用于肺癌诊断的液相芯片及其使用方法技术

本发明专利技术提供一种能同时检测多种肺癌标志物以用于肺癌诊断的液相芯片及其使用方法。本发明专利技术提供的用于肺癌诊断的液相芯片包括包被有捕获抗体的微球、检测抗体和报告分子，捕获抗体为CEA捕获抗体、CYFRA21‑1捕获抗体、SCC捕获抗体、NSE捕获抗体、proGRP捕获抗体中的至少两种。本发明专利技术实施例的产品利用液相芯片技术，在待反应体系中加入两种或两种以上不同物理性质的微球，通过流式细胞仪将这些不同的物理性质检测出来，并进行分析，从而实现同时对多种肺癌标志物的检测。

【技术实现步骤摘要】
用于肺癌诊断的液相芯片及其使用方法
本专利技术涉及癌症检测
，尤其是涉及一种用于肺癌诊断的液相芯片及其使用方法。
技术介绍
肺癌是全球范围内发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一。根据全国肿瘤登记中心2016年发布的数据，2015年我国新发肺癌病例73.33万，居恶性肿瘤首位，占恶性肿瘤新发病例的17.09％。同期，我国肺癌死亡人数为61.02万，占恶性肿瘤死因的21.68％。从病理和治疗角度，肺癌大致可以分为非小细胞肺癌(nonsmallcelllungcancer，NSCLC)和小细胞肺癌(smallcelllungcancer，SCLC)两大类，其中非小细胞肺癌约占80％～85％，其余为小细胞肺癌。尽管肺癌的诊断方法逐渐丰富，但肺癌的早期诊断率还有待提高。其中的原因主要是肺癌早期大多没有特异性症状，当出现明显的临床症状时多为中晚期，丧失了相应的手术机会。因此，肺癌的早期鉴别诊断有非常重要的意义。目前在肺癌的临床诊断实践中通常采用双抗体夹心法进行检测。其原理是：将捕获抗体(Captureantibody)固定于固相载体上，将检测抗体(Detectionantibody)与报告分子偶联，在检测反应中，形成捕获抗体-待测分子-检测抗体三者结合的夹心三明治结构，反应完成后洗去未结合的捕获抗体与报告分子偶联物，通过检测固相载体上报告分子发出的信号(如发光、光吸收)等，与确定的标准曲线比较，可获得待测分子浓度。根据报告信号的不同，检测方法还可分为酶联免疫检测(ELISA)、放射性免疫检测(RIA)、化学发光免疫检测(CLIA)等方法。然而，这些检测方法无法在同一检测反应体系中区分来自不同待测分子的信号。当有检测多种肺癌标志物浓度的需求时，要进行多个反应，检测工作量和时间成倍增加。因此，有必要提供一种能够同时检测多种肺癌标志物的检测产品。
技术实现思路
本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种能同时检测多种肺癌标志物的用于肺癌诊断的液相芯片及其使用方法。第一方面，本专利技术的一个实施例提供了一种用于肺癌诊断的液相芯片，该液相芯片包括包被有捕获抗体的微球、检测抗体和报告分子，捕获抗体为CEA捕获抗体、CYFRA21-1捕获抗体、SCC捕获抗体、NSE捕获抗体、proGRP捕获抗体中的至少两种。本专利技术实施例的液相芯片至少具有如下有益效果：本专利技术实施例的产品利用液相芯片技术，在待反应体系中加入两种或两种以上不同物理性质的微球，通过流式细胞仪将这些不同的物理性质检测出来，并进行分析，从而实现同时对多种肺癌标志物的检测。进一步地，本专利技术实施例所采用的五个肺癌标志物中：癌胚抗原(CEA)是一种存在于多种肿瘤细胞中的肿瘤抗原，肺癌细胞能直接产生CEA。CEA是目前肺癌诊断中最具代表性的肿瘤标志物，在腺癌与鳞癌中升高较明显。CEA水平的动态变化能较好的反映患者对治疗的反应和预后。细胞角蛋白19片段(CK19，CYFRA21-1)是分子量约30kDa的上皮细胞角蛋白的可溶性成分之一，是一种非常好的鉴别肺良恶性疾病的标志物，尤其对肺鳞癌的检测效果更好。CYFRA21-1是NSCLC最灵敏的肿瘤标志物。因为Cyfra21-1只代表细胞角蛋白19的一个片段，因此CYFRA21-1比组织多肽抗原(TPA)具有更高的特异性。研究表明，CYFRA21-1在肺鳞癌中的阳性率可高达80％，而且对肺癌的诊断有较高的特异性，而且其敏感性与肿瘤的组织学类型存在着一定的相关性。鳞状上皮细胞癌抗原(SCC)在体内分布广泛，可见于咽喉、食管、肺、宫颈等各部位，作为诊断和监测鳞癌进展和转归的重要肿瘤标志物。SCC对早期肺鳞癌诊断意义不大，但随着肿瘤生长及病情发展，Ⅲ、Ⅳ期血清SCC水平明显增高，因此可作为判断肺鳞癌预后和监测疾病进展重要指标。烯醇化酶是一种糖酵解酶，普遍存在于哺乳动物的组织中，以系列同工酶二聚体的形式存在(αα、αβ、ββ和γγ)。而神经特异性烯醇化酶(NSE)为含γ亚基的同工酶，存在于神经内分泌细胞和神经源性肿瘤中(如小细胞肺癌、神经母细胞瘤、肠癌等)。SCLC是一种起源于神经内分泌细胞的肿瘤，因此NSE与SCLC关系密切，是小细胞肺癌的标记物。NSE有助于SCLC的诊断及其与NSCLC的鉴别诊断。NSE还是肺癌化疗效果观察和随访的有效指标，对化疗产生反应后此酶水平会下降，病情完全缓解后其可达正常水平。前胃泌素释放肽(ProGRP)是一个相对稳定的激素胃泌素释放肽的前体。人类的GRP主要存在于胃肠道、呼吸道以中枢神经系统中。一些研究认为，小细胞肺癌的肿瘤细胞释放GRP，并且GRP可能会刺激SCLC细胞生长。ProGRP作为SCLC的标志物，具有敏感性高、特异性强的特点。ProGRP水平和治疗反应也有较好的相关性，利用ProGRP进行检测可以在一定程度上提高早期诊断可能性，而且对化疗后反应、疗效的评价、病程中病情监测和预后判定都提供了有价值的信息。单项肿瘤标志物对肺癌诊断的阳性率和特异度有一定的局限性，因此，本专利技术实施例中的液相芯片采用多项肺癌标志物的联合诊断，相比于单一标志物的检测，检测结果的准确性和特异性也都会更高。根据本专利技术的一些实施例的液相芯片，检测抗体为CEA检测抗体、CYFRA21-1检测抗体、SCC检测抗体、NSE检测抗体、proGRP检测抗体中的至少两种，同一抗原的所述检测抗体和所述捕获抗体对应于不同的抗原表位。检测抗体选择与捕获抗体相对应的不同抗原表位的抗体，可以形成微球-捕获抗体-抗原-检测抗体的夹心复合结构，通过对微球的检测区分抗原的种类，通过对检测抗体的标记分子的检测实现对抗原的定量检测。根据本专利技术的一些实施例的液相芯片，捕获抗体为以下组合的任一种：CEA捕获抗体、CYFRA21-1捕获抗体、SCC捕获抗体；或NSE捕获抗体、proGRP捕获抗体；或CEA捕获抗体、CYFRA21-1捕获抗体；或CEA捕获抗体、CYFRA21-1捕获抗体、SCC捕获抗体、NSE捕获抗体、proGRP捕获抗体。捕获抗体采用上述任选的一种组合方式，可以较大程度地提高检测的准确性。根据本专利技术的一些实施例的液相芯片，捕获抗体能够与微球发生共价偶联、检测抗体能够与报告分子发生共价或非共价偶联；微球与捕获抗体的偶联方式、报告分子与检测抗体的偶联方式分别独立选自以下任一种：链霉亲和素和生物素反应；或-NH2和-NHS反应；或-NH2和-NCS反应；或-SH2和马来酰亚胺基团反应；或-NH2与环氧基反应；或-NH2与甲苯磺酰基反应。检测抗体与报告分子、微球与捕获抗体通过上述的任一种或两种方式实现共价偶联，从而使得体系中的夹心复合结构能够更稳定地结合在一起，从而保证检测结果地准确性。根据本专利技术的一些实施例的液相芯片，报告分子标记有链霉亲和素，检测抗体标记有生物素。生物素与链霉亲和素的结合方式相对于其它种类的共价偶联方式具有更高的特异性和稳定性，使得本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于肺癌诊断的液相芯片，其特征在于，包括包被有捕获抗体的微球、检测抗体和报告分子，所述捕获抗体为CEA捕获抗体、CYFRA21-1捕获抗体、SCC捕获抗体、NSE捕获抗体、proGRP捕获抗体中的至少两种。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于肺癌诊断的液相芯片，其特征在于，包括包被有捕获抗体的微球、检测抗体和报告分子，所述捕获抗体为CEA捕获抗体、CYFRA21-1捕获抗体、SCC捕获抗体、NSE捕获抗体、proGRP捕获抗体中的至少两种。


2.根据权利要求1所述的液相芯片，其特征在于，所述检测抗体为CEA检测抗体、CYFRA21-1检测抗体、SCC检测抗体、NSE检测抗体、proGRP检测抗体中的至少两种，同一抗原的所述检测抗体和所述捕获抗体对应于不同的抗原表位。


3.根据权利要求1所述的液相芯片，其特征在于，所述捕获抗体为以下组合的任一种：
CEA捕获抗体、CYFRA21-1捕获抗体、SCC捕获抗体；
或NSE捕获抗体、proGRP捕获抗体；
或CEA捕获抗体、CYFRA21-1捕获抗体；
或CEA捕获抗体、CYFRA21-1捕获抗体、SCC捕获抗体、NSE捕获抗体、proGRP捕获抗体。


4.根据权利要求1所述的液相芯片，其特征在于，所述捕获抗体能够与所述微球发生共价偶联、所述检测抗体能够与所述报告分子发生共价偶联或非共价偶联，所述微球与所述捕获抗体的偶联方式、所述报告分子与所述检...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓橙，
申请(专利权)人：北京唯公医疗技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11