用于结直肠腺瘤诊断的外泌体RNA及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物检测领域，更具体涉及生物的分子检测，更具体涉及一组与结直肠腺瘤相关的外泌体RNA分子标志物及其应用。

【技术实现步骤摘要】
用于结直肠腺瘤诊断的外泌体RNA及其应用
本专利技术涉及生物检测领域，更具体涉及生物的分子检测，更具体涉及一组与结直肠腺瘤相关的外泌体RNA分子标志物及其应用。
技术介绍
结直肠腺瘤起源于结直肠黏膜腺上皮组织，从组织学角度上属于肿瘤性息肉，文献报道其癌变率在2.9％-9.4％，尤其是个别病理类型如绒毛管状腺瘤癌变率更甚。有报道称大部分结直肠癌均由结直肠腺瘤发展而来，因此目前普遍认为结直肠腺瘤是结直肠癌的癌前病变，与结直肠癌的发生发展密切相关。而在我国，流行病学显示结直肠癌发病率及死亡率逐年上升，及时地发现和治疗结直肠腺瘤可降低结直肠癌发生率及死亡率，因此防治结直肠腺瘤在预防结直肠癌的发生发展中占据重要地位。目前临床上主要通过结肠镜检查来明确结直肠病变，并通过对病变进行活组织检查来判断良恶性，进一步指导临床诊疗。但结直肠腺瘤直径通常较小，时常位于结肠粘膜皱襞间导致漏诊，而且结肠镜下的病变检出率高低取决于检查医师能力及经验、结肠镜配置高低、受试者肠道清洁程度、受检者配合程度等多种因素，且具有一定几率发生出血、穿孔等严重并发症，在所有人群中进行此检查受到一定的限制。目前临床上存在的无创性检测手段包括粪便潜血检测、血液肿瘤标志物检测等，虽然检测方法简单、受试者接受程度高、风险低，但在病变检出的灵敏度及特异度仍存在一定不足，因此开发一种高灵敏度、特异度的无创结直肠腺瘤检测方法显得尤为重要。作为近年来国内外的研究热点，细胞外囊泡(ExtracellularVesicles,EVs)的出现使人们更进一步加深了对细胞间相互作用的认识。外泌体(Exosome)是细胞外囊泡中最受关注的类型，其是指由细胞内多泡体与细胞膜融合后被细胞分泌释放至细胞外的小型细胞外囊泡，外泌体外层是与细胞膜相似的双层膜结构，直径通常介于30～150nm之间。多年来研究发现外泌体内部富含DNA、RNA及蛋白质等多种活性物质，被细胞释放后可广泛分布于血液、唾液、尿液、乳汁和胸腹水等各种体液中，研究发现外泌体作为细胞间信息传递的重要媒介，可参与到人体内多种病理生理过程，如抗原呈递、细胞凋亡、炎症反应、肿瘤发生发展及转移等。由于外泌体内部携带的RNA被磷脂双分子层包裹，其对于血液环境中的蛋白酶与RNA酶降解有一定的抵御能力，其作为诊断检测靶标具有天然的优势。目前对于外泌体中较短的miRNA作为肿瘤标记物的研究较多，而对于长链RNA(包括mRNA、lncRNA)由于其丰度较低、更易于降解，对其实现检测具有更高技术难度，考虑到长链RNA的种类与多样性远高于miRNA，对其作为标记物的潜力进行挖掘与开发具有明显的商业意义与社会价值。
技术实现思路
专利技术人经过多年的研究，筛选获得了与结直肠腺瘤密切相关，能够用于临床诊断RNA分子标志物，其包括一个长链非编码RNAlnc-MKRN2-42:1以及三个基因的转录本：PPDPF、TOP1和C19ORF43。所述RNA分子标志物不论单独使用还是部分或者全部的联合使用均能够高灵敏度和特异性的指示结直肠腺瘤，具有优越的诊断性能。本公开的第一个方面提供了一种用于结直肠腺瘤诊断、预后判断、疗效监测和/或复发监控的RNA分子标志物，其包括选自lnc-MKRN2-42:1、PPDPF基因转录本、TOP1基因转录本和C19ORF43基因转录本中的一种或更多种(例如两种、三种或四种)RNA分子的组合。在一个实施方案中，所述lnc-MKRN2-42:1的序列如SEQIDNO：13所示，具体为；GCCGGGCACAGUGGCGCGUGCCUGUAGUCCCAGCUACUCGGGAGGCUGAGGUGGGAGGAUCGCUUGAGCCCAGGAGUUCUGGGCUGUAGUGCGCUAUGCCGAUCGGGUGUCCGCACUAAGUUCGGCAUCAAUAUGGUGACCUCCCGGGAGCGGGGGACCACCAGGUUGCCUAAGGAGGGGUGAACCGGCCCAGGUCGGAAACAGAGCAGGUCAAAACUCCCGUGCUGAUCAGGAGACAGAGUUUGUGAGCAGACAACUGGUCUGACCAAAAUUUAUGAGGUGGGAAUUUCCUCU(SEQIDNO:13)；PPDPF基因转录本的的序列如SEQIDNO：14所示，具体为：ACCCCGCGCGCGCCUCUCUGUCGUGGCGCGGCUUCCCGCGGUCUUCUCUGCAAAUGGGCUCCGUGGCCUAGCGCCCCCGUCCCCGCCACCCGUGAUCGUGCGCCGAGGCCCGCGAGGGGUCGCCGCCCAGAUCCCACCAGCCAGCAAGCUAAAGCAUGGCGGCCAUCCCCUCCAGCGGCUCGCUCGUGGCCACCCACGACUACUACCGGCGCCGCCUGGGUUCCACUUCCAGCAACAGCUCCUGCAGCAGUACCGAGUGCCCCGGGGAAGCCAUUCCCCACCCCCCAGGUCUCCCCAAGGCUGACCCGGGUCAUUGGUGGGCCAGCUUCUUUUUCGGGAAGUCCACCCUCCCGUUCAUGGCCACGGUGUUGGAGUCCGCAGAGCACUCGGAACCUCCCCAGGCCUCCAGCAGCAUGACCGCCUGUGGCCUGGCUCGGGACGCCCCGAGGAAGCAGCCCGGCGGUCAGUCCAGCACAGCCAGCGCUGGGCCCCCGUCCUGACCUGAGCGGUUACCACCAGCCCCAGGCCUGCGGAGGCGCUAGUCCACCAGAGCCCCUCCCCGCCCCUCUCCCCACUCCGCAUCCCUCGCCCCCCUCCCCACCUCCCACCCCCCACCCUGUAAACUAGGCGGCUGCAGCAAGCAGACCUUCGCAUCAACACAGCAGACACCAAAAACCAGUGAGAGCCCCGCUCUCUACCGCCCGGCCCCAGCACUCGCUAGCUUUCCUGACACCUGGAACUGUGCACCUGGCACCAAGCGGAAAAUAAACUCCAAGCAGCCAGUAGCCCCGAUGGUGUGUGCCUGAGCUGUGUGGCCCGAGGUUCCA(SEQIDNO:14)；TOP1基因转录本的序列如SEQIDNO：15所示，具体为：CAAAUGCGAACUUAGGCUGUUACACAACUGCUGGGGUCUGUUCUCGCCGCCCGCCCGGCAGUCAGGCAGCGUCGCCGCCGUGGUAGCAGCCUCAGCCGUUUCUGGAGUCUCGGGCCCACAGUCACCGCCGCUUACCUGCGCCUCCUCGAGCCUCCGGAGUCCCCGUCCGCCCGCACAGGCCGGUUCGCCGUCUGCGUCUCCCCCACGCCGCCUCGCCUGCCGCCGCGCUCGUCCCUCCGGGCCGACAUGAGUGGGGACCACCUCCACA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于结直肠腺瘤诊断、预后判断、疗效监测和/或复发监控的RNA分子标志物，其包括选自lnc-MKRN2-42:1、PPDPF基因转录本、TOP1基因转录本和C19ORF43基因转录本中的一种或更多种的RNA分子的组合。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于结直肠腺瘤诊断、预后判断、疗效监测和/或复发监控的RNA分子标志物，其包括选自lnc-MKRN2-42:1、PPDPF基因转录本、TOP1基因转录本和C19ORF43基因转录本中的一种或更多种的RNA分子的组合。


2.根据权利要求1所述的RNA分子标志物，所述lnc-MKRN2-42:1的序列如SEQIDNO：13所示、PPDPF基因转录本的序列如SEQIDNO：14所示、TOP1基因转录本的序列如SEQIDNO：15所示和/或C19ORF43mNRA的序列如SEQIDNO：16所示。


3.根据权利要求1或2所述的RNA分子标志物，其中所述RNA分子标志物存在于外泌体，所述外泌体来自体液。


4.根据权利要求3所述的RNA分子标志物，其中，所述体液为血液、尿液、唾液或痰液。


5.一种用于检测权利要求1至4中任一项所述RNA分子标志物的试剂，所述试剂包括引物和/或探针，其中
检测lnc-MKRN2-42:1的引物为：如SEQIDNO:1所示的上游引物序列，以及如SEQIDNO:2所示的下游引物序列；检测lnc-MKRN2-42:1的探针序列如SEQIDNO:3所示；
检测PPDPF基因转录本的引物为：如SEQIDNO:4所示的上游引物序列，以及如SEQIDNO:5所示的下游引物序列；检测PPDPF基因转录本的探针序列如SEQIDNO:6所示；
检测TOP1基因转录本的引物为：如SEQIDNO:7所示的上游引物序列，以及如SEQIDNO:8所示的下游引物序列；检测TOP1基因转录本的探针序列如SEQIDNO:9所示；和/或
检测C19ORF43基因转录本的引物为：如SEQIDNO:10所示的上游引物序列，以及如SEQIDNO:11所示的下游引物序列；检测C19ORF43基因转录本的探针序列如SEQIDNO:12所示。


6.根据权利要求1至4中任一项所述的RNA分子...

【专利技术属性】
技术研发人员：张澍田，朱圣韬，闵力，孔关义，赵立波，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京友谊医院，
类型：发明
国别省市：北京;11