础板，基础板上沿长度方向设有依次相接的样品垫、金胶垫、硝酸纤维素膜层和吸水纸层，从样品垫到吸水纸层的方向上，硝酸纤维素膜层上依次设有两条检测线和一条质控线，两条检测线分别为包被鼠抗人IgM抗体的检测线和包被鼠抗人IgG抗体的检测线，一条质控线为包被兔抗鸡IgY抗体的质控线。人体在首次感染病毒后，机体的免疫系统会对病毒进行免疫防御，产生特异性的抗体。在感染病毒3-7天后会产生IgM抗体，抗体进入细胞后进一步成熟，并产生大量的IgG抗体。因此，用IgM来反应机体是不是处于急性感染状态，可以作为早期诊断的主要指标。与核酸检测方法相比，抗体检测样本为血清或血浆，受样本采样的影响较小，有利于早期诊断和排除可疑病例，同时检测快速、方便、适合大规模筛查。金标垫上的金标抗体由分别被胶体金标记好的鸡IgY单克隆抗体和新型冠状病毒N蛋白组成。上述试纸条包括两条检测线：M线(包被鼠抗人IgM抗体的检测线)和G线(包被鼠抗人IgG抗体的检测线)，一条质控线C(包被兔抗鸡IgY抗体的质控线)。其中，M线固定有单克隆抗人IgM抗体，可用于检测新型冠状病毒IgM抗体；G线固定有单克隆抗人IgG抗体，可用于检测新型冠状病毒IgG抗体；C线固定有质控抗体，可用于作为质控。将样品滴加到样品垫上，因微孔滤膜的毛细管作用，样本会沿着检测卡向前移动。若样本中含有IgM抗体，该抗体会与胶体金标记的新型冠状病毒抗原结合，形成的免疫复合物会被膜上固定的抗人IgM抗体捕获，进而M线显色，表明新型冠状病毒IgM抗体阳性；若样本中含有IgG抗体，该抗体会与胶体金标记的新型冠状病毒抗原结合，形成的免疫复合物会被膜上固定的抗人IgG抗体捕获，进而G线显色，表明新型冠状病毒IgG抗体阳性。若C线未显色，说明当次检测无效，需重新采取检测卡进行检测。检测线上的荧光强度反应了样本中被捕获的新型冠状病毒含量，经过时间分辨荧光免疫分析仪的检测计算，可达到定性或相对定量的要求。为了兼顾lgM抗体和lgG抗体的检测准确性，被胶体金标记的鸡IgY单克隆抗体和被胶体金标记的新型冠状病毒N蛋白的质量比为1:(1±0.1)。为了兼顾检测的准确性和检测效率，优选，样品垫的长度为10～12mm，金胶垫的长度为9～11mm，硝酸纤维素膜层的长度为24～26mm，吸水纸层的长度为14～16mm。为了兼顾检测的准确性和检测效率，优选，检测线与金胶垫之间间隔为4～20mm，两条检测线之间的间隔为1～6mm，质控线与其相邻的检测之间的间隔为1～6mm。上述新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条的制备方法，包括如下步骤：(1)制备胶体金溶液；(2)制备胶体金标记鸡IgY单克隆抗体；(3)制备胶体金标记新型冠状病毒N蛋白；(4)层析膜硝酸纤维素膜层的处理：检测IgM抗体捕获区：将鼠抗人IgM抗体以1.0±0.02mg/ml的浓度进行划线，划量为0.6±0.2μl/cm，划完后置于18-25℃干燥12±1小时，得包被鼠抗人IgM抗体的检测线；检测IgG抗体捕获区：将鼠抗人IgG抗体以1.0±0.02mg/ml的浓度进行划线，划量为0.6±0.2μl/cm，划完后置于18-25℃干燥12±1小时，得被鼠抗人IgG抗体的检测线；质控区C：将兔抗鸡IgY抗体按1.0±0.02mg/ml的浓度进行划线，划量为0.6±0.2μl/cm，划完后置于18-25℃干燥12小时，得包被兔抗鸡IgY抗体的质控线；(5)喷金：把标记好的鸡IgY单克隆抗体和新型冠状病毒N蛋白按照1:1的比例进行混合，按照喷量为3±0.5ul/cm进行金标抗体的喷球，喷好后置于18-25℃干燥10-12小时，得金胶垫；(6)将样品垫、金胶垫、硝酸纤维素膜层和吸水纸层按顺序贴在塑料垫上，用切割机将其切成粗细均匀的窄条，最后用试纸条专用外壳组装，得新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条。上述步骤(1)中，胶体金溶液的制备为：将质量浓度为0.03～0.04％的HAuCl4·3H2O溶液，加热至沸，并保持沸腾25-30分钟，然后加入质量浓度为2％柠檬酸三钠溶液混合煮沸，直到颜色变为橙红，室温冷本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条，包括基础板，基础板上沿长度方向设有依次相接的样品垫、金胶垫、硝酸纤维素膜层和吸水纸层，其特征在于：从样品垫到吸水纸层的方向上，硝酸纤维素膜层上依次设有两条检测线和一条质控线，两条检测线分别为包被鼠抗人IgM抗体的检测线和包被鼠抗人IgG抗体的检测线，一条质控线为包被兔抗鸡IgY抗体的质控线。/n

