抗体及其使用方法技术

本文公开的主题提供了结合KLB和FGFR1的抗体和使用它们的方法。在某些实施方案中，本公开内容的抗体包括双特异性抗体，其结合存在于FGFR1上的表位且结合存在于KLB上的表位。

【技术实现步骤摘要】
抗体及其使用方法本申请是申请日为2014年12月23日、申请号为201480074541.7、专利技术名称为“抗体及其使用方法”的专利技术专利申请的分案申请。优先权声明本申请要求2013年12月23日提交的美国临时专利申请系列号61/920,396和2014年11月18日提交的美国临时专利申请系列号62/081,435的优先权，它们二者通过引用整体并入本文。序列表本申请含有序列表，其已经以ASCII格式电子地提交，且特此通过引用整体并入。所述ASCII拷贝(创建于2014年12月22日)命名为00B206.0170_SL.txt，且大小是155,738字节。
本专利技术涉及结合β-Klotho(KLB)、成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)或二者的抗体以及使用它们的方法。
技术介绍
成纤维细胞生长因子21(FGF21)和它的最接近的同系物FGF19是FGF超家族的成员。FGF21信号传递需要FGF-受体(FGFR)同工型和膜结合的共受体Klotho-β(KLB)(Ogawa等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA104(18):7432-37(2007)；US2010/0184665)。还已经证实FGF19通过与KLB结合的FGFR同工型而发信号(Wu等人，J.Biol.Chem.282(40):29069-29072(2007))。在由哺乳动物物种编码的FGFR的7种主要同工型(1b、2b、3b、1c、2c、3c和4)中，仅三种同工型FGFR1c、2c和3c可以通过FGF19和FGF21(当被共受体KLB结合时)转导信号传递，所述共受体KLB主要在肝、脂肪组织和胰腺中表达(Goetz和Mohammadi,Naturereviews.MolecularCellBiology14,166-180(2013))。在这些受体中，FGFR1c似乎在介导FGF21的代谢作用中起主要作用。不受限于特定理论，据信，FGF21通过在有膜结合的共受体KLB存在下诱导FGFR同工型的同源二聚化而起作用。不同于其它FGF配体，FGF21表现出非常低的对任何单独FGFR的亲和力。但是，通过C-端尾巴区域与KLB的高亲和力结合会将FGF21募集至FGFR/KLB复合物，从而允许FGF21与FGFR相互作用(尽管与单独FGFR是低亲和力)。FGF21被鉴别为一种有效的改变疾病的蛋白剂，其逆转动物疾病模型中的肥胖和II型糖尿病(Kharitonenkov等人，J.Clin.Invest.115(6):1627-35(2005))。已经证实重组FGF21会在瘦素-信号传递-缺陷型(ob/ob或db/db)小鼠或高脂肪饮食(HFD)饲喂的小鼠中减少肝脂质、改善胰岛素敏感性和使血糖控制正常化。还已经在每天用重组FGF21治疗的肥胖的和患糖尿病的恒河猴中观察到血糖的降低和各种心血管风险因素的改善。已经证实FGF21和FGF19会活化肥胖的啮齿类动物中解偶联蛋白1(UCP1)-阳性的脂肪组织(棕色和米色脂肪组织；BAT)的产热功能(Fu等人,Endocrinology145,2594-2603(2004)；Coskun等人,Endocrinology149,6018-6027(2008)；Fisher等人,Genes&Development26,271-281(2012))。尽管目前正在试验重组FGF21或FGF19类似物用于治疗代谢疾病的临床应用，但是它们的用于治疗干预的开发已经被证实是挑战性的。例如，FGF21在非人灵长类动物中的血清半衰期(约2小时)对于实际临床应用而言过短，且在循环中的剩余FGF21蛋白可以通过蛋白水解性裂解而快速地灭活。已经做出努力来通过蛋白质工程改善这些性能，但是这样的修饰可以增加免疫原性和其它修饰特异性的不良作用。另一个重大挑战是来自长期FGF21介导的治疗的长期不良作用的可能性。例如，已经报道FGF21会通过诱导SOCS2(生长激素受体信号传递的一种抑制剂)而诱发肝生长激素抗性(Inagaki等人,CellMetab.8:77-83(2008))。在人类中，生长激素抗性或缺乏与儿童和成年人中的低骨量有关，并且FGF21的转基因过表达或用重组FGF21对小鼠的2周治疗会导致骨矿物质密度的急剧损失。尚未证实，FGF21的骨相关的不良作用可以与有益的代谢作用脱离联系。此外，FGF19的转基因过度产生可以通过FGF受体(FGFR)4的活化而导致肝细胞癌变(Fu等人,Endocrinology145,2594-2603(2004)；Tomlinson等人,Endocrinology143,1741-1747(2002)；French等人,PLoSOne7,e36713(2012))。重组单克隆抗体(Ab)可以作为一种强效治疗模态起作用，因为它们可以提供优良的靶标选择性、药代动力学特性和其它对于药学试剂而言重要的性能(Chan和Carter,Naturereviews.Immunology10,301-316(2010))。例如，据报道，对FGFR1c特异性的抗体拮抗剂会在小鼠和猴中诱导重量减轻(WO2005/037235)，并且激动性抗体介导的FGFR1c的选择性活化足以重演糖尿病小鼠中FGF21导致的胰岛素致敏(WO2012/158704；Wu等人，ScienceTranslationalMed.3(113):1-10(2011))。结合KLB/FGFR1c复合物的抗体已经被提议为活化剂/治疗剂(US7,537,903；WO2011/071783；WO2012/158704)。其他人已经研究了两个替代方案来选择性地活化FGFR1c/KLB复合物，诸如被称作mimAb1的高亲和力抗-KLB抗体(Foltz等人，Sci.Transl.Med.4:162ra153(2012))和与人血清白蛋白(HSA)连接的双特异性抗-FGFR1/KLB亲和体(avimer)多肽C3201(US8,372,952)。鉴于FGF19和FGF21在葡萄糖代谢中的重要作用，本领域中仍然需要开发用于调节FGF19或FGF21介导的活性的治疗分子和方法。
技术实现思路
本公开内容提供了结合KLB的抗体、结合FGFR1的抗体、和结合KLB和FGFR1两者的双特异性抗体、以及使用它们的方法。本专利技术部分地基于结合KLB和FGFR1两者的双特异性抗体的发现，所述双特异性抗体选择性地活化FGFR1c/KLB受体复合物并诱导从FGF21-样活性预见到的有益代谢变化，包括重量减轻以及葡萄糖和脂类代谢的改善，对肝没有显著影响且没有骨量损失。在某些实施方案中，所述抗体是双特异性抗体。例如，且不作为限制，一种分离的本专利技术的抗体可以结合β-Klotho(KLB)和成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)，其中所述抗体结合KLB的C-端结构域。例如且不作为限制，一种分离的本公开内容的抗体结合KLB和FGFR1c两者。在某些实施方案中，所述抗体结合包括氨基酸序列SSPTRLAVIPWGVRKLLRWVRRNY本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.分离的结合β-Klotho(KLB)和成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)的双特异性抗体或其抗原结合部分。/n

