具有两个编码RSV抗原蛋白或片段的表达盒的腺病毒载体制造技术

腺病毒载体，其包含两个表达盒，其中每个表达盒都包含转基因和启动子，且其中每个转基因都编码RSV抗原蛋白或其片段。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有两个编码RSV抗原蛋白或片段的表达盒的腺病毒载体序列表本申请含有已经以ASCII形式电子提交且在此以其整体通过引用并入的序列表。所述ASCII拷贝，在2018年10月11日创建，命名为VU66441A_WO_SL.txt，且大小为178,926字节。专利
本专利技术处于重组腺病毒载体的领域中。本专利技术涉及包含两个表达盒的腺病毒载体。具体而言，本专利技术涉及猿猴腺病毒，诸如黑猩猩(chimp)腺病毒，其包含两个表达盒。在本专利技术中，每个表达盒包含编码至少一种抗原蛋白或其片段的转基因，其中编码的抗原蛋白源自呼吸道合胞病毒(RSV)。专利技术背景重组腺病毒可用于基因疗法中且可用作疫苗。由于它们的大转基因容量和在各种靶标组织中实现高度有效基因转移的能力，人腺病毒已被广泛用于基因转移应用。然而，大多数人暴露于人腺病毒并发展对人腺病毒的免疫力。因此，需要有效地将分子递送至靶标并使预先存在的对人腺病毒血清型的免疫力的影响最小化的载体。猿猴腺病毒在这方面是有效的；它们与人病毒足够密切相关，以有效地诱导对递送的外源性抗原的免疫力，人对所述递送的外源性抗原几乎没有预先存在的免疫力或没有预先存在的免疫力。因此，基于猿猴腺病毒的病毒载体可以提供人来源的腺病毒载体用于开发基于核酸的疫苗的用途的替代方案。复制缺陷的腺病毒将其基因组递送至细胞的内部，并且因为它们不复制，所以不扩增转基因有效载荷。通常，E1基因被包含选择的启动子和对应于一个或多个目标基因的核酸序列的转基因盒替换，产生复制缺陷的重组病毒。在本领域中需要改进的重组腺病毒。呼吸道合胞病毒(RSV)是一种高度传染性的人类病原体，其在所有年龄的人群中都引起呼吸道感染。在生命的第一年期间，50-70％的婴儿被RSV感染，并且基本上所有的儿童都会在其第二个生日具有RSV感染。严重RSV-相关性下呼吸道感染(LRTI)的风险在6个月龄以下的婴儿中最高，并且是住院的主要原因。RSV的感染不能赋予完全的保护性免疫力。症状性RSV再次感染在生命的后期是常见的，并在整个成年期继续。这些再次感染通常未被诊断，因为它们通常呈现为常见的急性上呼吸道感染。然而，在更脆弱的人(例如，免疫受损的成人或老年人)中，重新感染也可以导致严重的疾病。迄今为止，没有针对RSV的疫苗可用，并且RSV疾病的治疗主要是症状性和支持性护理。抗病毒药物利巴韦林目前是用于RSV治疗的唯一批准的抗病毒疗法，但它的使用由于关于其效力的不确定性、难以施用(气溶胶)和高成本而限于严重的住院病例[AmericanAcademyofPediatricsSubcommitteeonDiagnosisandManagementofBronchiolitis,2006]。RSV-特异性单克隆抗体(帕利珠单抗，SynagisTM，MedImmune)被适应用于预防在处于RSV疾病的高风险的儿童中的RSV引起的需要住院的严重LRTI，但由于成本高和需要重复施用，在一般、健康的婴儿群体中不适用或推荐。在1960年代后期，在临床试验中测试的福尔马林灭活的全病毒RSV疫苗(FI-RSV)导致两岁以下儿童中的随后RSV自然感染后的更严重的临床症状[Kim,1969;Chin,1969])。这种经验已导致儿科RSV疫苗候选物的安全性担忧加剧。从那时起，几种研究性疫苗已经并将继续探索，包括活减毒病毒疫苗和基于纯化或重组病毒蛋白的那些。然而，还没有用于预防RSV疾病的许可疫苗。专利技术概述本专利技术涉及腺病毒载体，其包含两个表达盒，其中每个表达盒编码至少一种RSV抗原蛋白或其片段。具体而言，本专利技术涉及猿猴腺病毒，优选黑猩猩(chimp)腺病毒，其包含两个表达盒，其中每个表达盒编码至少一种RSV抗原蛋白或其片段。合适的黑猩猩腺病毒的实例包括ChAd155和ChAd83。本专利技术的腺病毒载体可用作免疫原性组合物的组分，其用于诱导受试者中的免疫应答，其在治疗中的使用方法和制造方法。术语“载体”是指含有或携带遗传物质且可以用于将外源基因引入生物体的试剂(诸如质粒或病毒)。本专利技术的腺病毒载体优选源自非人猿猴腺病毒，也称为“猿猴腺病毒”。优选地，本专利技术的腺病毒载体是腺病毒。本专利技术的腺病毒载体中的每个表达盒包含转基因和启动子。“转基因”是编码目标多肽的核酸序列，其与侧接所述转基因的载体序列异源。核酸编码序列以允许宿主细胞中的转基因转录、翻译和/或表达的方式可操作连接至调节组分。“启动子”是允许RNA聚合酶的结合并指导基因的转录的核苷酸序列。通常，启动子位于靠近转录起始位点的基因的非编码区域中。在本专利技术中，腺病毒载体的每个表达盒包含编码源自呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原蛋白或其片段的转基因，即，每个转基因都编码RSV抗原或RSV抗原的片段。换言之，本专利技术的重组腺病毒载体包含编码两个异源蛋白的核酸序列，其中所述核酸序列可操作地连接至指导所述异源蛋白在宿主细胞中的表达的序列。在本专利技术中，每种异源蛋白是源自RSV的抗原蛋白或其片段。在一个优选实施方案中，所述异源蛋白包含RSV的融合蛋白(F)、附着蛋白(G)、基质蛋白(M2)和核蛋白(N)或其片段中的一种或多种。在本专利技术的一个优选实施方案中，编码异源蛋白的核酸序列编码RSVF、M和N抗原。最优选地，所述核酸序列编码RSVFΔTM抗原、RSVM2-1抗原和N抗原。在一个优选实施方案中，所述表达盒之一编码RSVF抗原，且另一表达盒编码包含RSVM和N抗原的融合蛋白。具体而言，在该实施方案中，所述表达盒之一编码RSVFΔTM抗原，且另一表达盒编码包含RSVM2-1和N抗原的融合蛋白。在本专利技术的腺病毒载体中，第一表达盒被插入病毒的E1区域中，且第二表达盒被插入腺病毒载体的第二区域中。在本专利技术的包含两个表达盒的猿猴腺病毒载体中，第一表达盒被插入猿猴腺病毒载体的E1区域中，且第二表达盒被插入腺病毒载体的与载体复制相容的区域中。如果腺病毒载体基因组的区域的破坏不会影响腺病毒载体复制的能力，则认为该区域“与载体复制相容”。在本专利技术的腺病毒载体的一个实施方案中，第一表达盒可以被插入病毒的E1区域中，且第二表达盒可以被插入腺病毒载体的E3、HE1或HE2区域中。如本领域中众所周知的，E3基因在转导的早期表达，以准备宿主细胞用于病毒复制。E3参与免疫调节。术语“HE1”用于描述位于L5和E4的终止密码子之间的位点。术语“HE2”已用于定义位于ITR的末端和E4mRNA的帽位点之间的位点。例如，在ChAd155腺病毒载体中：•HE1ChAd155:在SEQIDNO:1的bp34611和34612之间的插入位点。•HE2ChAd155:在SEQIDNO:1的bp37662和37663之间的插入位点。在另一个实例中，在ChAd83腺病毒载体中：•HE1ChAd83:在SEQIDNO:2的bp33535和33536之间的插入位点。•HE2ChAd83:在SEQIDNO:2的bp36387和36388之间的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.腺病毒载体，其包含第一表达盒和第二表达盒，其中每个表达盒都包含转基因和启动子，且其中每个转基因都编码源自呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原蛋白或其片段。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171016 US 62/5729511.腺病毒载体，其包含第一表达盒和第二表达盒，其中每个表达盒都包含转基因和启动子，且其中每个转基因都编码源自呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原蛋白或其片段。