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条，包括基础板，基础板上沿长度方向设有依次相接的样品垫、金胶垫、硝酸纤维素膜层和吸水纸层，其特征在于：从样品垫到吸水纸层的方向上，硝酸纤维素膜层上依次设有两条检测线和一条质控线，两条检测线分别为包被鼠抗人IgM抗体的检测线和包被鼠抗人IgG抗体的检测线，一条质控线为包被兔抗鸡IgY抗体的质控线。


2.如权利要求1所述的新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条，其特征在于：金标垫上的金标抗体由被胶体金标记的鸡IgY单克隆抗体和被胶体金标记的新型冠状病毒N蛋白组成。


3.如权利要求2所述的新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条，其特征在于：被胶体金标记的鸡IgY单克隆抗体和被胶体金标记的新型冠状病毒N蛋白的质量比为1:(1±0.1)。


4.权利要求1-3任意一项所述的新型冠状病毒IgM/IgG二合一快速检测的试纸条的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
(1)制备胶体金溶液；
(2)制备胶体金标记鸡IgY单克隆抗体；
(3)制备胶体金标记新型冠状病毒N蛋白；
(4)层析膜硝酸纤维素膜层的处理：
检测IgM抗体捕获区：将鼠抗人IgM抗体以1.0±0.02mg/ml的浓度进行划线，划量为0.6±0.2μl/cm，划完后置于18-25℃干燥12±1小时，得包被鼠抗人IgM抗体的检测线；
检测IgG抗体捕获区：将鼠抗人IgG抗体以1.0±0.02mg/ml的浓度进行划线，划量为0.6±0.2μl/cm，划完后置于18-25℃干燥12±1小时，得被鼠抗人IgG抗体的检测线；
质控区C：将兔抗鸡IgY抗体按1.0±0.02mg/ml的浓度进行划线，划量为0.6±0.2μl/cm，划完后置于18-25℃干燥12小时，得包被兔抗鸡IgY抗体的质控线；
(5)喷金：把胶体金标记鸡IgY单克隆抗体和胶体金标记新型冠状病毒N蛋白按照1:(1±0.1)的比例进行混合，按照喷量为3±0.5ul/cm进行金标抗体的喷球，喷好后置于18-25℃干燥10-12小时，得金胶垫；
(6)将样品垫、金胶垫、硝酸纤维素膜层和吸水纸层按顺序贴在塑料垫上，用切割机将其切成粗细均匀的窄条，装上外壳，得新型冠状病毒...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐声乐，郑超，张明航，赵晓芳，吴卫卫，
申请(专利权)人：江苏苏博生物医学科技南京有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32