一种用于检测手足口病的标志物组合及抗体芯片和试剂盒制造技术

本发明专利技术提供一种用于检测手足口病的标志物组合及抗体芯片和试剂盒，用于检测手足口病的标志物组合，包括以下标志物中的至少一种：OPN、APRIL、TRAIL R1、MIP‑3b、TWEAK、BLC、ICOS、ICAM‑1、Pentraxin 3。上述标志物组合能够可靠地反映机体的手足口病状态，对手足口病的检测具有较高的灵敏度、特异性和准确性。利用上述标志物组合进行针对手足口病的检测，只需要几十到几百微升的外周血，可以很轻易地通过静脉采血或者更加简单的末梢采血的方式采集样本，极大地减轻了患儿的痛苦和资金花费。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测手足口病的标志物组合及抗体芯片和试剂盒
本专利技术属于生物
，具体地，涉及一种用于检测手足口病的标志物组合及抗体芯片和试剂盒。
技术介绍
手足口病(Handfootandmouthdisease，HFMD)是一种由肠道病毒引起的常见儿童传染病，又名发疹性水疱性口腔炎，多发生于3岁及3岁以下婴幼儿童，可引起手、足、口腔等部位的疱疹或者皮疹，少数患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜炎等并发症。个别重症患儿如果病情发展快，易导致死亡。该病以手、足和口腔粘膜疱疹或破溃后形成溃疡为主要临床症状。手足口病是由肠道病毒引起的传染病，其传染性强，传播途径复杂，传播快，在短时间内即可造成大流行。引发手足口病的肠道病毒有20多种(型)，其中以柯萨奇病毒A16型(CoxA16)和肠道病毒71型(EV71)最为常见。针对HFMD的病毒类型，目前常用诊断方法为血清学中和实验、病原学细胞接种、分子生物学逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)或real-timeRT-PCR(rRT-PCR)等。这些方法在不同的领域发挥着相应的重要作用，但相应的也暴露出一些问题：这些方法都比较繁琐且对相应的试剂和临床样本需求量较大，咽试子和肛试子等标本成分复杂，病毒载量低，易出现假阴性，另外检测的费用高，易产生交叉反应，且需要专业人士进行操作，否则很难保证最终结果的准确性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于检测手足口病的标志物组合及检测芯片和试剂盒，以实现针对手足口病的高灵敏度、高特异性检测。根据本专利技术的一个方面，提供一种用于检测手足口病的标志物组合，包括以下标志物中的至少一种：OPN、APRIL、TRAILR1、MIP-3b、TWEAK、BLC、ICOS、ICAM-1、Pentraxin3。优选地，同时包括以下九种标志物：OPN、APRIL、TRAILR1、MIP-3b、TWEAK、BLC、ICOS、ICAM-1、Pentraxin3。根据本专利技术的另一个方面，提供一种用于检测手足口病的抗体芯片：包括固相载体和包被于固相载体表面的捕获抗体，捕获抗体为针对上述用于检测手足口病的标志物组合的特异性抗体。优选地，固相载体为玻片。优选地，固相载体为表面包被有氨基的玻片。根据本专利技术的另一个方面，提供一种用于检测手足口病的试剂盒：包含捕获抗体，捕获抗体为针对上述用于检测手足口病的标志物组合的特异性抗体。优选地，包括固相载体，捕获抗体包被在固相载体的表面。优选地，还包括以下组分：抗体混合液，所含抗体混合液中包含有被生物素标记的检测抗体，检测抗体为针对上述用于检测手足口病的标志物组合的特异性抗体；链霉亲和素：链霉亲和素标记有荧光染料，荧光染料为Cy3或具有类似吸收波长的荧光染料。优选地，还包括标志物标准品，标志物标准品包括如权利要求1或2用于检测手足口病的标志物组合。本专利技术提供的用于检测手足口病的标志物组合能够可靠地反映机体的手足口病状态，对手足口病的检测具有较高的灵敏度、特异性和准确性。利用上述标志物组合进行针对手足口病的检测，只需要几十到几百微升的外周血，可以很轻易地通过静脉采血或者更加简单的末梢采血的方式采集样本，极大地减轻了患儿的痛苦和资金花费。利用由上述标志物组合制备得到的高通量抗体芯片、试剂盒对儿童进行针对手足口病的判断，能够快速地区分健康儿童、手足口病轻症患儿和手足口病重症患儿，为手足口病的预防、治疗提供可靠的数据支持，促进了手足口病的早期发现、早期诊断，有利于提高手足口病患者的临床治疗效果。