库德毕赤酵母菌（Pichia kudriavzevii）在降解生物胺方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了库德毕赤酵母菌（

【技术实现步骤摘要】
库德毕赤酵母菌(Pichiakudriavzevii)在降解生物胺方面的应用
本专利技术涉及库德毕赤酵母菌在降解生物胺方面的应用，属于食品发酵

技术介绍
生物胺是一类具有生物活性含氮的低分子量有机化合物，主要通过微生物氨基酸脱羧酶作用产生，在食品尤其是发酵食品中普遍存在。生物胺可看作是氮原子中1-3个氢原子被烷基或芳基取代后而生成的物质，是脂肪族、酯环族或杂环族的低分子量有机碱，常存在与动植物体内及发酵食品中。适量的生物胺能促进人体生长、增强代谢活力、增强免疫力和清除自由基等，摄入过量的外源性生物胺，会打乱体内生物胺的平衡，主要会引起头痛，恶心，呼吸急促，心悸，血压过低，肠部痉挛等症状，其中组胺毒性最强，其次是酪胺。目前很多发酵食品如奶酪、酱油、纳豆、鱼露等的生产还是采用传统的自然发酵工艺，开放的发酵环境，极易发生外来微生物的污染，在具有脱羧能力的微生物作用下，使食品中游离氨基酸脱羧生成相应的生物胺。面对生物胺带来的安全性问题，应尽可能降低发酵食品中生物胺的含量。目前，在食品生产过程中降低生物胺含量的方法主要有三种：1)降低前提物氨基酸水平；2)抑制产氨基酸脱羧酶微生物的生长；3)降低氨基酸脱羧酶活性。近年来，筛选具有降解生物胺能力的微生物，用于控制食品中的生物胺的方法成为研究热点，也是最有效可行的降低发酵食品中生物胺的主要方式。但已报道的生物胺降解菌株存在种类少，降解率低的问题。因此，筛选具有高效降解生物胺菌株，对于开展生物胺降解菌株的实际应用研究以及生产健康安全的发酵食品具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术提供了一种酵母菌具备较强生物胺降解能力的，具体为库德毕赤酵母(Pichiakudriavzevii)。所述酵母菌从山东省荣成市日鑫水产有限公司的90天发酵鱼露中筛选分离得到，是一株对生物胺有较强降解能力菌株，经系统分类鉴定，为库德毕赤酵母菌(Pichiakudriavzevii)。本专利技术提供一种库德毕赤酵母菌(Pichiakudriavzevii)在降解生物胺方面的应用。优选的，是在降解发酵食品及鱼类中生物胺方面的应用。本专利技术所述的生物胺包括组胺、酪胺、尸胺、腐胺、色胺、苯乙胺、章鱼胺、亚精胺、精胺。所述酵母菌的保藏方法：从MRS固体培养基(MRS液体培养基+20g/L琼脂)平板上挑选生长良好的单菌落接种至MRS液体培养基中，在25～38℃、150～200r/min条件下培养15～72h，取1mL培养液加人到含有1mL40％甘油的保藏管中，于-80℃冰箱保藏。所述酵母菌的培养方法，步骤为：将保藏的酵母菌接种至液体或固体MRS培养基，在25～38℃、150～200r/min条件下培养15～72h。本专利技术同时提供了一种利用所述酵母菌株进行发酵食品及鱼类中生物胺的控制方法：对酵母菌进行培养后，离心(3000～5000r/min，5～10min，4℃)收集菌体，将菌体用无菌生理盐水(氯化钠0.85％，w/v)制备成1.0×107～1.0×1010CFU/mL的菌悬液，将该菌悬液按照体积比为1％～5％的接种量加入含生物胺的食品中，对其中的生物胺进行降解。本专利技术提供的库德毕赤酵母菌，本身不产生生物胺，且可以降解生物胺，可用于降解产品中的生物胺。本专利技术的有益效果：本专利技术首次从MRS培养基中筛选并证实库德毕赤酵母菌可以降解生物胺，并且其本身不产生物胺。本专利技术公开的菌株能降解9种生物胺(组胺、酪胺、尸胺、腐胺、色胺、苯乙胺、章鱼胺、亚精胺、精胺)，总胺降解率可达88.24％，其中组胺、酪胺、尸胺、腐胺降解率分别为91.97％、93.24％、78.58％、96.03％。本专利技术提供的菌株可同时降解多种生物胺，而且在MRS培养基中表现出良好的降胺能力，对控制食品中的生物胺具有重要意义。附图说明图1是双层显色板法对生物胺降胺菌和产胺菌的分离筛选；a为阴性(潜在降胺菌)，b为阳性(产胺菌)。