CLEC9A结合剂及其用途制造技术

本发明专利技术部分地涉及结合Clec9A的剂以及所述剂作为诊断剂和治疗剂的用途。本发明专利技术进一步涉及包含所述Clec9A结合剂的药物组合物以及所述药物组合物在治疗各种疾病中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CLEC9A结合剂及其用途相关申请的交叉引用本申请要求2017年8月9日提交的美国临时专利申请号62/542,944的权益和优先权，所述申请的内容特此以引用方式整体并入。
本专利技术部分地涉及结合Clec9A的结合剂及其作为治疗剂和诊断剂的用途。以电子方式提交的文本文件的说明与本文一起以电子方式提交的文本文件的内容以引用方式整体并入本文：序列表的计算机可读格式副本(文件名：ORN-033PC_ST25；创建日期：2018年8月8日；文件大小：808KB)。
技术介绍
树突状细胞(DC)是抗原呈递细胞(APC)，这些细胞处理抗原并将抗原展示给免疫系统的其他细胞。具体而言，树突状细胞能够捕获抗原并且将所述抗原呈递在其表面上以激活T细胞，诸如细胞毒性T细胞(CTL)。此外，激活的树突状细胞能够募集额外的免疫细胞，诸如巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、天然杀伤细胞和T细胞(诸如天然杀伤T细胞)。鉴于树突状细胞在免疫中的重要作用，树突状细胞的功能脱轨已牵涉到诸如癌症和自身免疫性疾病(诸如多发性硬化)的疾病中。举例来说，癌细胞可以通过防止树突状细胞募集和激活而损坏树突状细胞的功能性，从而逃避免疫检测和破坏。此外，在中枢神经系统发炎的过程中，在脑中发现了树突状细胞，这些树突状细胞可能参与了脑中自身免疫性疾病的发病机理。因此，仍然需要通过修饰树突状细胞功能来治疗包括癌症和多发性硬化在内的疾病的改善疗法。
技术实现思路
在各个方面，本专利技术涉及具有至少一个特异性地结合至Clec9A的靶向部分的Clec9A结合剂。在各个实施方案中，这些Clec9A结合剂结合至Clec9A，但不在功能上调节(例如，部分或完全中和)Clec9A。因此，在各个实施方案中，本专利技术的Clec9A结合剂用于例如将表达Clec9A的细胞直接或间接地募集至目标位点，同时仍允许表达Clec9A的细胞经由Clec9A进行信号传导(即，所述Clec9A结合剂的结合不会降低或消除所述目标位点处的Clec9A信号传导)。在一个实施方案中，所述靶向部分是单结构域抗体(VHH)。在各个实施方案中，所述Clec9A结合剂还包含信号传导剂，例如但不限于干扰素、白介素和肿瘤坏死因子，所述信号传导剂可以经过修饰以减弱活性。在各个实施方案中，所述Clec9A结合剂包含结合至其他目标靶标(例如抗原、受体)的另外的靶向部分。在一个实施方案中，所述其他目标靶标(例如抗原、受体)存在于肿瘤细胞上。在另一个实施方案中，所述其他目标靶标(例如抗原、受体)存在于免疫细胞上。在一些实施方案中，本专利技术的Clec9A结合剂可以将免疫细胞(例如树突状细胞)直接或间接地募集至作用位点(作为非限制性实例，诸如肿瘤微环境)。在一些实施方案中，本专利技术的Clec9A结合剂促进树突状细胞对抗原(例如肿瘤抗原)的呈递。在各个实施方案中，本专利技术的Clec9A结合剂可用于治疗各种疾病或病症，诸如癌症、感染、免疫病症以及其他疾病和病症，并且本专利技术涵盖各种治疗方法。附图说明图1描绘了66种不同的人Clec9A特异性VHH的核苷酸序列。引入缺口以便对准序列。给图1的序列指定如实施例1中所示的序列标识符。图2示出了66种不同的人Clec9A特异性VHH的氨基酸序列。所指示的互补性决定区(CDR1、CDR2和CDR3)是根据Kabat加以定义。引入缺口以便对准序列。以上66种不同的VHH属于25个不同的CDR3组(参见图3)。