一种重组IL-15融合蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及一种重组IL‑15融合蛋白及其应用。本发明专利技术提供的重组IL‑15融合蛋白包括白细胞介素‑15、白细胞介素‑15受体α的Sushi结构域和抗人血清白蛋白纳米抗体；所述的白细胞介素‑15、白细胞介素‑15受体α的Sushi结构域和抗人血清白蛋白纳米抗体直接连接或通过连接肽间接连接。所述的重组IL‑15融合蛋白可以与人血清白蛋白结合，同时可以在低剂量的浓度下有效激活T细胞，使免疫系统发挥作用，达到预防和治疗肿瘤的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种重组IL-15融合蛋白及其应用
本专利技术涉及医药
，具体涉及一种重组IL-15融合蛋白及其应用。
技术介绍
细胞因子，例如淋巴因子、趋化因子和生长因子，是由包括淋巴细胞、单核细胞在内的多种类型的细胞产生，在人类生理和疾病控制中有广泛的作用。这几类细胞因子在临床上证明能够有效的治疗多种疾病。例如白细胞介素（interleukin，IL）是由多种细胞产生并作用于多种细胞的一类细胞因子，其在传递信息，激活与调节免疫细胞，介导T、B细胞活化、增殖与分化及在炎症反应中起重要作用。其中，白细胞介素-15（IL-15）属于四个小α螺旋束细胞因子家族中的成员。IL-15需通过与其受体结合发挥生物学活性。IL-15受体由三个受体亚基组成：IL-15受体α（IL-15Rα）、IL-2受体β（IL-2Rβ，也称IL-15Rβ或CD122）和γc（也称CD132）。IL-15Rα内含一个Sushi结构域，能与IL-15结合，并且是使结合后的IL-15发挥生物学功能所必需的。IL-15具有广泛的免疫调节活性，能够参与调节多种免疫细胞的存活、增殖与功能，其中包括NK细胞、记忆性CD8+T细胞、NKT细胞等。天然IL-15在治疗过程中必须经常以高剂量施用，由于毒性而限制其效用。IL-15半衰期大略为给药后1小时，且必须每天给药进行治疗。通过基因工程的方式开发含有人抗体Fc片段的融合蛋白是一种常用的增加蛋白半衰期的方式。专利CN108341884A中公开了一种免疫因子，包括白细胞介素15或其衍生物的氨基酸序列的多肽、IL-15Rα的sushi结构域或其衍生物的氨基酸序列的多肽、直接地或间接地共价连接至所述缀合物的抗体或所述抗体的片段，能延长IL-15的半衰期，增强免疫效果。在专利CN108463239A中，利用IL-15的突变体IL-15N72D与IL-15受体的片段融合形成的IL-15RαSushi-Fc在共表达的情况下形成含有人Fc片段的四聚体融合蛋白，用于延长IL-15的半衰期，IL-15的超激动剂突变体（IL-15N72D）增加IL-2Rβ结合能力（比原生IL-15高4至5倍），并已经被认定用于治疗性用途。在专利CN106459219B中，通过突变改造额外引入二硫键的方式获得含有人Fc片段的IL-15及其受体IL-15RαSushi融合蛋白。专利CN102145178A、CN108472324A和NektarTherapeutics公司利用PEG化技术对IL-15蛋白进行修饰，降低修饰后的蛋白在体内的清除速率，达到长效使用的目的。但是，PEG化对工艺的要求很高，同时PEG化存在不能定点对目的蛋白进行PEG化、PEG化后的蛋白活性下降等问题。因此，仍然需要采用新的融合方式开发新型的IL-15融合蛋白。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术要解决的技术问题是以抗人血清白蛋白纳米抗体为基础，构建了一种新型重组IL-15融合蛋白，该重组IL-15融合蛋白可以与人血清白蛋白进行高亲和力结合并显示出优异的T细胞激活效应，可用于肿瘤预防和治疗。术语：1、白细胞介素-15（interleukin-15，IL-15）：是指具有类似于IL-2的结构的细胞因子（GRABSTEIN等，Science，vol.264（5161），p：965-968，1994）。这种细胞因子也被称为IL-15、IL15或MGC9721。这种细胞因子和IL-2共享许多生物活性，且发现它们结合相同的促红细胞生成素受体亚基。因此，IL-15和IL-2可以竞争相同的受体，从而负调节彼此的活性。已经证实，IL-15调节T细胞和自然杀伤细胞的活化和增殖，且证明CD8+记忆细胞的数量由IL-15这种细胞因子和IL-2之间的平衡来控制。在本申请中用英文符号“IL-15”表示。2、白细胞介素-15受体α的Sushi结构域：是指起始于白细胞介素-15受体α（IL-15Rα）的信号肽之后的第一个半胱氨基酸残基（C1），并终止于所述信号肽之后的第四个半胱氨基酸残基（C4）的结构域。对应于IL-15Rα的胞外区域的一部分的所述Sushi结构域是其结合至IL-15所必需的（WEI等，J.Immunol.，vol.167（1），p：277-282，2001）。