【技术特征摘要】
20131223 US 61/920,396;20141118 US 62/081,4351.分离的结合β-Klotho(KLB)和成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)的双特异性抗体或其抗原结合部分。


2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分结合KLB的C-端结构域。


3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分结合包含SEQIDNO:142所示的氨基酸序列的KLB片段。


4.根据权利要求1-3中的任一项所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分结合FGFR1表位，所述FGFR1表位是在包含SEQIDNO:143或SEQIDNO:144所示的氨基酸序列的FGFR1c片段内。


5.根据权利要求1-4中的任一项所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分降低体内血糖水平。


6.根据权利要求1-5中的任一项所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分不显著地影响骨密度。


7.根据权利要求1-6中的任一项所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分不显著地影响肝。


8.根据权利要求1-7中的任一项所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分以比FGF21诱导的水平显著更低的水平在肝中诱导ERK和MEK磷酸化。


9.根据权利要求1-8中的任一项所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分以10-8M至10-13M的Kd结合KLB。


10.根据权利要求1-9中的任一项所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分以10nM至约10μM的Kd结合FGFR1c。


11.根据权利要求1-10中的任一项所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分是单克隆抗体。


12.根据权利要求1-11中的任一项所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分是人抗体、人源化抗体或嵌合抗体。


13.根据权利要求1-12中的任一项所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，其中所述重链可变区包含与SEQIDNO:128所示的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含与SEQIDNO:130所示的序列具有至少95％同一性的氨基酸序列。


14.根据权利要求1-12中的任一项所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
(a)重链可变区CDR1，其包含选自SEQIDNO:1-15的氨基酸序列，及其保守置换；
(b)重链可变区CDR2结构域，其包含选自SEQIDNO:16-31的氨基酸序列，及其保守置换；
(c)重链可变区CDR3结构域，其包含选自SEQIDNO:32-47的氨基酸序列，及其保守置换；
(d)轻链可变区CDR1结构域，其包含选自SEQIDNO:48-62的氨基酸序列，及其保守置换；
(e)轻链可变区CDR2结构域，其包含选自SEQIDNO:63-78的氨基酸序列，及其保守置换；和
(f)轻链可变区CDR3结构域，其包含选自SEQIDNO:79-93的氨基酸序列，及其保守置换。


15.根据权利要求1-12中的任一项所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：
(a)重链可变区CDR1结构域，其包含SEQIDNO:15所示的氨基酸序列，及其保守置换；
(b)重链可变区CDR2结构域，其包含SEQIDNO:31所示的氨基酸序列，及其保守置换；
(c)重链可变区CDR3结构域，其包含SEQIDNO:47所示的氨基酸序列，及其保守置换；
(d)轻链可变区CDR1结构域，其包含SEQIDNO:62所示的氨基酸序列，及其保守置换；
(e)轻链可变区CDR2结构域，其包含SEQIDNO:78所示的氨基酸序列，及其保守置换；和
(f)轻链可变区CDR3结构域，其包含SEQIDNO:93所示的氨基酸序列，及其保守置换。


16.抗-β-Klotho抗体或其抗原结合部分，包含：(a)HVR-H3，其包含选自SEQIDNO:1-15的氨基酸序列，(b)HVR-L3，其包含选自SEQIDNO:79-93的氨基酸序列，和(c)HVR-H2，其包含选自SEQIDNO:16-31的氨基酸序列。


17.根据权利要求16所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：(a)HVR-H1，其包含选自SEQIDNO:1-15的氨基酸序列，(b)HVR-H2，其包含选自SEQIDNO:16-31的氨基酸序列，和(c)HVR-H3，其包含选自SEQIDNO:32-47的氨基酸序列。


18.根据权利要求17所述的抗体，还包含：(a)HVR-L1，其包含选自SEQIDNO:48-62的氨基酸序列，(b)HVR-L2，其包含选自SEQIDNO:63-78的氨基酸序列，和(c)HVR-L3，其包含选自SEQIDNO:79-93的氨基酸序列。


19.根据权利要求18所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：(a)HVR-H1，其包含SEQIDNO:12的氨基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQIDNO:28的氨基酸序列，(c)HVR-H3，其包含SEQIDNO:44的氨基酸序列，(d)HVR-L1，其包含SEQIDNO:59的氨基酸序列，(e)HVR-L2，其包含SEQIDNO:75的氨基酸序列，和(f)HVR-L3，其包含SEQIDNO:90的氨基酸序列。


20.根据权利要求18所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：(a)HVR-H1，其包含SEQIDNO:15的氨基酸序列，(b)HVR-H2，其包含SEQIDNO:31的氨基酸序列，(c)HVR-H3，其包含SEQIDNO:47的氨基酸序列，(d)HVR-L1，其包含SEQIDNO:62的氨基酸序列，(e)HVR-L2，其包含SEQIDNO:78的氨基酸序列，和(f)HVR-L3，其包含SEQIDNO:93的氨基酸序列。


21.根据权利要求20所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：(a)重链可变区，其包含SEQIDNO:128的氨基酸序列，和(b)轻链可变区，其包含SEQIDNO:130的氨基酸序列。


22.根据权利要求20所述的抗体，其中所述抗体或其抗原结合部分包含：(a)重链，其包含SEQIDNO:129的氨基酸序列，和(b)轻链，其包含SEQIDNO:131的氨基酸序列。


23.竞争性地抑制权利要求16-22的任意抗体的结合的抗-KLB抗体或其抗原结合部分。


24.根据权利要求23所述的抗体...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈咏梅，詹姆斯·欧内斯特，金酷松，园田纯一郎，克里斯托夫·斯皮斯，斯科特·斯塔维奇，吴岩，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH