含核酸脂质纳米粒子及其用途制造技术

本发明专利技术提供了一种脂质纳米粒子，其含有以下组分(a)至(c)：(a)编码嵌合抗原受体(CAR)或外源性T细胞受体(TCR)的核酸；(b)阳离子脂质；和(c)非阳离子脂质。本发明专利技术还提供了一种表达CAR或表达外源性TCR的免疫细胞，其通过将所述脂质纳米粒子引入体内或离体T细胞而产生；以及一种使用所述免疫细胞治疗包括癌症的疾病的体内或离体治疗手段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】含核酸脂质纳米粒子及其用途
本专利技术涉及含有编码嵌合抗原受体或T细胞受体的核酸的脂质纳米粒子；通过使用所述脂质纳米粒子在感兴趣的免疫细胞中表达嵌合抗原受体或外源性T细胞受体的方法；其药物用途；等。
技术介绍
使用引入了源自癌症抗原特异性杀伤T细胞的嵌合抗原受体(CAR)或T细胞受体(TCR)的基因的CAR-T细胞或TCR-T细胞进行癌症免疫疗法的研究和发展进展迅速。当前的CAR-T细胞疗法，诸如在美国获得批准的Kymriah(商品名)和Yescarta(商品名)，通常包括通过使用病毒载体诸如慢病毒载体转染从具有CAR基因的患者收集的离体T细胞来制备CAR-T细胞，并向患者施用CAR-T细胞。然而，该方法的问题在于，由于细胞培养和病毒载体制备的成本，生产成本变高。如果可以将CAR或外源性TCR选择性地引入体内免疫细胞例如T细胞，那么无需离体制备，并且可以提供生产成本低的CAR-或TCR-免疫细胞疗法。另外，如果可以在不使用需要高生产成本的病毒载体的情况下将CAR或外源性TCR选择性地离体引入免疫细胞例如T细胞，那么消除了病毒残留检测等的成本，并且可以提供生产成本低的CAR-或TCR-免疫细胞疗法。已经报道了CAR向T细胞的离体或体内转染，其使用含有编码CAR的质粒DNA和阳离子聚合物的聚集体的纳米粒子，所述聚集体被与抗CD3抗体片段缀合的非阳离子聚合物包被(专利文献1，非专利文献1)；或者使用含有介孔二氧化硅的纳米载体，所述介孔二氧化硅在孔中包封了编码CAR的DNA并包被有具有被抗CD3抗体修饰的表面的脂质(专利文献2)。除此之外，已经报道了通过将靶siRNA包封在“脂质纳米粒子(LNP)”中将siRNA递送至靶细胞的技术，所述“脂质纳米粒子(LNP)”没有内部孔结构并且由阳离子脂质、非阳离子辅助脂质以及用于递送至靶细胞的配体组成。例如，已经报道了通过使用抗CD4抗体片段作为靶向配体将用于CD45的siRNA离体或体内转染到T细胞中(专利文献3，非专利文献2)。然而，迄今为止，没有报道通过使用LNP将编码CAR或外源性TCR的核酸(例如，mRNA，DNA)选择性地引入免疫细胞例如T细胞中。现有技术文献专利文献专利文献1：US2017/0296676专利文献2：US2016/0145348专利文献3：WO2016/189532非专利文献非专利文献1：NatureNanotechnology12，813-820(2017)非专利文献2：ACSNano，2015，9(7)，6706-6716
技术实现思路
技术问题本专利技术的目的是提供一种新颖的转染技术，其能够有效地将CAR或外源性TCR选择性地引入体内或离体的免疫细胞诸如T细胞，从而以低生产成本提供CAR-或TCR-免疫细胞疗法。本专利技术的另一个目的是提供一种避免病毒蛋白抗原性问题的更安全的CAR-或TCR-免疫细胞疗法。问题的解决方案为了实现上述目的，本专利技术人进行了深入研究，并成功地通过使用LNP有效地将编码CAR或外源性TCR的核酸选择性地引入体内或离体的免疫细胞诸如T细胞中，从而完成了本专利技术。因此，本专利技术提供以下内容。[1]一种脂质纳米粒子，其包含以下(a)至(c)：(a)编码嵌合抗原受体或外源性T细胞受体的核酸；(b)阳离子脂质；和(c)非阳离子脂质。