图2是库德毕赤酵母菌株PCR产物琼脂糖凝胶电泳图图3是HPLC法测定9种生物胺标准品的色谱图。具体实施方式生物胺采用丹磺酰氯柱前衍生-高效液相色谱法进行检测。降解率(％)＝(生物胺初始浓度—生物胺终浓度)*100/生物胺初始浓度。实施例1：降胺菌株库德毕赤酵母菌的筛选鉴定取不同发酵时期的鱼露为样品，取鱼露样品10g加入190mL无菌水中，混匀后梯度稀释，涂布于下层培养基(在MRS培养基的基础上加入磷酸吡哆醛0.05g/L，琼脂18g/L，色氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、酪氨酸、精氨酸各5g/L，pH5.2)固体平板上，37℃培养24h，在倒入上层培养基(溴甲酚紫0.06g/L，琼脂20g/L，pH5.2)，通过颜色反应进行初筛，显紫色的为阳性(即产胺菌)，不变色即黄色为阴性菌(潜在降胺菌)，如图1所示。挑选阴性单菌落反复进行平板划线分离，重复三次得到纯化单菌落，供下一步降解生物胺及鉴定用。将菌株接种于液体MRS培养基中，37℃，180rpm培养48h，取1mL菌液于1.5mL无菌离心管中，离心(12000rpm，2min)收集菌体，经100℃沸水浴2min、液氮速冻，重复步骤5次，备用。使用ITS1F-ITS2R进行菌落PCR扩增，按照以下条件反应：98℃预变性5min后进入循环：98℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸45s，循环30次，72℃修复延伸10min，4℃终止反应。将产物进行1％琼脂糖凝胶电泳，扩增出目标条带(如图2)，将PCR原液送往青岛擎科公司进行DNA测序，将测序结果在NCBI上进行Blast对比，鉴定为Pichiakudriavzevii。对保藏的Pichiakudriavzevii进行活化培养后，离心(5000r/min，10min，4℃)收集菌体，将菌体用无菌生理盐水(氯化钠0.85％，w/v)制备成1.0×108CFU/mL的菌悬液。以2％接种(按体积比)到50mL含氨基酸1％的MRS液体培养基中，37℃、180r/min培养。检测培养72h后培养基中生物胺的含量。结果未检测到九种生物胺，表明此菌株自身不产生生物胺。实施例2：Pichiakudriavzevii在培养基条件下对生物胺的降解配制MMRS液体培养基：在MRS液体培养基中，加入混合生物胺(组胺、酪胺、尸胺、腐胺、色胺、苯乙胺、章鱼胺、亚精胺及精胺50mg/L，自然pH)。将菌株接种在液体MRS培养基中进行活化，37℃，180rpm培养24h。以2％接种(按体积比)到50mL的MMRS培养基中。37℃，180rpm培养72h后，测定培养基中各生物胺含量，与空白组相比，得到该菌株的生物胺降解率；具体结果见表1-3。表1库德毕赤酵母菌株对九种生物胺降解前后峰面积对比表2库德毕赤酵母菌株对九种生物胺降解前后浓度对比表3库德毕赤酵母菌对九种生物胺的降解率结果表明，库德毕赤酵母菌能本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.库德毕赤酵母菌（

【技术特征摘要】
1.库德毕赤酵母菌（Pichiakudriavzevii）在降解生物胺方面的应用。


2.库德毕赤酵母菌（Pichiakudriavzevii）在降解发酵食品及鱼类中生物胺方面的应用。


3.如权利要求1或2所述的应用，生物胺包括组胺、酪胺、尸胺、腐胺、色胺、苯乙胺、章鱼胺、亚精胺、精胺。


4.库德毕赤酵母菌（Pichiakudriavzevii）降解生物胺的培养方法，其特征在于，步骤为：将保藏的酵母菌接种至液体或固体MRS培养基，在25~38℃、150~200r/min条件下培养15~72h。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐莹，朱翠翠，王海英，汪东风，孙逊，赵玉莹，舒丹旭，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东;37