一种γ突触核蛋白(SNCG)的胶体金试纸条及其制备方法和用途技术

本发明专利技术提供了一种SNCG胶体金试纸条，所述试纸条从加样端开始依次为样本垫、金结合物垫、反应膜和吸收垫，所述金结合物垫含有第一鼠抗SNCG单克隆抗体，所述反应膜上还有第二鼠抗SNCG单克隆抗体。本发明专利技术制备的SNCG胶体金试纸条，除了可以在医院完成常规检测外，还可以带至家中自行完成检测，相比ELISA，具有方便、快捷、经济、高效的特点，更加适用于肿瘤的普筛。

【技术实现步骤摘要】
一种γ突触核蛋白(SNCG)的胶体金试纸条及其制备方法和用途
本专利技术属于肿瘤标志物检测领域，具体地，本专利技术涉及用于检测肿瘤的γ突触核蛋白(SNCG)的胶体金试纸条及其制备方法和用途。
技术介绍
近年来，恶性肿瘤已成为全球范围内严重危害人类健康及生命的重大疾病之一。人们谈癌色变，并普遍认为癌症为不治之症，这主要源于其治愈率、死亡率高并具有广泛的分布性。数据显示，2015年，我国新发癌症病例429.2万例，死亡281.4万例。我国癌症发病率接近世界水平，但死亡率高于世界水平。癌症死亡率居高不下，一个重要原因在于我国癌症发现较多处于中晚期。美国近些年来癌症的发病率有所下降，其5年生存率大约在60％至70％，而我国肿瘤患者5年生存率大约在30％左右。现有数据表明，2015年全国新发病例最多的是肺癌，其次是胃癌、食管癌、肝癌、结直肠癌、乳腺癌和膀胱癌等(WanqingChen等，CancerStatisticsinChina，2015.CACANCERJCLIN2016；66:115–132.)。癌症高发，增加的不仅仅是患者的伤痛，还给家庭、社会带来沉重的经济负担。相关资料估计，每年全国因肿瘤造成的门诊和住院花费数百亿元，远高于其他慢性病的医疗费用，是卫生总费用上涨的重要因素之一。癌症的高致死率主要由于癌细胞具有转移和侵袭能力，约90％的癌症病人死于癌细胞的转移，然而早期的治疗干预则会提高治疗效果。在肿瘤确诊之前若病灶已经发生多处微小转移，即便有些癌症仍可能治愈，但希望大大降低。因此，早期诊断和治疗对于提高癌症病人的生存率具有至关重要的意义。发展中国家癌症患者的死亡率高于发达国家的一个很重要原因即是诊断不及时，未在早期及时发现癌症。当前一些较为常见的检测手段，如X线、超声、PET-CT、核磁共振成像等影像学方法在癌症诊断方面的作用是值得肯定的，但由于准确度等问题，它们在临床应用上仍存在着局限性，有时甚至会与病理诊断结果存在出入，对于一般家庭而言，多次使用核磁共振检测所需花费太大，这就导致了在癌症检测时间上的延误；一些有一定放射性的检测方法，如X线、CT、PET或其组合，也不适于频繁检测；而通过穿刺获取病人组织样本进行组织化学分析这一方法，耗时长、操作复杂且对病人损害较大。相比而言，肿瘤早期检测期望实现具有对正常人群及疑似患病人群初步诊断并允许频繁检测的目标，从这些角度来看，以上方法不适合作为广泛人群癌症早期检测。发展成本低、易操作、便携式、低损伤、高准确性和快速的癌症早期检测方法为当前所急需。随着科技日新月异，飞速发展，基因类分子诊断的研究也正蓬勃发展，但由于检测指标的成熟度及项目准入审批等原因，目前临床应用仍较少。肿瘤蛋白标记物是肿瘤细胞产生和释放的某种物质，常以抗原、酶、蛋白或肽类激素等代谢产物的形式存在于病人肿瘤细胞组织内或宿主体液、排除物中，根据其生化或免疫特性可以识别或诊断肿瘤。肿瘤蛋白标记物在临床上主要用于对原发肿瘤的发现、肿瘤高危人群的筛选、良性和恶性肿瘤的鉴别诊断、肿瘤发展程度的判断肿瘤治疗效果的观察和评价以及肿瘤复发和预后的预测等。近年来，新的肿瘤标记物不断发现、检查手段不断完善和改进，使得其灵敏性和准确性不断提高，为肿瘤患者的早期诊断和早期治疗提供更确切充足的依据。在免疫试剂产品的实际检测应用中，抗原抗体反应是关键。γ突触核蛋白(γ-synuclein，γ-SYN)是通过比较cDNA文库的方法筛选出的一个在浸润性乳腺癌文库中高表达而在正常乳腺组织中无表达的基因，序列比对发现其与已知的生长因子和癌基因没有同源性，但与一类神经相关泛白SYN有着很好的同源性，从而作为SYN家族第3个成员而被命名为γ-SYN。γ-SYN作为SYN家族的一员，与该家族的另两个成员α-SYN、β-SYN的基因定位于不同染色体区域，分别位于4q21.3-q22(α-SYN)、5q35(β-SYN)和10q23(γ-SYN)。γ-SYN与α-SYN、β-SYN有着55.9％和54.3％的氨基酸序列同源性，SYN家族蛋白是14000大小的细胞浆蛋白，在生理状态下主要特异性地表达在神经试剂盒。γ-SYN被证实在肿瘤尤其是雌激素相关肿瘤中发挥着与肿瘤增生、浸润和转移相关的重要作用。γ-SYN作为一种与乳腺癌发生、转移相关的癌基因，其过表达并不是由于γ-SYN基因扩增引起的。通过序列分析也并未发现γ-SYN点突变的存在，预示γ-SYN的过表达实在mRNA转录调控水平上发生了改变，通过对γ-SYN启动子调控区进行分析，发现在γ-SYN的第1个外显子区存在一个CpG岛，而高表达的乳腺癌细胞系和组织中该CpG岛均有去甲基化现象，不同肿瘤中存在不同的去甲基化谱这与γ-SYN表达的组织特异性有关。RNA印迹分析(Northernblot)发现γ-SYN在大脑黑质、丘脑中呈高度表达，而在正常的乳腺、肝、前列腺、肺和小肠等组织中均无表达，但在乳腺癌组织中，通过反转录聚合酶链反应和原位杂交的方法均检测到了γ-SYN的异常表达，随后在蛋白水平上利用印迹分析(Westernblot)和组织化学的方法均检测到了γ-SYN的表达，并发现其表达与乳腺癌分期相关。Liu等(LiuH等，Lossofepigeneticcontrolofsynuclein-gammageneasamolecularindicatorofmetastasisinawiderangeofhumancancers.CancerRes.2005Sep1；65(17):7635-7643)利用免疫组化的方法，发现γ-SYN(即SNCG，以下简称SNCG)在肝癌、胃癌、食管癌、结肠癌、肺癌、前列腺癌和子宫内膜癌等肿瘤中均存在较高的表达，而与之对应的正常组织几乎没有表达，同时在I期肿瘤中SNCG的表达低于II、III期肿瘤，表明SNCG的表达与多种肿瘤的分期均有相关性。
技术实现思路
目前，在临床检测领域尚无SNCG的检测方法，在专利和科研文献领域，有使用ELISA技术平台检测SNCG的报道，但ELISA相比胶体金而言，检测过程要繁琐和耗时，且无法实现床边检测(POCT),因此，当前对更方便、快捷、经济、高效的SNCG检测方法存在需求。基于现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种SNCG的胶体金试纸条，本专利技术还提供了该试纸条的制备方法及其在制备癌症检测试剂盒中的用途。本专利技术涉及一种SNCG胶体金试纸条，所述试纸条从加样端开始依次为样本垫、金结合物垫、反应膜和吸收垫，所述金结合物垫含有第一鼠抗SNCG单克隆抗体，所述反应膜上还有第二鼠抗SNCG单克隆抗体。在一具体方面中，本专利技术的试纸条的第一鼠抗SNCG单克隆抗体由保藏号为CGMCCNO.2469的杂交瘤细胞株分泌。在一具体方面中，本专利技术的试纸条的第二鼠抗SNCG单克隆抗体由保藏号为CGMCCNO.2468的杂交瘤细胞株分泌。所述保藏号为CGMCCNO.2469的杂交瘤细胞株和保藏号为CGMCCNO.2468的杂交瘤细胞株制备SNCG单克隆抗体的方法，描本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种SNCG胶体金试纸条，其特征在于，所述试纸条从加样端开始依次为样本垫、金结合物垫、反应膜和吸收垫，所述金结合物垫含有第一鼠抗SNCG单克隆抗体，所述反应膜上还有第二鼠抗SNCG单克隆抗体。/n

