CD9P-1-靶向抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及抑制CD9P‑1途径，优选抑制CD9P‑1/稳定素‑1途径和/或CD9P‑1/TRAF‑2途径的分离的蛋白质，尤其涉及针对人CD9P‑1的分离的抗体，及其在治疗或诊断方法中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD9P-1-靶向抗体及其用途
本专利技术涉及靶向人分化群9伴侣1(CD9P-1)的蛋白质，特别是涉及针对CD9P-1的新型抗体，及其在治疗和诊断方法中的用途。
技术介绍
化学抗性肿瘤转移的不可阻挡的生长和扩散是癌症死亡的主要原因之一。肿瘤转移可能源于克隆分裂，并起源于许多不同的祖细胞。此外，与非肿瘤细胞相比，转移细胞表现出更高的自发突变率和有缺陷的DNA修复机制。所有这些都可以解释由于转移对同一化学疗法的敏感性广泛，对常规治疗药物无反应的患者的存在。因此，操纵宿主对癌细胞免疫应答的癌症免疫疗法，连同手术、细胞毒性治疗和放射疗法，已成为癌症治疗的基石之一。使用抗CTL4和抗PDL1/抗PD1单克隆抗体进行免疫检查点阻断的最新临床结果已经明确地将免疫疗法确立为治疗癌症的一种非常有前途的方法。检查点抑制剂(CPI，也可以称为免疫检查点抑制剂或ICI)靶向正常免疫细胞，以刺激抗肿瘤应答。它们通过阻断在T细胞上表达的抑制性受体与其配体之间的相互作用来发挥作用。在多种类型的癌症中证明了它们的功效。但是，仅一部分患者对这些疗法有反应，并且需要新的免疫治疗靶标。靶向肿瘤相关的巨噬细胞也被认为是一种有前途的免疫治疗策略。实际上，杀伤肿瘤的巨噬细胞是实体瘤中肿瘤基质的主要成分，能够识别、摄取和降解赘生细胞，而不会损害转移性细胞，这使其成为预防和治疗肿瘤发生的出色靶标。因此，目前正在临床试验中测试以下策略，以开发新的抗癌疗法：抑制巨噬细胞募集进入肿瘤环境(CSF-1R抑制剂)，开发杀伤肿瘤的效应子(BCG)，诱导M2TAM耗尽或将其“再教育”为抗肿瘤效应子，即“类似M1”的模式(抗CD40)；以及开发引发癌细胞的吞噬作用和细胞内破坏的肿瘤靶向的单克隆抗体(抗CD47)。同时采用非特异性先天免疫和抗原特异性、促进记忆的适应性免疫来破坏肿瘤的策略，是最有前途的癌症疗法。治疗组合诱导由先天免疫元件和/或适应性免疫元件驱动的抗肿瘤应答，先天免疫元件包括例如自然杀伤细胞(NK)、巨噬细胞、粒细胞和树突状细胞，它们通过激活细胞凋亡、吞噬作用和共刺激途径诱导细胞死亡，适应性免疫元件尤其是淋巴细胞(B细胞和T细胞)参与体液免疫应答(B细胞)或细胞介导的免疫应答(T细胞)。T细胞的有效激活需要两个单独的T细胞受体的参与。抗原特异性T细胞受体(TCR)结合外源肽抗原-MHC复合体，而CD28受体结合在抗原呈递细胞(APC)表面表达的B7(CD80/CD86)共刺激分子上，该抗原呈递细胞可以是单核细胞、巨噬细胞、树突状细胞或B淋巴细胞。四次穿膜蛋白对肿瘤发生有各种贡献，特别是通过支持肿瘤生长、扩散和血管生成。CD9是研究最多的四次穿膜蛋白：已知它在多细胞事件中起作用，包括膜融合、分化和细胞运动，并且似乎在转移中起关键作用。临床观察结果表明，CD9的下调与实体瘤的进展有关。四次穿膜蛋白形成具有四个跨膜结构域的蛋白质家族，该结构域描绘了两个大小不等的细胞外结构域，它们参与许多生理过程，包括血管生成、细胞迁移、细胞与细胞的接触和融合。认为四次穿膜蛋白的功能与其相互之间以及与其他各种表面蛋白相互作用，形成称为四次穿膜蛋白网的分子相互作用网络的能力有关。通过它们的伴侣蛋白相互作用，四次穿膜蛋白也参与了针对癌症的免疫应答。四次穿膜蛋白通过模式识别受体(PRR)的组织化及其下游诱导的信号传送，以及MHC-II-肽运输的调节，参与抗原呈递细胞(APCs)的抗原识别和呈递。CD9调节单核细胞来源的树突状细胞中MHC-II的运输。CD81调节癌症和转移中的免疫抑制。属于免疫球蛋白超家族(IgSF)的CD9伴侣1(也称为“CD9P-1”、“FPRP”或“EWI-F”)与CD9、CD81和CD151关联，因此位于四次穿膜蛋白网上。CD9P-1是糖基化的1型整合膜蛋白，与脂质微结构域相关，并由一大批癌细胞系超表达。已经证明CD9P-1基因表达与癌症的转移状态相关，因此认为CD9P-1可能是实体瘤中CD9表达丧失的主要贡献者。特别是，GS-168AT2，即截短形式的CD9P-1，有效抑制裸鼠中肿瘤诱导的血管生成，从而限制体内肿瘤的生长。而且，用CD9P-1编码载体转染人胚胎肾细胞(HEK293)显著增加了细胞迁移，即最可能是肿瘤细胞侵染。因此，迫切需要开发用于癌症治疗的CD9P-1特异性抑制剂。本专利技术人已经开发了特异性靶向CD9P-1蛋白的单克隆抗体(以下称为9bF4和10bB1)。令人惊讶的是，这些抗体实际上自身具有有效抗癌活性，特别是通过诱导癌细胞凋亡。临床前和临床研究已经表明，巨噬细胞可能是各种癌症中肿瘤的主要成分，通过促进血管生成和转移，使得预后不良。认为这些肿瘤相关的巨噬细胞(TAM)表达M2表型。本专利技术的抗体令人惊讶地显示出触发M2至M1巨噬细胞的复极化，从而限制了M2态TAM的有害抗炎和促癌作用。而且，有利地证明了本专利技术的抗体通过单核细胞和淋巴细胞增殖/活化诱导癌细胞凋亡。因此，9bF4和10bB1抗体构成了迄今为止已知的癌症疗法的出乎意料的有利替代方案，因为它们能够例如诱导TNF-α和IFN-γ的表达，TNF-α和IFN-γ是免疫应答的两种主要杀伤肿瘤的细胞因子和效应子，并且没有其重组对应物的缺点(例如，难以大量生产，长期保存后丧失生物学活性，向患者施用会产生副作用等)。因此，本专利技术涉及靶向人CD9P-1的新型分离蛋白质，特别是涉及针对CD9P-1的新型抗体，及其治疗剂和诊断剂。
技术实现思路
本专利技术涉及抑制CD9P-1途径，优选抑制CD9P-1/稳定素-1(Stabilin-1)途径和/或CD9P-1/TRAF-2途径的分离的蛋白质。在一个实施方案中，所述蛋白质诱导CD9P-1的内化和/或降解，并且优选还诱导稳定素-1的内化和/或降解和/或TRAF-2的降解。在一个实施方案中，本专利技术的蛋白质与CD9P-1结合，优选，所述蛋白质是选自由以下组成的组的抗体分子：完整抗体、人源化抗体、单链抗体、二聚体单链抗体、Fv、Fab、F(ab)'2、去岩藻糖基化抗体、双特异性抗体、双价抗体、三价抗体(triabody)、四价抗体(tetrabody)，选自由单抗体(unibody)、结构域抗体和纳米抗体组成的组的抗体片段，或选自由亲和体(affibody)、affilin、affitin、adnectin、atrimer、evasin、DARPin、anticalin(抗运载蛋白)、avimer、fynomer、versabody和duocalin组成的组的抗体模拟物。在一个实施方案中，本专利技术的蛋白质结合包含以下的构象表位：-来自人CD9P-1(SEQIDNO:34)的氨基酸残基202-232的至少一个氨基酸残基，或来自与人CD9P-1(SEQIDNO:34)的氨基酸残基202-232享有至少60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的序列的至少一个氨基酸残基，和-来自人CD9P-1(SEQIDNO:34)的氨基酸残基422-442的至少一个氨基酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的蛋白质，其抑制CD9P-1途径，优选抑制CD9P-1/稳定素-1途径和/或CD9P-1/TRAF-2途径。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170728 EP 17306017.9;20170728 US 62/538,1061.一种分离的蛋白质，其抑制CD9P-1途径，优选抑制CD9P-1/稳定素-1途径和/或CD9P-1/TRAF-2途径。


2.根据权利要求1所述的分离的蛋白质，其中所述蛋白质诱导CD9P-1的内化和/或降解，并且优选还诱导稳定素-1的内化和/或降解和/或TRAF-2的降解。


3.根据权利要求1或权利要求2所述的分离的蛋白质，其中所述蛋白质结合CD9P-1，优选其中所述蛋白质是选自由以下组成的组的抗体分子：完整抗体、人源化抗体、单链抗体、二聚体单链抗体、Fv、Fab、F(ab)'2、去岩藻糖基化抗体、双特异性抗体、双价抗体、三价抗体、四价抗体，选自由单抗体(unibody)、结构域抗体和纳米抗体组成的组的抗体片段，或选自由亲和体、affilin、affitin、adnectin、atrimer、evasin、DARPin、anticalin、avimer、fynomer、versabody和duocalin组成的组的抗体模拟物。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的分离的蛋白质，其中所述蛋白质结合构象表位，所述构象表位包含：
-来自人CD9P-1(SEQIDNO:34)的氨基酸残基202-232的至少一个氨基酸残基，或来自与人CD9P-1(SEQIDNO:34)的氨基酸残基202-232享有至少60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的序列的至少一个氨基酸残基；和
-来自人CD9P-1(SEQIDNO:34)的氨基酸残基422-442的至少一个氨基酸残基，或来自与人CD9P-1(SEQIDNO:34)的氨基酸残基422-442享有至少60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的序列的至少一个氨基酸残基；和
-来自人CD9P-1(SEQIDNO:34)的氨基酸残基472-502的至少一个氨基酸残基，或来自与人CD9P-1(SEQIDNO:34)的氨基酸残基472-502享有至少60％、70％、75％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％同一性的序列的至少一个氨基酸残基。


5.根据权利要求3或权利要求4所述的针对人CD9P-1的分离的抗体，其中重链可变区包含下述CDR中的至少一个：
VH-CDR1:GYTFTSYW(SEQIDNO:1)；
VH-CDR2:IFPGTGTT(SEQIDNO:2)；和
VH-CDR3:SRDFDV(SEQIDNO:3)，
或具有与SEQIDNO:1-3享有至少60％同一性的氨基酸序列的任何CDR，和/或
其中轻链可变区包含下述CDR中的至少一个：
VL-CDR1:QSLLDIDGKTY(SEQIDNO:4)；
VL-CDR2:LVS；和
VL-CDR3:WQGTHLPRT(SEQIDNO:5)，
或具有与SEQIDNO:4、LVS和SEQIDNO:5享有至少60％同一性的氨基酸序列的任何CDR。


6.根据权利要求3-5中任一项所述的针对人CD9P-1的分离的抗体，其中所述重链可变区包含至少一个权利要求4所定义的CDR，并且所述轻链可变区包...

【专利技术属性】
技术研发人员：S·科兰，
申请(专利权)人：基因信号国际公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH