一种脱毒马铃薯试管培育的方法技术

本发明专利技术公开一种脱毒马铃薯试管培育的方法，包括如下步骤：步骤S1、马铃薯试管苗的诱导；步骤S2、马铃薯试管苗的培育；步骤S3、马铃薯试管苗的病毒鉴定；步骤S4、脱毒马铃薯试管苗壮苗培育；步骤S5、试管薯的诱导；步骤S6、待60～70天后收获脱毒试管薯。本发明专利技术通过设置液体培养基促进马铃薯试管苗的生长，有效节约生产成本，再通过光照以诱导马铃薯试管苗形成马铃薯试管薯，一方面提高了马铃薯试管苗的成薯指数、薯块重量、大薯率、最大薯重和薯块直径，另一方面有效改善马铃薯产量品质低的问题，有利于实现马铃薯的自动化大规模生产。

【技术实现步骤摘要】
一种脱毒马铃薯试管培育的方法
本专利技术涉及马铃薯培育领域，特别地，涉及一种脱毒马铃薯试管培育的方法。
技术介绍
马铃薯是世界上仅次于水稻、玉米小麦的第四大粮食作物，广泛分布于世界各地。在生产过程中，由于病毒的侵染，马铃薯容易出现生长势衰退、薯块变小或畸形等一系列的退化现象，导致其产量及质量的下降，严重影响马铃薯的生产，可靠的繁种技术是确保马铃薯高产优质的基础，传统的繁种技术容易使病毒在种薯中世代积累和传递，导致马铃薯种性退化，造成马铃薯减产，减产幅度在20％～50％之间。脱毒试管薯技术能有效解除病毒侵染的制约，以该技术为核心构建种薯工厂化生产的现代繁种工业体系，能实现周年稳定的规模产出，为种植业提供优质脱毒种薯，通过采用马铃薯茎尖脱毒，脱毒苗快繁生产小种薯是解决马铃薯病毒侵染和品种退化以提高产量和品质的最好途径。试管薯是马铃薯试管苗在培养瓶内合适条件下从腋芽中诱导出产生的2-10mm小种薯，具有重量轻，体积小，易储存，繁殖速度高于常规田间生产，不受季节限制，栽培成活高突出优点，此外，试管薯也是研究马铃薯碳水化合物代谢的一个适宜模式，同时它还是进行遗传转化的良好受体。试管薯的诱导是受“基因型－环境－生物化学因子”相互作用、共同调节的复杂过程。基因型的差异是影响试管薯诱导的主要因素之一。在相同的诱导条件下，早熟品种的试管苗结薯能力强于晚熟品种。温度对试管薯的诱导有一定的影响，昼夜变温环境条件下，试管薯诱导率较高其中，光照也是影响马铃薯试管薯形成的主要原因，但是，目前相关文献中仅记载了试管薯的诱导及生长需要在黑暗条件下完成，如何通过光照和其他因素来提高脱毒马铃薯试管苗在瓶内诱导生长成试管薯的结薯率并未见相关文献研究。鉴于此，有必要提供一种改进的脱毒马铃薯试管培育的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种脱毒马铃薯试管培育的方法，以解决上述
技术介绍
中出提出的问题。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：一种脱毒马铃薯试管培育方法，包括如下步骤：步骤S1、马铃薯试管苗的诱导：对马铃薯进行催芽处理，当马铃薯苗芽生长到3-5cm时，对苗芽采用流水冲洗，然后再对苗芽用70～80％酒精消毒处理20S～40S以去除酯质，去除酯质后使用0.2％氯化汞处理6～8分钟并用无菌水冲洗冲洗4～5遍，将冲洗后的苗芽切取0.2～0.4mm的马铃薯茎尖，将其接种到MS培养基，并对其光照处理后诱导出马铃薯试管苗；步骤S2、马铃薯试管苗的培育：将诱导出的马铃薯试管苗在生长到5-6cm时移栽到添加了6-BA和IAA的MS培养基培育，其中6-BA的浓度为0.01～0.2mg/L，IAA的浓度为0.01～0.15mg/L；步骤S3、马铃薯试管苗的病毒鉴定：采用多重RT-PCR检测技术对诱导出的马铃