2.权利要求1的腺病毒载体，其中所述第一表达盒或第二表达盒编码RSVF抗原。


3.权利要求2的腺病毒载体，其中所述第一表达盒或第二表达盒编码FΔTM抗原。


4.任一前述权利要求的腺病毒载体，其中所述第一表达盒或第二表达盒编码RSVM和N抗原。


5.权利要求4的腺病毒载体，其中所述第一表达盒或第二表达盒编码包含M2-1和N抗原的融合蛋白。


6.任一前述权利要求的腺病毒载体，其中所述第一表达盒被插入所述腺病毒载体的E1区域中，且所述第二表达盒被插入所述腺病毒载体的与载体复制相容的区域中。


7.任一前述权利要求的腺病毒载体，其中所述第一表达盒被插入所述腺病毒载体的E1区域中，且所述第二表达盒被插入猿猴腺病毒载体的E3区域中，在猿猴腺病毒载体的L5的终止密码子和E4之间(“HE1”区域)或猿猴腺病毒载体的ITR的末端和E4mRNA的帽位点之间(“HE2”区域)。


8.权利要求7的腺病毒载体，其中所述第二表达盒被插入所述腺病毒载体的E3区域中。


9.权利要求7的腺病毒载体，其中所述第二表达盒被插入所述腺病毒载体的HE1区域中。


10.权利要求7的腺病毒载体，其中所述第二表达盒被插入所述腺病毒载体的HE2区域中。


11.任一前述权利要求的腺病毒载体，其中所述载体是猿猴腺病毒载体。


12.任一前述权利要求的腺病毒载体，其中所述载体是黑...

【专利技术属性】
技术研发人员：S科罗卡，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE