一种具有细胞穿膜性的锌指蛋白-乳铁蛋白融合蛋白质及其制备与应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种具有细胞穿膜性的锌指蛋白‑人乳铁蛋白融合蛋白质及其制备与应用。本发明专利技术所述融合蛋白质的结构域中包括锌指蛋白和人乳铁蛋白，该融合蛋白具有抑菌和抗氧化活性，且能进入哺乳动物细胞内。

【技术实现步骤摘要】
一种具有细胞穿膜性的锌指蛋白-乳铁蛋白融合蛋白质及其制备与应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种具有细胞穿膜性的锌指蛋白-人乳铁蛋白融合蛋白质及其制备与应用。
技术介绍
细胞膜的选择通透性将细胞内组分与外源分子分开。这是治疗药物递送到细胞的主要挑战。如基因，蛋白质和病毒等各种生物活性物质可有效地进入到细胞中。在这些药物中，由于功能性蛋白质直接递送的安全性和有效性，使其有希望应用到治疗中。蛋白质递送不依赖于注入核酸的转录和翻译。因此，递送的蛋白质可以迅速发挥作用，然后被蛋白酶体降解，降低脱靶效应。细胞膜的选择性是蛋白质递送的主要障碍。在研的许多膜微扰技术，如显微注射和电穿孔，可加速蛋白质递送。然而，这些膜破裂技术通常效率差，毒性大，生物利用度低和特异性差。除了物理膜穿刺方法之外，还开发了许多生物化学试剂以促进蛋白质递送，例如超荷电转导结构域，纳米粒，脂质体，病毒样颗粒和聚合物微球。在临床前或临床实践中，这些策略可能与诸如细胞摄取低效、稳定性差、无细胞特异性、溶酶体逃逸率低或毒性大等缺点相关。在20世纪80年代后期，一种来源于人类免疫缺陷病毒(HIV)的TAT反式激活因子的天然肽被发现具有固有的细胞穿透能力。在随后的几年中，一系列被认为是细胞穿透肽(CPP)的具有相似细胞通透性的天然肽被确定。基于天然存在的CPP的特征，人造或嵌合CPP被设计出来。CPPs通常具有最小的细胞毒性，并且可以应用于各种细胞类型以递送具有不同分子量的各种货物分子。这些CPP可以与货物蛋白基因融合或化学缀合。>
技术实现思路
为了克服现有技术中所存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种具有细胞穿膜性的锌指蛋白-人乳铁蛋白融合蛋白质及其制备与应用。为了实现上述目的以及其他相关目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一方面，提供一种融合蛋白质，其结构域中包括锌指蛋白和人乳铁蛋白。进一步地，所述锌指蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示，具体为：EKPYKCPECGKSFSASAALVAHQRTHT。进一步地，所述乳铁蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示，具体为：MKLVFLVLLFLGALGLCLAGRRRRSVQWCTVSQPEATKCFQWQRNMRRVRGPPVSCIKRDSPIQCIQAIAENRADAVTLDGGFIYEAGLAPYKLRPVAAEVYGTERQPRTHYYAVAVVKKGGSFQLNELQGLKSCHTGLRRTAGWNVPIGTLRPFLNWTGPPEPIEAAVARFFSASCVPGADKGQFPNLCRLCAGTGENKCAFSSQEPYFSYSGAFKCLRDGAGDVAFIRESTVFEDLSDEAERDEYELLCPDNTRKPVDKFKDCHLARVPSHAVVARSVNGKEDAIWNLLRQAQEKFGKDKSPKFQLFGSPSGQKDLLFKDSAIGFSRVPPRIDSGLYLGSGYFTAIQNLRKSEEEVAARRARVVWCAVGEQELRKCNQWSGLSEGSVTCSSASTTEDCIALVLKGEADAMSLDGGYVYTAGKCGLVPVLAENYKSQQSSDPDPNCVDRPVEGYLAVAVVRRSDTSLTWNSVKGKKSCHTAVDRTAGWNIPMGLLFNQTGSCKFDEYFSQSCAPGSDPRSNLCALCIGDEQGENKCVPNSNERYYGYTGAFRCLAENAGDVAFVKDVTVLQNTDGNNNEAWAKDLKLADFALLCLDGKRKPVTEARSCHLAMAPNHAVVSRMDKVERLKQVLLHQQAKFGRNGSDCPDKFCLFQSETKNLLFNDNTECLARLHGKTTYEKYLGPQYVAGITNLKKCSTSPLLEACEFLRK。进一步地，所述锌指蛋白和人乳铁蛋白之间通过连接肽连接。进一步地，所述连接肽的氨基酸数量为12个，所述连接肽由甘氨酸(Gly)和丝氨酸(Ser)组合而成，采用以G2S(即氨基酸序列GGS)为单位的多单位连接实现。进一步地，所述连接肽的氨基酸序列如SEQIDNO.3所示，具体为：GGSGGSGGSGGS。本专利技术对于连接顺序没有特殊要求，只要不限制本专利技术的目的即可。例如，所述锌指蛋白的C末端可以与所述人乳铁蛋白的N末端连接。或者人乳铁蛋白的C末端可以与所述锌指蛋白的N末端连接。亦即，所述融合蛋白的结构域的通式为：锌指蛋白-连接肽-人乳铁蛋白或者人乳铁蛋白-连接肽-锌指蛋白。优选地，所述融合蛋白的结构域从N端到C端依次包括锌指蛋白、连接肽、人乳铁蛋白。所述融合蛋白结构域中，可以包括1个、2个或3个锌指蛋白。优选地，所述融合蛋白的结构域中从N端到C端依次包括锌指蛋白-连接肽-人乳铁蛋白，即ZFP1-hLF，或锌指蛋白-锌指蛋白-连接肽-人乳铁蛋白，即ZFP2-hLF，或锌指蛋白-锌指蛋白-锌指蛋白-连接肽-人乳铁蛋白，即ZFP3-hLF。进一步地，在本案的较佳案例中，列举了所述融合蛋白的结构域氨基序列如SEQIDNO.5所示，具体为：EKPYKCPECGKSFSASAALVAHQRTHTGGSGGSGGSGGSMKLVFLVLLFLGALGLCLAGRRRRSVQWCTVSQPEATKCFQWQRNMRRVRGPPVSCIKRDSPIQCIQAIAENRADAVTLDGGFIYEAGLAPYKLRPVAAEVYGTERQPRTHYYAVAVVKKGGSFQLNELQGLKSCHTGLRRTAGWNVPIGTLRPFLNWTGPPEPIEAAVARFFSASCVPGADKGQFPNLCRLCAGTGENKCAFSSQEPYFSYSGAFKCLRDGAGDVAFIRESTVFEDLSDEAERDEYELLCPDNTRKPVDKFKDCHLARVPSHAVVARSVNGKEDAIWNLLRQAQEKFGKDKSPKFQLFGSPSGQKDLLFKDSAIGFSRVPPRIDSGLYLGSGYFTAIQNLRKSEEEVAARRARVVWCAVGEQELRKCNQWSGLSEGSVTCSSASTTEDCIALVLKGEADAMSLDGGYVYTAGKCGLVPVLAENYKSQQSSDPDPNCVDRPVEGYLAVAVVRRSDTSLTWNSVKGKKSCHTAVDRTAGWNIPMGLLFNQTGSCKFDEYFSQSCAPGSDPRSNLCALCIGDEQGENKCVPNSNERYYGYTGAFRCLAENAGDVAFVKDVTVLQNTDGNNNEAWAKDLKLADFALLCLDGKRKPVTEARSCHLAMAPNHAVVSRMDKVERLKQVLLHQQAKFGRNGSDCPDKFCLFQSETKNLLFNDNTECLARLHGKTTYEKYLGPQYVAGITNLKKCSTSPLLEACEFLRK。但不限于本专利技术较佳案例中所列举的具体形式。在本案的一种实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种融合蛋白质，其结构域中包括锌指蛋白和人乳铁蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白质，其结构域中包括锌指蛋白和人乳铁蛋白。