附图说明图1为实施例1中手足口病标志物的筛选流程图；图2为分别对应九种标志物因子的ROC曲线图，其中，(a)为OPN的ROC曲线图，(b)为APRIL的ROC曲线图，(c)为TRAILR1的ROC曲线图，(d)为MIP-3b的ROC曲线图，(e)为TWEAK的ROC曲线图，(f)为BLC的ROC曲线图，(g)为ICOS的ROC曲线图，(h)为ICAM-1的ROC曲线图，(i)为Pentraxin3的ROC曲线图；图3为基于NNET获取的九种标志物因子的ROC曲线图；图4为基于SVM获取的九种标志物因子的ROC曲线图；图5为基于LDA获取的九种标志物因子的ROC曲线图。具体实施方式为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。实施例1手足口病标志物的筛选图1展示了本实施例的筛选过程中所涉及的大致流程，具体过程如下所述。S1.样本采集首先通过挑选健康儿童、轻症手足口病和重症患儿作为研究对象，通过个体指标(如年龄、性别等)和临床指标(如手足口病分期)的综合考察，选取健康儿童、轻症手足口病和重症患儿各30名志愿者，采集志愿者血清。S2.生物因子的定量检测通过吸附在基板表面的抗体与待测生物因子及生物素标记的检测抗体形成抗体-蛋白-抗体的夹心(夹心ELISA技术)，再加入链亲和素标记的荧光素，在激光激发下扫描成像，从而精确地定量检测血清样本中的440种生物因子，这些生物因子包括细胞因子、血管生成因子、炎症因子、生长因子、趋化因子、凋亡因子、受体类细胞因子、激素等。S3.数据整理和分析蛋白芯片得到的数据首先会通过内参来进行归一化处理，内参是一组已知浓度的蛋白质混合物。采用内参标准品得出目标因子的标准品曲线，根据标准品曲线测定蛋白浓度。数据将在不同实验组间进行比较并计算p值，挑选p值小于0.05的，有显著差异的指标进行聚类分析，以寻找可以将不同实验组进行区分的生物标记物组，获取差异表达蛋白谱。得到的生物标志物组进行受试者工作特征曲线(ROC)分析和模型建立，找到对手足口病状态的区分有价值的生物标记物。将筛选得到的标志物组合与临床检测的结果、文献报道的标记物进行对比，包括生物标记物表达水平差异与病理学检测，以进一步修正生物标记物组合。筛选结果：筛选得到九种标志物对评定手足口病的状态有价值，这九种标志物为骨桥蛋白(OPN)、增殖诱导配体(APRIL)、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体(TRAILR1)、巨噬细胞炎性蛋白3β(MIP-3b)、肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导因子(TWEAK)、人B-淋巴细胞趋化因子(BLC)、可诱导共刺激分子(ICOS)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和炎症因子正五聚素蛋白3(Pentraxin3)。实施例2标志物组合的建模(一)建模方式采用了5-折交叉验证(5-foldcrossvalidation)并重复5次(5-timerepeat)的方法建立分类模型：每一回合把样本N随机平均分成训练组k-1和测试组1，重复5次，就会得到5个模型，用5个模型最终的测试组的分类准确率的平均数作为此下分类样本的性能指标。此筛选方法的优点是每一回合中几乎所有的样本皆用于训练模本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测手足口病的标志物组合，其特征在于，包括以下标志物中的至少一种：OPN、APRIL、TRAIL R1、MIP-3b、TWEAK、BLC、ICOS、ICAM-1、Pentraxin 3。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测手足口病的标志物组合，其特征在于，包括以下标志物中的至少一种：OPN、APRIL、TRAILR1、MIP-3b、TWEAK、BLC、ICOS、ICAM-1、Pentraxin3。


2.如权利要求1所述用于检测手足口病的标志物组合，其特征在于，同时包括以下九种标志物：OPN、APRIL、TRAILR1、MIP-3b、TWEAK、BLC、ICOS、ICAM-1、Pentraxin3。


3.一种用于检测手足口病的抗体芯片，其特征在于：包括固相载体和包被于所述固相载体表面的捕获抗体，所述捕获抗体为针对如权利要求1或2所述用于检测手足口病的标志物组合的特异性抗体。


4.如权利要求3所述用于检测手足口病的抗体芯片，其特征在于：所述固相载体为玻片。


5.如权利要求4所述用于检测手足口病的抗体芯片，其特征在于：所述固相载体为...

【专利技术属性】
技术研发人员：张惠华，毛应清，黄若磐，
申请(专利权)人：广州瑞博奥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44