一种BNP检测试剂盒及缓冲液、酶工作液和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种BNP检测试剂盒及缓冲液、酶工作液和应用，所述BNP检测试剂盒包括缓冲液和酶工作液，所述检测试剂盒中以小牛血清和IgG组合作为缓冲液，同时向酶工作液中添加PEG20000，不仅能有效消除新鲜样本对BNP检测的干扰，同时能够提高B型钠尿肽样本的灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
一种BNP检测试剂盒及缓冲液、酶工作液和应用
本专利技术涉及BNP检测
，具体涉及一种BNP检测试剂盒及缓冲液、酶工作液和应用。
技术介绍
脑钠肽(BrainNatriureticPeptide，BNP)又称B型利钠肽(B-typeNatriureticPeptide)、脑利钠肽，是继心钠肽(ANP)后利钠肽系统的又一成员，主要由心脏分泌的利尿钠肽家族的一员，由32个氨基酸残基组成的多肽。由于它首先是由日本学者Sudoh等于1988年从猪脑分离出来因而得名。能调节血压和血容量的自稳平衡，并有利尿作用，实际上它主要来源于心室。BNP具有重要的病理生理学意义，它可以促进排钠、排尿，具较强的舒张血管作用，可对抗肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的缩血管作用，同ANP一样是人体抵御容量负荷过重及高血压的一个主要内分泌系统。心功能障碍能够极大地激活利钠肽系统，心室负荷增加导致BNP释放。脑钠肽的检测主要包括基于化学发光酶免疫分析的试剂盒检测和基于免疫比浊法的试剂盒检测。化学发光酶免疫分析(chemiluminescenceenzymeimmunoassay，CLEIA)是用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，经洗涤后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。基于化学发光酶免疫分析的试剂盒主要包括免疫磁珠，酶工作液，分析缓冲液，底物液和清洗液，分析检测采用贝克曼全自动化学发光免疫分析仪(ACCESS2)。临床患者血液采集后分离血清检验过程(基于化学发光酶免疫分析的试剂盒)中，发现BNP检测试剂检测不同个体新鲜样本时存在干扰现象，存在的干扰因子有血红蛋白、胆红素、甘油三酯。缓冲液能够在一定程度上降低干扰现象，但是现有的BNP检测试剂盒抗干扰效果差。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种BNP检测试剂盒，解决现有BNP检测试剂盒抗干扰效果差的问题。此外，本专利技术还提供用于上述BNP检测试剂盒的缓冲液、酶工作液及其应用。本专利技术通过下述技术方案实现：一种BNP检测试剂盒，包括缓冲液和酶工作液，所述缓冲液由两种动物血清组成。BNP检测常用的缓冲液有85％磷酸(AR)，巴比妥酸(AR)，小牛血清，胎牛血清，IgG，羊血清，鼠血清。现有BNP检测试剂盒抗干扰效果差。申请人通过试验发现：BNP检测试剂盒抗干扰效果差的原因为：缓冲液采用单一组分。具体实验过程如下：实验材料：免疫磁珠，酶工作液，底物液，清洗液，贝克曼全自动化学发光免疫分析仪(ACCESS2)，85％磷酸(AR)，巴比妥酸(AR)，小牛血清，胎牛血清，IgG，羊血清，鼠血清，1000μL移液枪，百分之一天平，150例BNP新鲜临床样本及第三方临床检验报告(贝克曼美艾利尔厂家)。实验方法：1)、用百分之一天平称量0.5g巴比妥酸，用1000μL移液枪量分别量取0.5ml小牛血清、0.5ml胎牛血清、0.5mlIgG、0.5ml羊血清、0.5ml鼠血清、0.5ml马血清0.59ml85％磷酸；2)、将上述称量及量取的缓冲物质分别定容至10ml中纯化水中，使各分析缓冲液质量分数10％，与磁珠标记抗体组分和酶工作液组分组合后，以下随机组合85％磷酸、巴比妥酸、小牛血清、胎牛血清、IgG、羊血清、鼠血清、马血清缓冲体系分别编号为B，C，D，E，F，G，H，I组；3)、将未添加分析缓冲液物质的BNP检测试剂编号为A组(对照组)；4)、将150例BNP临床新鲜样本分别用A，B，C，D，E，F，G，H，I组试剂在贝克曼全自动化学发光免疫分析仪(ACCESS2)上检测；5)、统计数据，将A，B，C，D，E，F，G，H，I组临床样本检测结果分别与样本对应的第三方临床检验报告结果对比分析，选出最合适的缓冲物质。