一种STAT3磷酸化抑制剂及制备治疗急性髓系白血病药物的用途制造技术

本发明专利技术公开了一种STAT3磷酸化抑制剂及制备治疗急性髓系白血病药物的用途。本发明专利技术发现，哌嗪衍生物1～4对MV4‑11细胞的增殖均具有显著的抑制作用，其可能是通过抑制STAT3的磷酸化抑制其激活进而抑制MV4‑11细胞的增殖，哌嗪衍生物1～4可能是有效的STAT3磷酸化抑制剂，可以开发成治疗急性髓系白血病的药物。

【技术实现步骤摘要】
一种STAT3磷酸化抑制剂及制备治疗急性髓系白血病药物的用途
本专利技术涉及医药领域，具体涉及一种STAT3磷酸化抑制剂及制备治疗急性髓系白血病药物的用途。
技术介绍
急性髓系白血病(AML)是一种异质性疾病，源于白血病细胞恶性生长和分化，导致骨髓中未成熟的造血干细胞异常增殖，使正常的造血功能受损，骨髓衰竭，最终导致患者死亡。近年来，AML的治疗已取得很大进展，但仍有相当部分患者出现复发或耐药，只有40％～45％的年轻AML患者和不足10％的老年AML患者生存期超过5年。因此，探索新药是目前AML的研究重点之一。研究表明，STAT3与多种肿瘤的发病有关。有观点认为，STAT3异常激活能影响急性髓系白血病细胞株群的自主增殖，且影响AML患者的无病生存期(DFS)，而抑制STAT3磷酸化可诱导AML细胞株的凋亡及抑制AML集落形成；STAT3的靶向治疗不仅能直接抑制肿瘤细胞生长，也能增强抗癌免疫力。因此，STAT3磷酸化抑制剂有望用于开发成治疗AML的药物。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种STAT3磷酸化抑制剂及制备治疗急性髓系白血病药物的用途。实现上述目的的技术方案如下：如下化学结构的化合物用于制备STAT3蛋白磷酸化抑制剂的用途：R为-CH3或-OCH2CH3。上述STAT3蛋白磷酸化抑制剂用于制备治疗急性髓系白血病药物的用途。一种用于治疗急性髓系白血病的药物，含有上述STAT3蛋白磷酸化抑制剂。有益效果：本专利技术发现，哌嗪衍生物1～4对MV4-11细胞的增殖均具有显著的抑制作用，其可能是通过抑制STAT3的磷酸化抑制其激活进而抑制MV4-11细胞的增殖，哌嗪衍生物1～4可能是有效的STAT3磷酸化抑制剂，可以开发成治疗急性髓系白血病的药物。附图说明图1为哌嗪衍生物1～4的化学结构式；图2为WesternBlot结果图。具体实施方式一、试验材料人AML细胞株MV4-11细胞购自美国ATCC公司，液氮冻存。哌嗪衍生物1～4的化学结构式如图1所示，纯度均不低于98.5％，配制成药物溶液备用。RPMI1640培养液、胎牛血清购自Gibco。青霉素、链霉素购自Sigma。CCK8检测试剂盒购自南京碧云天生物。二、试验方法1、细胞培养将液氮冻存的人AML细胞株MV4-11细胞按照常规方法复苏后悬浮培养在含10％胎牛血清、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素的RPMI1640培养液中，在37℃、5％CO2、饱和湿度的恒温培养箱中培养，每2～3d换液传代，取对数生长期的细胞进行实验。2、CCK8法测定药物对MV4-11细胞的增殖抑制作用取对数生长期的MV4-11细胞，消化重悬后制成密度为1.5×105/mL的细胞悬浮液，按照每孔90μL的接种量接种于96孔板，并加入10μL不同浓度的药物溶液，使药物的终浓度分别为1.25、2.5、5、10、20、40、80nM，每个浓度设3个复孔，并设不加药培养的细胞为对照组，另设不含细胞的培养液为空白组，置于37℃、5％CO2、饱和湿度的恒温培养箱中培养48h，每孔加入10μL的CCK8试剂，孵育4h后在酶联免疫检测仪450nm波长处测定每孔OD450值，取3孔平均值，按如下公式测算增殖抑制率并计算出IC50值。平行操作三份。增殖抑制率(％)＝[1－(OD药物组－OD空白组)/(OD对照组－OD空白组)]×100％。3、WesternBlot法测定药物对MV4-11细胞中STAT3蛋白磷酸化水平的影响取对数生长期的MV4-11细胞，消化重悬后制成密度为1.5×105/mL的细胞悬浮液，接种于细胞培养瓶中，并加入药物溶液使药物的终浓度为20nM，并设不加药培养的细胞为对照组，置于37℃、5％CO2、饱和湿度的恒温培养箱中培养48h，收集细胞，加入细胞裂解液混匀后冰上裂解40min，离心收集上清，BCA法检测蛋白浓度。取40μg总蛋白进行SDS-PAGE电泳，转膜、封闭后，加入p-STAT3、β-actin一抗，于4℃孵育过夜，次日加入相应的二抗，室温避光孵育120min，PBST洗去未结合的二抗，用化学发光显色后进行图像分析，采用ImageJ软件对显影的条带进行灰度分析。4、统计学分析采用软件SPSS17.0进行统计学分析处理，计量数据以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。三、试验结果1、药物对MV4-11细胞的增殖抑制作用哌嗪衍生物1～4对MV4-11细胞增殖抑制作用的IC50值如表1所示，从表1可以看出，哌嗪衍生物1～4对MV4-11细胞的增殖均具有显著的抑制作用，IC50值均在50nM以下，且哌嗪衍生物3、4对MV4-11细胞的增殖抑制作用强于哌嗪衍生物1、2。表1哌嗪衍生物1～4对MV4-11细胞增殖抑制作用的IC50值2、药物对MV4-11细胞中STAT3蛋白磷酸化水平的影响哌嗪衍生物1～4对MV4-11细胞中STAT3蛋白磷酸化水平影响的WesternBlot测定结果如图2所示，从图2可以看出，哌嗪衍生物1～4均可以显著抑制MV4-11细胞中的p-STAT3含量，且同等药物浓度下哌嗪衍生物3、4对MV4-11细胞中p-STAT3蛋白含量的抑制作用强于哌嗪衍生物1、2。已有研究表明，STAT3异常激活能影响急性髓系白血病细胞株群的自主增殖，抑制STAT3的磷酸化可以抑制急性髓系白血病细胞株群的活性，哌嗪衍生物1～4可能正是通过抑制STAT3的磷酸化抑制其激活进而抑制MV4-11细胞的增殖。上述实施例表明，哌嗪衍生物1～4对MV4-11细胞的增殖均具有显著的抑制作用，其可能是通过抑制STAT3的磷酸化抑制其激活进而抑制MV4-11细胞的增殖，哌嗪衍生物1～4可能是有效的STAT3磷酸化抑制剂，可以开发成治疗急性髓系白血病的药物。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.如下化学结构的化合物用于制备STAT3蛋白磷酸化抑制剂的用途：/n

【技术特征摘要】
1.如下化学结构的化合物用于制备STAT3蛋白磷酸化抑制剂的用途：



R为-CH3或-OCH2CH3。


2.权利要求1所述STA...

【专利技术属性】
技术研发人员：于海涛，杨晓旭，李涛，
申请(专利权)人：南京赛尔健生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32