2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，还包括以下特征中的任一项或多项：
(1)所述锌指蛋白和人乳铁蛋白之间通过连接肽连接，优选地，所述融合蛋白的结构域中从N端到C端依次包括锌指蛋白、连接肽、人乳铁蛋白；
(2)所述锌指蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.2所示；
(3)所述人乳铁蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.4所示。


3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于，特征(1)中，所述融合蛋白结构域中，包括1个、2个或3个锌指蛋白，优选地，所述融合蛋白的结构域中从N端到C端依次包括锌指蛋白--连接肽-人乳铁蛋白，即ZFP1-hLF，或锌指蛋白-锌指蛋白-连接肽-人乳铁蛋白，即ZFP2-hLF，或锌指蛋白-锌指蛋白-锌指蛋白-连接肽-人乳铁蛋白，即ZFP3-hLF。


4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于，还包括以下特征中的任一项或多项：
(1)所述ZFP1-hLF融合蛋白质结构域的氨基酸序列如SEQIDNO.5所示；
(2)所述ZFP2-hLF融合蛋白质结构域的氨基酸序列如SEQIDNO.13所示；
(3)所述ZFP3-hLF融合蛋白质结构域的氨基酸序列如SEQIDNO.17所示；
(4)所述融合蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘佳，陈德富，
申请(专利权)人：上海科技大学，
类型：发明
国别省市：上海;31