【技术特征摘要】
20190129 CN 2019100866774;20190129 CN 2019100875561.一种SNCG胶体金试纸条，其特征在于，所述试纸条从加样端开始依次为样本垫、金结合物垫、反应膜和吸收垫，所述金结合物垫含有第一鼠抗SNCG单克隆抗体，所述反应膜上还有第二鼠抗SNCG单克隆抗体。


2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述第一鼠抗SNCG单克隆抗体由保藏号为CGMCCNO.2469的杂交瘤细胞株分泌。


3.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述第二鼠抗SNCG单克隆抗体由保藏号为CGMCCNO.2468的杂交瘤细胞株分泌。


4.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述金结合物垫上第一鼠抗SNCG单克隆抗体的含量为0.1-0.2μg/cm2，优选为0.12-0.18μg/cm2，进一步优选为0.13-0.17μg/cm2，最优选为0.133-0.167μg/cm2。


5.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述金结合物垫上酪蛋白钠的含量为0.02-0.09mg/cm2，优选为0.03-0.08mg/cm2，进一步优选为0.04-0.07mg/cm2，最优选为0.042-0.067mg/cm2。


6.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐小梅，寿成超，刘彩云，王欢，李晓楠，荆志强，韩晓亮，叶志海，王建铭，
申请(专利权)人：北京现代高达生物技术有限责任公司，博尔诚北京科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11