在本申请中用英文符号“IL-15RαSushi”表示。3、抗人血清白蛋白纳米抗体：纳米抗体是一种源自骆驼属体内或者护士鲨体内的重链抗体。1993年科学家首先发现在羊驼外周血液中存在一种天然缺失轻链的抗体，该抗体只包含一个重链可变区（VHH）和两个常规的CH2与CH3区。经过基因克隆并表达出来的VHH结构具有与原重链抗体相当的结构稳定性以及与抗原的结合活性。抗人血清白蛋白纳米抗体是指能够与人血清白蛋白结合的纳米抗体，该纳米抗体与其他蛋白如IL-15融合后可以延长蛋白的血清半衰期。抗人血清白蛋白纳米抗体在本申请中用英文符号“anti-HSAVHH”表示。4、氨基酸序列：指构成蛋白质或多肽的氨基酸残基的种类以及排列方式，通常用本领域常规使用的三字母方式表示氨基酸残基，也可使用本领域常规使用的单字母方式表示氨基酸残基，本领域技术人员应当能够将三字母构成氨基酸序列与单字母构成的氨基酸序列进行转换。应当明确的是，无论本申请中采用哪种方式表示，本领域技术人员均能够理解以及转换。例如：丙氨酸，单字母为A，三字母为Ala；精氨酸，单字母为R，三字母为Arg；天冬氨酸，单字母为D，三字母为Asp；半胱氨酸，单字母为C，三字母为Cys；谷氨酰胺，单字母为Q，三字母为Gln；谷氨酸，单字母为E，三字母为Glu；组氨酸，单字母为H，三字母为His；异亮氨酸，单字母为I，三字母为Ile；甘氨酸，单字母为G，三字母为Gly；天冬酰胺，单字母为N，三字母为Asn；亮氨酸，单字母为L，三字母为Leu；赖氨酸，单字母为K，三字母为Lys；甲硫氨酸，单字母为M，三字母为Met；苯丙氨酸，单字母为F，三字母为Phe；脯氨酸，单字母为P，三字母为Pro；丝氨酸，单字母为S，三字母为Ser；苏氨酸，单字母为T，三字母为Thr；色氨酸，单字母为W，三字母为Trp；酪氨酸，单字母为Y，三字母为Tyr；缬氨酸，单字母为V，三字母为Val。5、英文符号“IL-15/IL-15RαSushi/anti-HSAVHH”：根据以上1-3条的解释，本申请文本中的此符号表示依次包含白细胞介素-15、白细胞介素-15受体α的Sushi结构域、抗人血清白蛋白纳米抗体的重组IL-15融合蛋白；其中符号“/”表示连接；应当说明的是，这种“连接”可以是直接连接，也可以是通过连接肽的间接连接。6、英文符号“IL-15RαSushi/IL-15/anti-HSAVHH”：根据以上1-3条的解释，本申请文本中的此符号表示依次包含白细胞介素-15受体α的Sushi结构域、白细胞介素-15、抗人血清白蛋白纳米抗体的重组IL-15融合蛋白；其中符号“/”表示连接；应当说明的是，这种“连接”可以是直接连接，也可以是通过连接肽的间接连接。7、英文符号“anti-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组IL-15融合蛋白，其特征在于，所述的重组IL-15融合蛋白包括白细胞介素-15、白细胞介素-15受体α的Sushi结构域和抗人血清白蛋白纳米抗体；/n所述的白细胞介素-15、白细胞介素-15受体α的Sushi结构域和抗人血清白蛋白纳米抗体直接连接或通过连接肽间接连接；/n所述的抗人血清白蛋白纳米抗体的氨基酸序列为SEQ ID NO：4所示的序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组IL-15融合蛋白，其特征在于，所述的重组IL-15融合蛋白包括白细胞介素-15、白细胞介素-15受体α的Sushi结构域和抗人血清白蛋白纳米抗体；
所述的白细胞介素-15、白细胞介素-15受体α的Sushi结构域和抗人血清白蛋白纳米抗体直接连接或通过连接肽间接连接；
所述的抗人血清白蛋白纳米抗体的氨基酸序列为SEQIDNO：4所示的序列。


2.根据权利要求1所述的重组IL-15融合蛋白，其特征在于，所述的重组IL-15融合蛋白从N端到C端依次为：
白细胞介素-15、白细胞介素-15受体α的Sushi结构域和抗人血清白蛋白纳米抗体；
或，白细胞介素-15受体α的Sushi结构域、白细胞介素-15和抗人血清白蛋白纳米抗体；
或，抗人血清白蛋白纳米抗体、白细胞介素-15和白细胞介素-15受体α的Sushi结构域；
或，抗人血清白蛋白纳米抗体、白细胞介素-15受体α的Sushi结构域和白细胞介素-15。


3.根据权利要求2所述的重组IL-15融合蛋白，其特征在于，所述的白细胞介素-15的氨基酸序列为SEQIDNO：1所示的序列。


4.根据权利要求2所述的重组IL-15融合蛋白，其特征在于，所述的白细胞介素-15受体α的Sushi结构域的氨基酸序列为SEQIDNO：2所示的序列。


5.根据权利要求2所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张鹏，马琳，
申请(专利权)人：苏州普乐康医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32