CALB2及定量检测CALB2的试剂的应用及工具制造技术

本发明专利技术涉及CALB2作为肝癌转移检测分子靶点的应用。本发明专利技术发现高转移肝癌细胞株中CALB2表达量上调，定量检测CALB2可作为检测肝癌转移的用途。本发明专利技术的研究成果为临床医师制定个性化治疗方案提供理论基础，并且能够为抗肝癌转移药物的开发提供新的药物靶点。

【技术实现步骤摘要】
CALB2及定量检测CALB2的试剂的应用及工具
本专利技术属于分子生物学和肝癌防治领域，更具体而言，本专利技术涉及预测肝癌转移领域。本专利技术提供了CALB2可作为一种检测肝癌转移的应用，利用定量检测CALB2分子的表达可设计出预测肝癌转移的试剂。
技术介绍
肝脏是人体物质代谢，能量转换及供应的枢纽和主导器官。癌症是人口死亡的第二位原因。肝癌发病率高而且死亡率高，其5年生存率仅5％-6％。目前原发性肝癌已上升为我国第二位癌症杀手。由于原发性肝癌早期一般无任何症状，一旦出现临床表现，病情大多已进入中期或晚期，而且恶性程度高、预后差、侵袭转移性强。临床数据显示，肝癌的高侵袭转移能力和术后高复发转移率是影响肝癌病人长期生存的重要因素。因此，肝癌转移是生命科学需要迫切解决的问题。肝癌转移分为远处转移和肝内转移。转移进程大体包含肿瘤细胞获得向外侵袭的能力使得细胞脱离原发器官侵入周围组织并穿入淋巴管和血管；随循环系统运行，停留；肿瘤细胞增殖，形成转移灶。染色体水平的变化，癌基因表达增加，抑癌基因的失活，上皮细胞-间充质转化，肿瘤细胞间蛋白水解酶的合成，细胞与基底膜的黏着，免疫系统免疫识别低下，一些细胞因子及受体的改变等因素都可能促进肝癌的转移。细胞迁移与运动能力的提高是引起肿瘤侵入周围组织和发生远处转移的关键因素。但是，调控肝癌细胞运动侵袭能力的分子机制仍不明朗，难以开发出有效的抑制肝癌转移的药物，因此，寻找并发现肝癌转移相关蛋白用于转移和复发研究、药物靶标的设计，这对于实现肝癌病人生存率的提高，具有重要意义。CALB2是一种钙结合蛋白，在听觉神经元中含量丰富。CALB2蛋白在多种细胞功能中起作用，包括信息靶向和细胞内钙缓冲，参与钙信号传导通路。Ca2+是协调内质网-线粒体的相互作用，调节细胞凋亡的信使。线粒体Ca2+动力学还参与细胞能量代谢的调节以及细胞运动和神经递质释放等过程。CALB2还是一种间皮瘤诊断标志(DoglioniC,etal.Calretinin:ANovelImmunocytochemicalMarkerforMesothelioma.AmericanJournalofSurgicalPathology,1996,20(9):1037–1046；ChuAY,etal，UtilityofD2-40,anovelmesothelialmarker,inthediagnosisofmalignantmesothelioma.ModernPathology,2005,18(1):105–110.)。有研究显示，正常结肠上皮细胞中没有CALB2的表达，但在原发性结肠癌细胞中发现有表达(GotzosV,etal.Selectivedistributionofcalretinininadenocarcinomasofthehumancolonandadjacenttissues.AmericanJournalofSurgicalPathology,1999,23(6):701–711；GotzosV,etal.Heterogeneityofexpressionofthecalcium-bindingproteincalretinininhumancoloniccancercelllines.AnticancerResearch,1996,16(6B):3491–3498.)。结直肠癌细胞经5-FU治疗后，CALB2可通过内在的线粒体途径参与凋亡诱导(StevensonL,etal.Calbindin2(CALB2)Regulates5-FluorouracilSensitivityinColorectalCancerbyModulatingtheIntrinsicApoptoticPathway.PlosOne,2011,6(5):1575-1581.)。还有报道显示CALB2作为间质细胞内的因子,通过PLC-Ca2+-PKC信号通路参与调节类固醇激素的合成，并可能是通过加强PI3K-AKT和ERKl/2信号促进间质细胞增殖(XuW,etal.CalretininParticipatesinRegulatingSteroidogenesisbyPLC-Ca2+-PKCPathwayinLeydigCells.ScientificReports,2018,8.)。然而目前，关于CALB2能否调控肝癌细胞的生长，迁移和侵袭以及如何调控，并没有报道。
技术实现思路
本专利技术提供了检测CALB2基因表达的产品在制备诊断肝癌转移的工具中的应用。进一步，所述检测CALB2基因表达的产品包括检测CALB2基因mRNA水平的产品、和/或检测CALB2蛋白水平的产品。进一步，所述检测CALB2基因表达的产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片检测CALB2基因及其表达产物的表达水平以诊断肝癌转移的产品。进一步，所述用RT-PCR诊断肝癌转移的产品至少包括一对特异性扩增CALB2基因的引物；所述用实时定量PCR诊断肝癌转移的产品至少包括一对特异性扩增CALB2基因的引物；所述用免疫检测诊断肝癌转移的产品包括：与CALB2蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断肝癌转移的产品包括：与CALB2基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断肝癌转移的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与CALB2蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与CALB2基因的核酸序列杂交的探针。所述实时定量PCR诊断肝癌转移的产品至少包括的一对特异性扩增CALB2基因的引物如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示。本专利技术还提供了一种诊断肝癌转移的工具，所述工具包括检测CALB2基因表达的试剂；所述试剂包括检测CALB2基因mRNA的引物和/或探针、检测CALB2蛋白的抗体。本专利技术所涉及的肝癌转移诊断包括判断受试者是否已经发生肝癌转移、是否存在肝癌转移的风险、或是否已经复发转移。本专利技术具有以下优点：由于目前肝癌转移已成为影响肝癌患者预后的重要因素，本专利技术公开了一个特异性的分子标志物CALB2，定量检测CALB2表达可作为预测肝癌转移的重要分子标志物。附图说明：图1.CALB2基因在肝癌组织与癌旁组织的差异表达具体实施方式以下结合附图对本专利技术的实施例进行详细说明，但是本专利技术可以由权利要求限定和覆盖的多种不同方式实施。本专利技术中的实验操作通常是按照常规实验条件进行，如Sambrook等人著，分子克隆：实验室指南(NewYork：ColdSpringHarborLaboratoryPress,1989)中所述条件，也可按照实施例中实验条件操作，试剂使用可按照制造厂商所附说明使用。实施例1CALB2基因在肝癌组织与癌旁组织的差异表达1，收集有发生转移的肝癌组织及其癌旁(离癌组织最少5cm，具体见取样标准)正常组织50例，无转移的肝癌组织及其癌旁正常组织50例。组织样本由病理科医生取样，取样标准为(1)原发肝癌，无其他疾病，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.CALB2的应用，其特征在于，CALB2作为检测肝癌转移分子靶点的应用。/n

【技术特征摘要】
1.CALB2的应用，其特征在于，CALB2作为检测肝癌转移分子靶点的应用。


2.定量检测CALB2的试剂在制备肝癌转移诊断、肝癌转移预测预后或肝癌转移复发评估工具中的应用。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测CALB2的试剂包括检测CALB2基因表达量的试剂。


4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述检测CALB2的试剂包括能够定量CALB2基因mRNA的试剂，和/或能够定量CALB2蛋白的试剂。


5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述能够定量CALB2基因mRNA的试剂包括实时定量PCR中使用的特异性扩增CALB2基因的引物；所述能够定量CALB2蛋白的试剂包括特异性结合CALB2蛋白的抗体。<...

【专利技术属性】
技术研发人员：张丽华，褚宏伟，赵宝锋，杨开广，梁振，张玉奎，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21