结果图表1和表2所示：表115例临床干扰样本9种试剂盒BNP测定值与贝克曼美艾利尔厂家比较(缓冲物质)表2150例临床新鲜样本9种试剂盒BNP测定值与贝克曼美艾利尔厂家对比统计(缓冲物质)由表1统计测值进行分析每组测值与贝克曼测值离散程度，统计每组试剂盒测试时样本干扰例数，计算出干扰比例，选择出最合适的缓冲物质作为分析缓冲液，统计数据见表2。由表2统计数据可知，单独使用以上缓冲物质抗干扰效果不明显，且磷酸与巴比妥酸有机酸作为分析缓冲液效果比较于使用动物血清与IgG抗干扰效果更差。进一步地，缓冲液由小牛血清和IgG组成。进一步地，小牛血清和IgG的体积比大于等于4：3。进一步地，小牛血清和IgG的体积比为4：3。申请人通过试验发现：当缓冲液由小牛血清和IgG组成的缓冲效果最佳，随着小牛血清添加量的增加，干扰例数有明显的降低，当小牛血清和IgG的体积比为4：3，能有效消除新鲜样本对BNP检测的干扰。进一步地，酶工作液中添加有PEG20000。申请人通过试验发现：向酶工作液中添加PEG20000能够提高B型钠尿肽样本的灵敏度。进一步地，酶工作液中PEG20000的添加量为1％-4％，所述添加量以酶工作液计。进一步地，酶工作液中PEG20000的添加量为3％，所述添加量以酶工作液计。一种用于BNP检测试剂盒的缓冲液，所述缓冲液由小牛血清和IgG组成，所述小牛血清和IgG的体积比为4:3。一种用于BNP检测试剂盒的酶工作液，所述酶工作液中添加有3％的PEG20000，添加量以酶工作液计。一种BNP检测试剂盒的应用，所述检测试剂盒用于BNP检测。本专利技术与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：1、本专利技术所述检测试剂盒中以小牛血清和IgG组合作为缓冲液，能够有效提高抗干扰能力，随着小牛血清添加量的增加，干扰例数有明显的降低，当小牛血清和IgG的体积比为4：3，能有效消除新鲜样本对BNP检测的干扰。2、本专利技术所述检测试剂盒中以小牛血清和IgG组合作为缓冲液，同时向酶工作液中添加PEG20000，不仅能有效消除新鲜样本对BNP检测的干扰，同时能够提高B型钠尿肽样本的灵敏度。附图说明此处所说明的附图用来提供对本专利技术实施例的进一步理解，构成本申请的一部分，并不构成对本专利技术实施例的限定。在附图中：图1为添加PEG20000试剂盒BNP测定时的发光信号变化趋势图；图2为添加1％PEG20000试剂盒BNP测定时的发光信号变化趋势图；图3为添加2％PEG20000试剂盒BNP测定时的发光信号变化趋势图；图4为添加3％PEG20000试剂盒BNP测定时的发光信号变化趋势图；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种BNP检测试剂盒，包括缓冲液和酶工作液，其特征在于，所述缓冲液由两种动物血清组成。/n

【技术特征摘要】
1.一种BNP检测试剂盒，包括缓冲液和酶工作液，其特征在于，所述缓冲液由两种动物血清组成。


2.根据权利要求1所述的一种BNP检测试剂盒，其特征在于，所述缓冲液由小牛血清和IgG组成。


3.根据权利要求2所述的一种BNP检测试剂盒，其特征在于，所述小牛血清和IgG的体积比大于等于4：3。


4.根据权利要求2所述的一种BNP检测试剂盒，其特征在于，所述小牛血清和IgG的体积比为4：3。


5.根据权利要求1所述的一种BNP检测试剂盒，其特征在于，所述酶工作液中添加有PEG20000。


6.根据权利要求1所述的一种BNP检测试剂盒，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：廖辉云，段元安，方丽，
申请(专利权)人：四川沃文特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51