薯试管苗进行检测，并筛选出脱毒马铃薯试管苗；步骤S4、脱毒马铃薯试管苗壮苗培育：将不含琼脂的MS无菌液体培养基加入到无菌培养瓶中，并在无菌培养瓶中接种3-5cm长的脱毒马铃薯试管苗茎段，得到脱毒马铃薯试管苗壮苗；步骤S5、试管薯的诱导：将脱毒马铃薯试管苗壮苗切成含有一芽一叶的茎段，然后将其接种到添加了蔗糖、活性炭和香豆素的MS培养基上并在适当光照下进行培育，其中蔗糖的浓度为70～90g/L，活性炭的浓度为0.8～1.2g/L，香豆素的浓度为10～30mg/L，光照时间4～12h/d，光照强度2000～2500Lx；步骤S6、待60～70天后收获脱毒试管薯。优选的，在步骤S1中，光照处理的光照强度为2000lx，光照时间12h/d。优选的，在步骤S1中，MS培养基的PH值设置为5.5～6.0，其所处环境温度为25±1℃。优选的，在步骤S1中，在超静工作台上对苗芽去除酯质。优选的，在步骤S1中，采用解剖刀切取马铃薯茎尖。优选的，在步骤S3中，进行病毒测试的马铃薯试管苗为5-6cm。优选的，在步骤S5中，MS培养基的PH值设置为5.5～6.0，其所处环境温度为25±3℃。相较于现有技术，本专利技术提供的一种脱毒马铃薯试管培育的方法，通过设置液体培养基促进马铃薯试管苗的生长，有效节约生产成本，再通过光照以诱导马铃薯试管苗形成马铃薯试管薯，一方面提高了马铃薯试管苗的成薯指数、薯块重量、大薯率、最大薯重和薯块直径，另一方面有效改善马铃薯产量品质低的问题，有利于实现马铃薯的自动化大规模生产。【附图说明】图1为本专利技术提供的脱毒马铃薯试管培育的方法的流程图；图2为实施例1中的马铃薯试管苗的病毒检测结果图；图3为实施例1和对比例1培育得到的脱毒马铃薯试管苗在培育70天后进行的对比图。【具体实施方式】下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。请参阅图1，图1为本专利技术提供的脱毒马铃薯试管培育的方法的流程图。本专利技术提供一种脱毒马铃薯试管培育的方法，包括如下步骤：步骤S1、马铃薯试管苗的诱导：提供马铃薯以及对该马铃薯进行催芽处理，当马铃薯苗芽生长到3-5cm时，对苗芽采用流水冲洗，然后在超静工作台用70～80％酒精消毒处理20～40S以去除酯质，去除酯质后使用0.2％氯化汞处理6～8分钟并用无菌水冲洗4～5遍，将苗芽消毒处理后采用解剖刀切取0.2～0.4mm的马铃薯茎尖，将其接种到MS培养基，MS培养基的PH值设置为5.5～6.0，培养基所处环境温度为25±1℃，然后对马铃薯茎尖光照处理后诱导出马铃薯试管苗，光照处理的光照强度为2000lx，光照时间12h/d；在该步骤中，对苗芽采用流水冲洗，其目的是清除苗芽表面的杂物，避免对马铃薯的培育产生影响，再在超静工作台用酒精和氯化汞处理苗芽，可以防止操作过程中环境的杂质污染以及去除苗芽所携带的病菌和病毒，其中，酒精的浓度优选为70％，消毒处理时间为30S，很大程度的去除马铃薯试管苗的毒性，解剖刀可以更加精准切取，由于植物中的干物质有90～95％是来自于光合作用，在光饱和点以下，干物质的合成速度随光照强度的增加而增加，光照处理的光照强度优选为2000lx，光照时间优选为12h/d，有效提高了试管苗培育的速度。