CEACAM1多肽的新应用制造技术

本发明专利技术提供一种CEACAM1多肽的新应用。CEACAM1多肽作为标准品在制备用于定量检测肝癌标志物的试剂盒中的用途，所述CEACAM1多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明专利技术的发明专利技术人经过长期研究及大量试验发现，CEACAM1的含量变化对肝癌的状态具有明显的相关性，将其作为标志物并用CEACAM1制备检测CEACAM1含量的试剂盒，能够准确辅助诊断肝癌的存在、分期和转移。

【技术实现步骤摘要】
CEACAM1多肽的新应用
本专利技术涉及肝癌的检测领域，并具体涉及一种CEACAM1多肽的新应用。
技术介绍
人们谈癌色变。21世纪以来，恶性肿瘤对人类健康的威胁已日趋严重。其致死率仅次于心脑血管疾病，位居第三。肿瘤患者死亡率高的主要原因是不能早期诊断，早期诊断与早期治疗是防治肿瘤与降低死亡率的最有效方法。随着肿瘤细胞的发生，肿瘤患者体内某些蛋白质会发生变化，或产生新的与肿瘤关联的异常蛋白。这些能反应肿瘤存在的化学类物质人们总称为肿瘤标志物。由于肿瘤标志物或不存在于正常成人组织而仅见于肿瘤组织，或在肿瘤组织中的含量大大超过在正常组织里的含量，它们的存在或量变可以提示肿瘤的性质，因此通过对这些异常的蛋白质的检测不仅可以用来诊断肿瘤的发生也可以用来监控药物对肿瘤的治疗进展，对肿瘤的诊治将起到重要作用。用于临床诊断的肿瘤标志物包括癌胚抗原、酶、激素、糖蛋白、癌基因和细胞表面肿瘤抗原等6大类。美国FDA批准了以下血清肿瘤标志物用于肿瘤的辅助诊断：甲胎蛋白(AFP)，癌胚抗原(CEA)，癌抗原CA125，癌抗原CA19-9，癌抗原CA153，前列腺特异性抗原(fPSA,tPSA)，甲状腺球蛋白(Thyroglobulin)，β人绒毛膜促性腺激素(HCGb)，和人附睾分泌蛋白4(HE4)。另外其他常用于临床诊断的肿瘤标志物还包括神经原特异性烯醇化酶(NSE)，降钙素(PCT)，铁结合蛋白(Ferritin)，β2-微球蛋白(beta2-Microglobin)，胃蛋白酶原(Pepsinogen1,2)，和催乳素(Prolactin)等。整体来讲，肿瘤标志物是肿瘤细胞在癌变过程中由于基因的表达水平的变化而生成或减少的抗原和其他生物活性物质，可用于肿瘤的早期诊断、分期、监测肿瘤进程，和评价药物的治疗效果(ASCO，1996)。它会对肿瘤的临床治疗带来巨大的影响，尤其当它能够在临床病症出现之前被检测到，或者可以用于治疗效果的实时检测时。目前，为了满足肿瘤的临床诊断和治疗的需求，肿瘤标志物的研发亟待加速。但是，目前用于早期诊断的肿瘤标志物，大多由于缺乏灵敏度和特异性而不能在体检中广泛应用。对于肝癌，甲胎蛋白和超声波检查是普遍采用的诊断高危病人的方式，并且确实显著提高了肝癌病人的生存率，但灵敏度比较低；肿瘤抗原CA125有更高的灵敏度，但却缺乏特异性。同样地，用于乳腺癌检测的血液肿瘤标志物CA153因灵敏度低在早期诊断中几乎没用。因此，肿瘤的早期诊断、以及良性和恶性肿瘤的区分仍然是一个临床难题，需要新的技术和方法来发现新的肿瘤标志物和提高肿瘤标志物检测的灵敏度和可信度。在恶性肿瘤的诊断中，癌胚抗原(CEA)是重要的指标之一，在人类部分肿瘤中均有明显的高表达，如结肠癌、乳腺癌、胃癌和肺癌等，尤其是在结肠癌患者血清学的检测已用于临床，并被证实CEA表达的升高是结直肠癌复发的重要标志。CEA家族成员均与黏附蛋白的功能相关，因此CEA家族又被学者们命名为癌胚抗原相关黏附分子。目前家族中人们主要关注的是CEACAM1和CEACAM6的作用。癌胚抗原相关细胞黏附分子1(carcinoembryonicantigen-relatedcelladhesionmolecule1，CEACAM1)是一种跨膜糖蛋白，与BGP1(一种胆汁糖蛋白，与癌胚抗原的抗体有交叉反应)高度同源，最初由Ocklind和Obrink在研究papainsolubilized质膜成分对细胞膜表面蛋白抗体细胞聚集抑制功能中和作用时发现。CEACAM1在一些肿瘤中能促进恶性肿瘤的进展和迁移，这提示其在不同肿瘤细胞类型中的作用完全不同。Hokari等研究显示了CEACAM1在HepG2细胞生长中的二元性作用：在悬浮液中其通过细胞间黏附加快肿瘤细胞生长，在单层细胞培养中则抑制肿瘤生长。目前，已有现有技术公开了CEACAM1作为肿瘤标志物的用途，例如：现有技术公开的一种快速检测膀胱癌的试纸，该技术方案公开了将CEACAM1作为膀胱癌标志物的用途。但是，目前还未有报道CEACAM1用于肝癌检测。