属于同一组的VHH非常相似，并且它们的氨基酸序列表明它们来自由于体细胞高频突变而产生的克隆相关的B细胞，或者来自相同B细胞但由于文库构建期间的RT和/或PCR误差而多样化。属于同一组的VHH识别相同表位，但它们的其他特征(例如亲和力、效能、稳定性、表达产率等)可能不同。给图2的序列指定如实施例1中所示的序列标识符。图3提供了描绘属于25个不同的CDR3组的66种不同的VHH的表。图4示出了各种VHH与经人Clec9A转染的Hek293T细胞的结合。图5示出了人树突状细胞pSTAT1信号传导测定。所研究的嵌合体是各种抗人Clec9AVHH/人IFNαR149A。研究了诸剂的两个剂量：100ng/ml和500ng/ml。PBS是对照物，并且数据表示为pSTAT1+树突状细胞的百分比的倍数变化(数据是一式三份数据集的平均值)。图6示出了Clec9A靶向部分R1CHCL50、3LEC89以及它们的变体的纯化和产生。图7A-图7B是示出了具有Clec9A靶向部分(R1CHCL50和3LEC89)和突变的人IFNα2(R149A)信号传导部分的嵌合蛋白针对HL116和HL116-hClec9A细胞的生物活性的图。图8是示出了基于CLEC9A的AFN(例如2LEC16-hIFNa2_R149A、3LEC22-hIFNa2_R149A、1LEC28-hIFNa2_R149A、3LEC30-hIFNa2_R149A和3LEC89-hIFNa2_R149A)在具有RL肿瘤的具有人源化免疫系统的小鼠中的体内抗肿瘤活性的图。具体实施方式本专利技术部分地基于识别并结合至Clec9A的剂(例如抗体，作为非限制性实例，诸如VHH)的发现。在一些实施方案中，本专利技术的Clec9A结合剂是具有一个或多个靶向部分和/或一种或多种信号传导剂的嵌合或融合蛋白的一部分。在一些实施方案中，这些Clec9A结合剂结合至Clec9A，但不在功能上调节Clec9A。在一些实施方案中，这些Clec9A结合剂可以结合免疫细胞并将所述免疫细胞直接或间接地募集至需要治疗作用的位点(例如肿瘤或肿瘤微环境)。在一些实施方案中，Clec9A结合剂增强肿瘤抗原呈递以引发有效的抗肿瘤免疫应答。在一些实施方案中，Clec9A结合剂调节抗原呈递。在一些实施方案中，Clec9A结合剂调和免疫应答以避免或降低自身免疫性。在一些实施方案中，Clec9A结合剂提供免疫阻抑。在一些实施方案中，Clec9A结合剂使得患者的Treg与CD8+T细胞和/或CD4+T细胞的比率增加。在一些实施方案中，本专利技术的方法涉及减少患者的自身反应性T细胞。本专利技术提供了包含所述Clec9A结合剂的药物组合物以及所述药物组合物在治疗各种疾病，包括癌症、自身免疫性疾病和/或神经退行性疾病中的用途。Clec9A结合剂在各个实施方案中，本专利技术的Clec9A结合剂是能够特异性地结合至Clec9A的基于蛋白质的剂。在各个实施方案中，本专利技术的Clec9A结合剂是能够特异性地结合至Clec9A而不在功能上调节(例如，部分或完全中和)Clec9A的基于蛋白质的剂。Clec9A是专门用于吸收和处理来自死细胞的材料的在树突状细胞子集(即BDCA3+树突状细胞)的表面上表达的第V组C型凝集素样受体(CTLR)。Clec9A识别有核细胞和无核细胞内在细胞膜受损时得以暴露的保守组分。Clec9A在细胞表面表达为糖基化二聚体，并且可以介导内吞作用，而不是吞噬作用。Clec9A具有可以募集本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Clec9A结合剂，所述Clec9A结合剂包含与SEQ ID NO:332中的一者具有至少95％同一性的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170809 US 62/542,9441.一种Clec9A结合剂，所述Clec9A结合剂包含与SEQIDNO:332中的一者具有至少95％同一性的氨基酸序列。


2.一种Clec9A结合剂，所述Clec9A结合剂包含至少一个靶向部分，所述至少一个靶向部分包含三个互补性决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其中：
(a)CDR1包含氨基酸序列SEQIDNO:51；
(b)CDR2包含氨基酸序列SEQIDNO:136；并且
(c)CDR3包含氨基酸序列SEQIDNO:202。


3.如权利要求1所述的Clec9A结合剂，其中所述氨基酸序列选自SEQIDNO:333-336。


4.如以上权利要求中任一项所述的Clec9A结合剂，其中所述靶向部分是全长抗体、单结构域抗体、只有重链的重组抗体(VHH)、单链抗体(scFv)、只有重链的鲨鱼抗体(VNAR)、微量蛋白、darpin、抗运载蛋白、adnectin、适体、Fv、Fab、Fab′、F(ab′)2、肽模拟分子、受体的天然配体或合成分子。


5.如以上权利要求中任一项所述的Clec9A结合剂，其中所述靶向部分是单结构域抗体。


6.如权利要求5所述的Clec9A结合剂，其中所述靶向部分包括VHH、人源化VHH或骆驼化VHH。


7.如以上权利要求中任一项所述的Clec9A结合剂，其中所述Clec9A结合剂包含一种或多种信号传导剂。


8.如权利要求7所述的Clec9A结合剂，其中所述信号传导剂选自干扰素、白介素和肿瘤坏死因子中的一者或多者，所述干扰素、白介素和肿瘤坏死因子中的任一者任选地被修饰。


9.如以上权利要求中任一项所述的Clec9A结合剂，其中所述Clec9A结合剂包含一个或多个另外的靶向部分。


10.如权利要求9所述的Clec9A结合剂，其中所述一个或多个另外的靶向部分识别并任选地在功能上调节肿瘤抗原。


11.如权利要求10所述的Clec9A结合剂，其中所述一个或多个另外的靶向部分识别并任选地在功能上调节免疫细胞上的抗原。


12.如权利要求11所述的Clec9A结合剂，其中所述免疫细胞选自T细胞、B细胞、树突状细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和NK细胞。


13.如以上权利要求中任一项所述的Clec9A结合剂，其中所述Clec9A结合剂将细胞毒性T细胞募集至肿瘤细胞或肿瘤环境。


14.如以上权利要求中任一项所述的Clec9A结合剂，其中所述Clec9A结合剂识别并结合Clec9A而基本上不在功能上调节所述Clec9A的活性。


15.一种重组核酸组合物，所述重组核酸组合物编码如以上权利要求中任一项所述的Clec9A结合剂。


16.一种宿主细胞，所述宿主细胞包含如权利要求15所述的核酸。


17.如以上权利要求中任一项所述的Clec9A结合剂，其中所述Clec9A结合剂适用于患有以下中的一者或多者的患者：癌症、感染、免疫病症和/或自身免疫性疾病。


18.一种Clec9A结合剂，所述Clec9A结合剂包含至少一个靶向部分，所述至少一个靶向部分包含三个互补性决定区(CDR1、CDR2和CDR3)，其中：
(a)CDR1包含选自SEQIDNO:2-78中任一者的氨基酸序列；
(b)CDR2包含选自SEQIDNO:79-192中任一者的氨基酸序列；并且
(c)CDR3包含选自SEQIDNO:193-257中任一者的氨基酸序列。


19.如权利要求18所述的Clec9A结合剂，其中所述靶向部分是全长抗体、单结构域抗体、只有重链的重组抗体(VHH)、单链抗体(scFv)、只有重链的鲨鱼抗体(VNAR)、微量蛋白、darpin、抗运载蛋白、adnectin、适体、Fv、Fab、Fab′、F(ab′)2、肽模拟分子、受体的天然配体或合成分子。


20.如权利要求18或19所述的Clec9A结合剂，其中所述靶向部分是单结构域抗体。


21.如权利要求20所述的Clec9A结合剂，其中所述靶向部分包括VHH、人源化VHH或骆驼化VHH。


22.如权利要求21所述的Clec9A结合剂，所述Clec9A结合剂包含与SEQIDNO:258-323或327-336中的一者具有至少90％同一性的氨基酸序列。


23.如权利要求18-22中任一项所述的Clec9A结合剂，其中所述Clec9A结合剂包含一种或多种信号传导剂。


24.如权利要求23所述的Clec9A结合剂，其中所述信号传导剂选自干扰素、白介素和肿瘤坏死因子中的一者或多者，所述干扰素、白介素和肿瘤坏死因子中的任一者任选地被修饰。


25.如权利要求18-24中任一项所述的Clec9A结合剂，其中所述Clec9A结合剂包含一个或多个另外的靶向部分。


26.如权利要求25所述的Clec9A结合剂，其中所述一个或多个另外的靶向部分识别并任选地在功能上调节肿瘤抗原。


27.如权利要求26所述的Clec9A结合剂，其中所述一个或多个另外的靶向部分识别并任选地在功能上调节免疫细胞上的抗原。


28.如权利要求27所述的Clec9A结合剂，其中所述免疫细胞选自T细胞、B细胞、树突状细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和NK细胞。


29.如权利要求18-28中任一项所述的Clec9A结合剂，其中所述Clec9A结合剂将细胞毒性T细胞募集至肿瘤细胞或肿瘤环境。


30.如权利要求18-29中任一项所述的Clec9A结合剂，其中所述Clec9A结合剂识别并结合Clec9A而基本上不在功能上调节所述Clec9A的活性。


31.一种重组核酸组合物，所述重组核酸组合物编码如权利要求18-30中任一项所述的Clec9A结合剂。


32.一种宿主细胞，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·克雷，J·塔威尼尔，L·扎比奥，E·德普拉，
申请(专利权)人：奥里尼斯生物科学有限公司，奥里尼斯生物科学公司，
类型：发明
国别省市：美国;US