步骤S2、马铃薯试管苗的培育：将诱导出的马铃薯试管苗在生长到5-6cm时移栽到添加了6-BA和IAA的MS培养基培育，其中6-BA的浓度为0.01～0.2mg/L，IAA的浓度梯度设置为0.01～0.15mg/L之间；在该步骤中，通过添加6-BA细胞分裂素和IAA生长素，有效促进了马铃薯试管苗的生长，提高效率，降低生产成本，但是6-BA和IAA对不同植物的生长具有两面性，需要选择适合的浓度才对马铃薯试管苗的的促进作用最大，6-BA的浓度优选为0.01mg/L，IAA的浓度优选为0.1mg/L本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脱毒马铃薯试管培育的方法，其特征在于，包括如下步骤：/n步骤S1、马铃薯试管苗的诱导：对马铃薯进行催芽处理，当马铃薯苗芽生长到3-5cm时，对苗芽采用流水冲洗，然后再对苗芽用70～80％酒精消毒处理20S～40S以去除酯质，去除酯质后使用0.2％氯化汞处理6～8分钟并用无菌水冲洗冲洗4～5遍，将冲洗后的苗芽切取0.2～0.4mm的马铃薯茎尖，将其接种到MS培养基，并对其光照处理后诱导出马铃薯试管苗；/n步骤S2、马铃薯试管苗的培育：将诱导出的马铃薯试管苗在生长到5-6cm时移栽到添加了6-BA和IAA的MS培养基培育，其中6-BA的浓度为0.01～0.2mg/L，IAA的浓度为0.01～0.15mg/L；/n步骤S3、马铃薯试管苗的病毒鉴定：采用多重RT-PCR检测技术对诱导出的马铃薯试管苗进行检测，并筛选出脱毒马铃薯试管苗；/n步骤S4、脱毒马铃薯试管苗壮苗培育：将不含琼脂的MS无菌液体培养基加入到无菌培养瓶中，并在无菌培养瓶中接种3-5cm长的脱毒马铃薯试管苗茎段，得到脱毒马铃薯试管苗壮苗；/n步骤S5、试管薯的诱导：将脱毒马铃薯试管苗壮苗切成含有一芽一叶的茎段，然后将其接种到添加了蔗糖、活性炭和香豆素的MS培养基上并在适当光照下进行培育，其中蔗糖的浓度为70～90g/L，活性炭的浓度为0.8～1.2g/L，香豆素的浓度为10～30mg/L，光照时间4～12h/d，光照强度2000～2500Lx；/n步骤S6、待60～70天后收获脱毒试管薯。/n...

【技术特征摘要】
1.一种脱毒马铃薯试管培育的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤S1、马铃薯试管苗的诱导：对马铃薯进行催芽处理，当马铃薯苗芽生长到3-5cm时，对苗芽采用流水冲洗，然后再对苗芽用70～80％酒精消毒处理20S～40S以去除酯质，去除酯质后使用0.2％氯化汞处理6～8分钟并用无菌水冲洗冲洗4～5遍，将冲洗后的苗芽切取0.2～0.4mm的马铃薯茎尖，将其接种到MS培养基，并对其光照处理后诱导出马铃薯试管苗；
步骤S2、马铃薯试管苗的培育：将诱导出的马铃薯试管苗在生长到5-6cm时移栽到添加了6-BA和IAA的MS培养基培育，其中6-BA的浓度为0.01～0.2mg/L，IAA的浓度为0.01～0.15mg/L；
步骤S3、马铃薯试管苗的病毒鉴定：采用多重RT-PCR检测技术对诱导出的马铃薯试管苗进行检测，并筛选出脱毒马铃薯试管苗；
步骤S4、脱毒马铃薯试管苗壮苗培育：将不含琼脂的MS无菌液体培养基加入到无菌培养瓶中，并在无菌培养瓶中接种3-5cm长的脱毒马铃薯试管苗茎段，得到脱毒马铃薯试管苗壮苗；
步骤S5、试管薯的诱导：将脱毒马铃薯试管苗壮苗切成含有一芽一叶的茎段，然后将其接种到添加了蔗糖、活性炭和香豆素的MS培养基上并在适当光照下进行培育，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：严柯雯，顾碧婷，张志样，杨国荣，刘宏中，林佳，谢玲，徐静霞，谭晓菁，王芳，鲁宇文，葛体达，严成其，
申请(专利权)人：严柯雯，
类型：发明
国别省市：浙江;33