技术实现思路
基于此，本专利技术的主要目的是提供CEACAM1多肽作为标准品在制备用于定量检测肝癌标志物的试剂盒中的用途。本专利技术的主要目的是通过以下技术方案实现的：CEACAM1多肽作为标准品在制备用于定量检测肝癌标志物的试剂盒中的用途，所述CEACAM1多肽的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。本专利技术的另一目的是提供一种用于CEACAM1检测的多肽，所述多肽的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。本专利技术的再一目的是提供上述的多肽作为标准品在检测待测样本所含CEACAM1中的应用。在其中一个实施例中，所述的待测样本为血液样本。在其中一个实施例中，所述的检测采用酶联免疫法检测。在其中一个实施例中，所述的检测采用免疫印迹法检测。本专利技术的又一目的是提供一种CEACAM1ELISA检测试剂盒，所述的试剂盒包含上述的多肽的标准品。本专利技术的还一目的是提供一种CEACAM1的ELISA检测方法，所述检测方法包括包被、封闭、加抗原、加酶标二抗、加底物显色和终止的步骤；其中：所述的加抗原步骤包括：将待测样本、CEACAM1标准品溶液分别加入酶标板孔，所述的标准品包括上述的多肽。与现有技术相比，本专利技术具备如下有益效果：本专利技术的专利技术人经过长期研究及大量试验发现，CEACAM1的含量变化对肝癌的状态具有明显的相关性，将其作为标志物并用CEACAM1制备检测CEACAM1含量的试剂盒，能够准确辅助诊断肝癌的存在、分期和转移。专利技术人发现传统的技术方案通常以CEACAM1原核重组蛋白作为标准品，该标准品不易与特异性抗体结合，导致检测的可信度受到负面影响。为克服该缺陷，专利技术人进一步提供一种SEQIDNo.2所示的多肽，该多肽是获取SEQIDNo.1的第497位氨基酸至第515位氨基酸的序列并将第506位脯氨酸(Pro)突变为赖氨酸(Lys)制备而成。以该SEQIDNo.2所示的多肽作为标准品用于CEACAM1检测时，很容易与CEACAM1的抗体发生特异性免疫结合，确保检测结果的准确度，提升检测可信度。并且，该SEQIDNo.2所示的多肽的肽链结构非常稳定，不易被降解，确保标准品质量，为获得可信度高的检测结果进一步提供了保障；并且该多肽的亲水性也比较好，克服了国内生产商研发的重组蛋白溶解性低导致不利于试剂盒的制备的缺陷。附图说明图1为实施例1筛选操作所得扫描图。图2为实施例1筛选操作所得结果的聚类分析结果图。图3为实施例1筛选操作所得结果的火山图。图4、图5、图6为实施例2反向蛋白芯片操作所得结果图。图7为实施例2筛选的CEACAM1、Nidogen1在健康人与肝癌患者中的含量比较图。图8为实施例4分别采用本专利技术SEQIDNo.2所示的标准品与市购标准品进行样品检测的结果。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.CEACAM1多肽作为标准品在制备用于定量检测肝癌标志物的试剂盒中的用途，所述CEACAM1多肽的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.CEACAM1多肽作为标准品在制备用于定量检测肝癌标志物的试剂盒中的用途，所述CEACAM1多肽的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。


2.一种用于CEACAM1检测的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。


3.权利要求2所述的多肽作为标准品在检测待测样本所含CEACAM1中的应用。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的待测样本为血液样本。


5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄若磐，匡治州，黄伟，毛应清，
申请(专利权)人：广州瑞博奥生物科技有限公司，广州瀚普创展医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44