一种保元汤制剂指纹图谱的建立方法技术

本发明专利技术提供一种保元汤制剂指纹图谱的建立方法，采用UPLC‑DAD‑ELSD法，按照下述条件进行检测：色谱柱：十八烷基键合硅胶色谱柱；DAD检测器串联ELSD检测器，检测波长258‑262nm；流动相A：乙腈，流动相B为醋酸铵缓冲溶液，梯度洗脱。本发明专利技术提供的方法，能够一次测定得到指纹图谱，且该方法建立的指纹图谱所提供的化学信息丰富，通过DAD检测到41个共有峰，ELSD检测到19个共有峰，归属了12个已知峰，能够全面的反应保元汤的特性，具有良好的专属性，为保元汤制剂的质量控制提供依据，具有良好的实用性。

【技术实现步骤摘要】
一种保元汤制剂指纹图谱的建立方法
本专利技术涉及药物检测
，尤其涉及一种保元汤制剂指纹图谱的建立方法。
技术介绍
中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示其化学特征的色谱图或光谱图。它可以较全面地反映药材所含化学成分的种类和数量，有效地体现中药成分的整体性和综合作用，以其快速、准确等特点已被广泛运用于中药分析鉴定和质量控制等方面。保元汤出自明孙志宏编纂的《简明医彀》(1629年)，是古代经典名方，主“元气虚弱，精神倦怠，肌肉柔慢，饮食少进，面青白，睡卧宁静及有杂证，皆属虚弱，宜服”，其组方由人参、黄芪、甘草、肉桂组成，煎煮时加生姜一片。作为中医药传承与发展过程中保留下来的中药方剂杰出代表之一，在现代临床上有着广泛的应用，主要用于冠心病、慢性肾衰、再生障碍性贫血、乙型肝炎、白细胞减少等病证的治疗。目前，中国药典中以人参皂苷Rg1/Re、人参皂苷Rb1作为人参质控标准，以黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷作为黄芪质控标准，以甘草苷、甘草酸作为甘草质控标准，以桂皮醛作为肉桂质控标准。但由于保元汤药味较多，成分复杂，个别成分的定性定量分析仍难以全面反应保元汤的全面信息。此外，由于地理气候条件、采收时间和预处理方式等方面的差异，不同产区的同种中药其化学成分含量存在较大差异。因此，建立一种保元汤的指纹图谱，对于保元汤的质量控制具有十分重要的意义。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供一种保元汤制剂指纹图谱的建立方法。为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案是：一种保元汤制剂指纹图谱的建立方法，采用UPLC-DAD-ELSD法，包括以下步骤：(1)供试品溶液和混合对照品溶液的配制：将保元汤制剂制成供试品溶液；取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、芒柄花素、甘草苷、甘草酸单铵盐、芹糖异甘草苷、异甘草苷和肉桂酸对照品，用溶剂配制成混合对照品溶液；(2)对所述混合对照品溶液和供试品溶液进行检测，色谱条件为：色谱柱：十八烷基键合硅胶色谱柱；DAD检测器串联ELSD检测器；检测波长258-262nm；流动相A：乙腈，流动相B：醋酸铵缓冲溶液；洗脱方式为梯度洗脱。相对于现有技术，本专利技术提供的保元汤制剂指纹图谱的建立方法，采用梯度洗脱的方式在一个流动相系统下，利用紫外检测器与蒸发光检测器串联技术，一次测定得到指纹图谱，通过指纹图谱即可同时检测出保元汤四味中药材中的多种成分，且该方法建立的指纹图谱所提供的化学信息丰富，通过DAD检测到41个共有峰，ELSD检测到19个共有峰，归属了12个已知峰，能够全面的反应保元汤的特性，具有良好的专属性。用本专利技术所提供的方法建立的保元汤的指纹图谱，能有效地表征保元汤药材的质量，有利于全面监控药材的质量，为保元汤制剂的质量控制提供依据；且该方法具有方法简便、稳定、精密度高、重现性好等优点，具有良好的实用性。本专利技术中所述用于保元汤的原料为人参、黄芪、甘草和肉桂，附加生姜一片。本专利技术所述保元汤制剂包括保元汤的液体制剂和固体制剂，所述液体制剂包括保元汤水煎液和保元汤口服液，所述保元汤固体制剂的剂型包括片剂、粉剂、颗粒剂或胶囊剂等。可选的，混合对照品溶液配制中所用溶剂可为甲醇或乙醇，优选为甲醇。优选的，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：0-5min，5％流动相A，95％流动相B；5-6min，5％→7％流动相A，95％→93％流动相B；6-16min，7％→23.5％流动相A，93％→76.5％流动相B；16-24min，23.5％流动相A，76.5％流动相B；24-26min，23.5％→26％流动相A，76.5％→74％流动相B；26-30min，26％→32％流动相A，74％→68％流动相B；30-37.5min，32％→52％流动相A，68％→48％流动相B；37.5-40min，52％→90％流动相A，48％→10％流动相B；40-44min，90％流动相A，10％流动相B；44-46min，90％→50％流动相A，10％→40％流动相B。优选的梯度洗脱顺序，有利于提高各组分之间的分离度，提高检测的灵敏度。优选的，ELSD检测器的条件为：雾化器温度为38-42℃，漂移管温度为58-62℃，载气流速为1.5-1.7L/min。更优选的，ELSD检测器的条件为：雾化器温度为40℃，漂移管温度为60℃，载气流速为1.6L/min。优选的蒸发管检测器的参数设置有利于提高检测的灵敏度，提高各组分之间的分离度。优选的，所述醋酸铵缓冲液的浓度为0.8-1.2mmol/L，pH为4.3-4.7。更优选的，所述醋酸铵缓冲液的浓度为1.0mmol/L，pH为4.5。优选的流动相的浓度、pH值，可以减少谱带拖尾，改善峰形，从而有利于提高各组分之间的分离度。优选的，流速为0.4-0.6mL/min，柱温为25-35℃。更优选的，流速为0.5mL/min，柱温为30℃，进样体积为5μL。优选的流速和柱温，有利于进一步提高各组分之间的分离度。优选的，检测波长为260nm。优选的检测波长，可尽量避免中药提取物中大量杂质对检测的干扰，提高检测的灵敏度。优选的，所述色谱柱的规格为100*4.6mm，填料直径为2.7μm。更优选的，所述色谱柱为AgilentProshell120EC-C18。优选的色谱柱规格、型号可以使各组分峰形、分离度及检测的灵敏度俱佳，且基线干扰较小。优选的，所述供试品溶液的配制包括如下步骤：精密量取所述保元汤液体制剂或保元汤固体制剂的水溶液，加入无水乙醇，涡旋，离心，取上清液蒸干后，甲醇溶解定容，过滤，得供试品溶液。优选的，无水乙醇的加入量为量取保元汤液体制剂或保元汤固体制剂的水溶液体积的5.8-6.2倍，将上清液蒸干后，用甲醇定容至2mL。保元汤水煎液的制备方法步骤如下：将人参3.75g、黄芪7.5g、甘草1.85g和肉桂0.75g混匀，附加生姜1片，加入8-12倍量的水浸泡25-35min，武火煮沸，文火煎煮35-45min，过滤，60℃减压浓缩，加水定容至25mL，得保元汤水煎液。保元汤的原料含有4-5味药材，水提液中含有大量糖类及蛋白质等成分，固体制剂中含有多种辅料，通过上述制备方法可以减少杂质的干扰，并使各检测成分的色谱峰的峰形、色谱峰的响应值及分离度良好。优选的，所述混合对照品溶液中人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的浓度分别为200μg·mL-1；毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、甘草苷、芹糖异甘草苷、甘草酸单铵盐、肉桂酸、芒柄花苷、芒柄花素的浓度分别为250μg·mL-1；异甘草苷的浓度分别为100μg·mL-1。优选的对照品溶液的浓度，有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种保元汤制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，采用UPLC-DAD-ELSD法，包括以下步骤：/n(1)供试品溶液和混合对照品溶液的配制：/n取保元汤制剂制成供试品溶液；/n取人参皂苷Rg

【技术特征摘要】
1.一种保元汤制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，采用UPLC-DAD-ELSD法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液和混合对照品溶液的配制：
取保元汤制剂制成供试品溶液；
取人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、芒柄花素、甘草苷、甘草酸单铵盐、芹糖异甘草苷、异甘草苷和肉桂酸对照品，用溶剂配制成混合对照品溶液；
(2)对所述混合对照品溶液和供试品溶液进行检测，色谱条件为：
色谱柱：十八烷基键合硅胶色谱柱；
检测器：DAD检测器串联ELSD检测器；
检测波长：258-262nm；
流动相A：乙腈，流动相B：醋酸铵缓冲溶液；
洗脱方式为梯度洗脱。


2.如权利要求1所述的保元汤制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述梯度洗脱的洗脱程序如下：
0-5min，5％流动相A，95％流动相B；
5-6min，5％→7％流动相A，95％→93％流动相B；
6-16min，7％→23.5％流动相A，93％→76.5％流动相B；
16-24min，23.5％流动相A，76.5％流动相B；
24-26min，23.5％→26％流动相A，76.5％→74％流动相B；
26-30min，26％→32％流动相A，74％→68％流动相B；
30-37.5min，32％→52％流动相A，68％→48％流动相B；
37.5-40min，52％→90％流动相A，48％→10％流动相B；
40-44min，90％流动相A，10％流动相B；
44-46min，90％→50％流动相A，10％→40％流动相B。


3.如权利要求1所述的保元汤制剂指纹图谱的建立方法，其特征在于，ELSD检测器的条件为：雾化器温度为38-42℃，漂移管温度为58-62℃，载气流速为1.5-1.7L/min。

【专利技术属性】
技术研发人员：李晓波，张敏，王梦月，李寅庆，侯金才，秦玉霞，
申请(专利权)人：河北神威药业有限公司，神威药业集团有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13