小反刍兽疫检测试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及小反刍兽疫检测试剂盒，其检测试剂盒中的使用的重要组分——单克隆抗体为针对小反刍兽疫病毒H蛋白的抗体，具有特异性好、敏感性强、效价高等优点。所述小反刍兽疫病毒单克隆抗体与其不同配套试剂组装成的可用于研制和生产小反刍兽疫病毒或其抗体检测用免疫学检测试剂盒，如酶联、胶体金免疫试纸条等。本发明专利技术涉及的试剂盒可以用于检测样品中是否存在小反刍兽疫病毒或小反刍兽疫病毒抗体、用于鉴定待测病毒是否为小反刍兽疫病毒、待检测动物是否感染小反刍兽疫病毒或者鉴定血清中是否含有小反刍兽疫病毒抗体等。本发明专利技术所试剂盒灵敏特异，快速方便经济实惠，易于推广普及可用于大规模的监测系统中应用和现场检测。

【技术实现步骤摘要】
小反刍兽疫检测试剂盒
本专利技术涉及小反刍兽疫检测试剂盒。属于兽用生物制品领域。
技术介绍
小反刍兽疫(pestedespetitsruminants，PPR)俗称“羊瘟”，又名小反刍兽假性牛瘟(pseudorinderpest)、肺肠炎(pneumoenteritis)、口炎肺肠炎复合症(stomatitis-pneumoenteritiscomplex)，是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性病毒性传染病，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征。是世界动物卫生组织(OIE)规定的必须报告动物疫病，严重危害小反刍类动物及家畜，据FAO推测，全球约有62.5％的小反刍动物受到兽疫威胁。畜牧业是我国农村经济的支柱产业，年均养羊量达5.6亿只。小反刍兽疫是严重危害我国养羊业的一类烈性传染病，于2007年首次传入我国西藏阿里地区，2013-2014年先后在我国22个省261个县暴发250余起小反刍兽疫情，发病率100％，死亡率80％以上，由于防控技术和产品匮乏，造成巨大的经济损失。截至目前，我国尚无成熟的小反刍兽疫诊断试剂申报注册，基本依靠进口诊断试剂。面对PPR流行和蔓延的严峻形势，针对PPR病原诊断检测技术等关键技术问题进行了联合技术攻关，技术上取得了突破，获得单克隆抗体杂交瘤细胞，并以其为基础开发出了经济实用、特异性强、敏感性高的抗原和抗体试剂盒，将有助于改善当前小反刍兽疫检测技术缺乏的问题，并带来为我国养羊业带来显著的经济和社会效益。
技术实现思路
根据上述本领域的需求和不足，本专利技术的目的在于提供一种灵敏度好、特异性强、效价高的小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体，将其与相关试剂组装成检测试剂盒用于检测小反刍兽疫病毒抗原或小反刍兽疫病毒抗体。本专利技术的技术方案1.小反刍兽疫检测试剂盒，其特征在于该试剂盒是由小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体及其配套试剂组装而成；所述小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体是由杂交瘤细胞株分泌而得，该细胞株被命名为小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株，并已于2020年04月08日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCCNo.19663。2.本专利技术所述小反刍兽疫检测试剂盒，其特征在于所述的小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体和酶标板及其配套试剂组装成用于检测小反刍兽疫病毒。3.所述小反刍兽疫检测试剂盒，其特征在于所述的小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体和酶标板及其配套试剂组装成用于检测小反刍兽疫病毒抗体。4.本专利技术所述小反刍兽疫检测试剂盒，其特征在于所述的小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体经胶体金标记后包被在金标纤维垫上，检测区包被有兔抗小反刍兽疫病毒多抗，检测时，当样本中存在小反刍兽疫病毒时，则与单克隆抗体形成抗原抗体复合物，进而与检测区的兔抗小反刍兽疫病毒多抗结合、显色。5.本专利技术所述小反刍兽疫检测试剂盒，其特征在于所述的小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体经胶体金标记后包被在金标纤维垫上，检测区包被有小反刍兽疫病毒纯化抗原，对照区包被羊抗鼠二抗。检测时，当样本中存在小反刍兽疫病毒抗体，则小反刍兽疫病毒抗体可抑制胶体金标记的单克隆抗体与小反刍兽疫病毒纯化抗原的结合，显色变浅或消失。本专利技术是通过以下步骤实施的。1.小反刍兽疫病毒的H蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的培育本专利技术是以原核表达小反刍兽疫病毒H蛋白，纯化后作为免疫抗原，免疫小鼠，取免疫小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合，再使用小反刍兽疫病毒Vero细胞培养物经差速离心浓缩灭活后，作为检测抗原用于筛选单克隆抗体的策略。再通过进一步亚克隆，筛选出一株针对小反刍兽疫病毒的H蛋白单克隆抗体，及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞，该细胞被命名为小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株，并已于2020年04月08日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为CGMCCNo.19663。2.单克隆抗体的制备由上述杂交瘤细胞株分泌的小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体，，经一定工艺纯化得到，该单克隆抗体能特异性的结合小反刍兽疫病毒H蛋白。3.本专利技术所述小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体的应用(1)用于检测小反刍兽疫病毒和/或抗体的检测试剂盒：用本专利技术所述的小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体与酶标板和配套试剂制备组装成检测小反刍兽疫病毒和/或抗体的酶联免疫检测试剂盒。1)小反刍兽疫病毒抗原酶联免疫检测试剂盒使用双抗体夹心法检测标本中的小反刍兽疫病毒的抗原。先在试剂盒的聚乙烯微孔板条上预包被羊抗小反刍病毒蛋白的多克隆抗体，当裂解后的小反刍兽疫病毒加到微孔后，预包被的多克隆抗体能将其捕获，随后加入的酶标单克隆抗体与之结合，然后通过酶催化底物的显示程度来判断结果。当标本中不含小反刍兽疫病毒抗原或不是小反刍兽疫病毒时，底物不会显色。该试剂盒可检测的标本包括动物排泄物、口鼻腔分泌物、鸡胚培养的完整病毒或裂解病毒等。2)小反刍兽疫病毒抗体酶联免疫检测试剂盒使用竞争法检测血清标本中的小反刍兽疫病毒抗原特异性抗体。先在试剂盒的聚乙烯微孔板上预包被小反刍兽疫病毒纯化抗原。如果加入的血清标本能明显抑制酶标单克隆抗体与抗原的结合，则表明标本中含小反刍兽疫病毒抗原的特异性抗体。当标本中不含小反刍兽疫病毒抗体或不是小反刍兽疫病毒抗体时，就不会抑制酶标单克隆抗体与抗原的结合，显色越深，反之显色越浅。(2)用于检测小反刍兽疫病毒和/或抗体的胶体金试剂盒：本专利技术免疫胶体金试剂盒采用胶体金免疫层析技术研制的新一代诊断试剂，本专利技术胶体金试剂盒操作简便、可靠、无需仪器设备，自带质控对照，不需要任何附加试剂，显示结果明确，反应迅速，整个操作时间仅需数分钟。1)病毒检测：将胶体金标记的小反刍兽疫病毒单克隆抗体包被金标纤维垫上，试纸条检测区包被有兔抗小反刍兽疫病毒多抗，组装成用于检测小反刍兽疫病毒的胶体试剂盒。检测时，当样本中存在小反刍兽疫病毒，则与胶体金标记的小反刍兽疫病毒单克隆抗体结合形成抗原抗体复合物，进而与检测区多克隆抗体结合，显色。本专利技术检测小反刍兽疫病毒胶体金试剂盒金标法分别在胶体金试纸条的硝酸纤维素膜上检测区包被兔抗小反刍兽疫病毒的多克隆抗体，对照区包被羊抗鼠二抗。检测时样品中小反刍兽疫病毒与胶体金标记的小反刍兽疫病毒单克隆抗体形成抗原抗体复合物，由于层析作用该复合物沿膜移动，与检测区包被的多克隆抗体结合形成复合物，与对照线包被的二抗结合形成二抗复合物。如为阳性样品，则可分别在检测区及对照区各形成一条红色线；如为阴性样品，则只在对照区形成一条红色线。该试剂盒可用于检测小反刍类动物的排泄物、口鼻腔分泌物及粪便中是否含有小反刍兽疫病毒。2)抗体检测：将胶体金标记的小反刍兽疫病毒单克隆抗体包被金标纤维垫上，检测区包被有小反刍兽疫病毒纯化抗原，对照区包被羊抗鼠二抗，组装成用于检测病毒抗体的胶体试剂盒。检测时，当样本中存在小反刍兽本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.小反刍兽疫检测试剂盒，其特征在于该试剂盒是由小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体及其配套试剂组装而成；/n所述小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体是由杂交瘤细胞株分泌而得，该细胞株被命名为小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株，并已于2020年04月08日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC No.19663。/n

【技术特征摘要】
1.小反刍兽疫检测试剂盒，其特征在于该试剂盒是由小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体及其配套试剂组装而成；
所述小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体是由杂交瘤细胞株分泌而得，该细胞株被命名为小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株，并已于2020年04月08日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCCNo.19663。


2.如权利要求1所述小反刍兽疫检测试剂盒，其特征在于由所述的小反刍兽疫病毒H蛋白单克隆抗体和酶标板及其配套试剂组装而成，用于检测小反刍兽疫病毒。


3.如权利要求1所述小反刍兽疫检测试剂盒，其特征在于由所述的小反刍兽疫病毒H蛋白的单克隆抗体和酶标板及其配套...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈青春，徐建成，孙亚波，魏晶晶，才学鹏，刘硕，张明薇，迟鑫，耿仁浩，王凤霞，
申请(专利权)人：北京中海生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11