[2][1]的脂质纳米粒子，其中前述阳离子脂质为式(I)表示的化合物或其盐：其中L1为C1-22亚烷基、C2-22亚烯基或C3-22亚二烯基，n为0或1的整数，R1为(1)氢原子，(2)直链C1-22烷基，其任选地被一个或两个选自直链C1-22烷基和直链C2-22烯基的取代基取代，(3)直链C2-22烯基，其任选地被一个或两个选自直链C1-22烷基和直链C2-22烯基的取代基取代，或(4)直链C3-22二烯基，其任选地被一个或两个选自直链C1-22烷基和直链C2-22烯基的取代基取代，R2为-CH2-O-CO-R5、-CH2-CO-O-R5或-R5，R3为-CH2-O-CO-R6、-CH2-CO-O-R6或-R6，R4为氢原子、-CH2-O-CO-R7、-CH2-CO-O-R7或-R7，R5、R6和R7各自独立地为(1)直链C1-22烷基，其任选地被一个或两个选自直链C1-22烷基和直链C2-22烯基的取代基取代，(2)直链C2-22烯基，其任选地被一个或两个选自直链C1-22烷基和直链C2-22烯基的取代基取代，或(3)直链C3-22二烯基，其任选地被一个或两个选自直链C1-22烷基和直链C2-22烯基的取代基取代，R8和R9各自独立地为C1-6烷基。[3][1]或[2]的脂质纳米粒子，其中前述核酸为mRNA或DNA。[4][1]至[3]中任一项的脂质纳米粒子，其中前述非阳离子脂质为磷脂、胆固醇和/或PEG脂质。[5][1]至[4]中任一项的脂质纳米粒子，其中前述脂质纳米粒子在表面上具有可以靶向T细胞的配体。[6][5]的脂质纳米粒子，其中前述配体是包含选自以下的一种或多种抗体的抗原结合结构域的配体：抗CD3的抗体、抗CD4的抗体、抗CD8的抗体和抗CD28的抗体。[7][5]的脂质纳米粒子，其中前述配体是包含抗CD3的抗体和/或抗CD28的抗体的抗原结合结构域的配体。[8][5]的脂质纳米粒子，其中前述配体是包含抗CD3的抗体和抗CD28的抗体的抗原结合结构域的配体。[9]一种药物，其包含[1]至[8]中任一项的脂质纳米粒子。[10][9]的药物，其中所述药物是用于癌症的预防或治疗药物。[11][9]的药物，其中所述药物将嵌合抗原受体或外源性T细胞受体基因引入体内免疫细胞以诱导其表达。[12][9]的药物，其中所述药物将嵌合抗原受体或外源性T细胞受体基因引入体内T细胞以诱导其表达。[13]一种通过将嵌合抗原受体或外源性T细胞受体引入哺乳动物的体内免疫细胞来表达所述受体的方法，所述方法包含向所述哺乳动物施用[1]至[8]中任一项的脂质纳米粒子。[14]一种通过将嵌合抗原受体或外源性T细胞受体引入哺乳动物的体内T细胞来表达所述受体的方法，所述方法包含向所述哺乳动物施用[1]至[8]中任一项的脂质纳米粒子。[15]一种用于预防或治疗哺乳动物中的癌症的方法，所述方法包含向所述哺乳动物施用[1]至[8]中任一项的脂质纳米粒子。[16][1]至[8]中任一项的脂质纳米粒子，其用于预防或治疗癌症。[17][1]至[8]中任一项的脂质纳米粒子在制造用于预防或治疗癌症的药剂中的用途。[18]一种用于诱导嵌合抗原受体或外源性T细胞受体表达的组合物，其包含[1]至[8]中任一项的脂质纳米粒子。[19]一种离体免疫细胞，其表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脂质纳米粒子，其包含以下(a)至(c)：/n(a)编码嵌合抗原受体或外源性T细胞受体的核酸；/n(b)阳离子脂质；和/n(c)非阳离子脂质。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171227 JP 2017-2526161.一种脂质纳米粒子，其包含以下(a)至(c)：
(a)编码嵌合抗原受体或外源性T细胞受体的核酸；
(b)阳离子脂质；和
(c)非阳离子脂质。


2.根据权利要求1所述的脂质纳米粒子，其中前述阳离子脂质为式(I)表示的化合物或其盐：



其中
L1为C1-22亚烷基、C2-22亚烯基或C3-22亚二烯基，
n为0或1的整数，
R1为
(1)氢原子，
(2)直链C1-22烷基，其任选地被一个或两个选自直链C1-22烷基和直链C2-22烯基的取代基取代，
(3)直链C2-22烯基，其任选地被一个或两个选自直链C1-22烷基和直链C2-22烯基的取代基取代，或
(4)直链C3-22二烯基，其任选地被一个或两个选自直链C1-22烷基和直链C2-22烯基的取代基取代，
R2为-CH2-O-CO-R5、-CH2-CO-O-R5或-R5，
R3为-CH2-O-CO-R6、-CH2-CO-O-R6或-R6，
R4为氢原子、-CH2-O-CO-R7、-CH2-CO-O-R7或-R7，
R5、R6和R7各自独立地为
(1)直链C1-22烷基，其任选地被一个或两个选自直链C1-22烷基和直链C2-22烯基的取代基取代，
(2)直链C2-22烯基，其任选地被一个或两个选自直链C1-22烷基和直链C2-22烯基的取代基取代，或
(3)直链C3-22二烯基，其任选地被一个或两个选自直链C1-22烷基和直链C2-22烯基的取代基取代，
R8和R9各自独立地为C1-6烷基。


3.根据权利要求1所述的脂质纳米粒子，其中前述核酸为mRNA或DNA。


4.根据权利要求1所述的脂质纳米粒子，其中前述非阳离子脂质为磷脂、胆固醇和/或PEG脂质。


5.根据权利要求1所述的脂质纳米粒子，其中前述脂质纳米粒子在表面上具有能够靶向T细胞的配体。


6.根据权利要求5所述的脂质纳米粒子，其中前述配体是包含选自以下的一种或多种抗体的抗原结合结构域的配体：抗CD3的抗体、抗CD4的抗体、抗CD8的抗体和抗CD28的抗体。


7.根据权利要求5所述的脂质纳米粒子，其中前述配体是包含抗CD3的抗体和/或抗CD28的抗体的抗原结合结构域的配体。


8.根据权利要求5所述的脂质纳米粒子，其中前述配体是包含抗CD3的抗体和抗CD28的抗体的抗原结合结构域的配体。


9.一种药物，其包含根据权利要求1所述的脂质纳米粒子。


10.根据权利要求9所述的药物，其中所述药物是用于癌症的预防或治疗药物。


11.根据权利要求9所述的药物，其中所述药物将嵌合抗原受体或外源性T细胞受体基因引入体内免疫细胞以诱导其表达。


12.根据权利要求9所述的药物，其中所述药物将嵌合抗原受体或外源性T细胞受体基因引入体内T细胞以诱导其表达。


13.一种通过将嵌合抗原受体或外源性T细胞受体引入哺乳动物的体内免疫细胞来表达所述受体的方法，所述方法包含向所述哺乳动物施用根据权利要求1所述的脂质纳米粒子。


14.一种通过将嵌合抗原受体或外源性T细胞受体引入哺乳动物的体内T细胞来表达所述受体的方法，所述方法包含向所述哺乳动物施用根据权利要求1所述的脂质纳米粒子。


15.一种用于预防或治疗哺乳动物中的癌症的方法，所述方法包含向所述哺乳动物施用根据权利要求1所述的脂质纳米粒子。


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【专利技术属性】
技术研发人员：桑江忍，松本悟，
申请(专利权)人：武田药品工业株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP