一种去除人免疫球蛋白类制品中残留的IgA的方法技术

本发明专利技术涉及一种去除人免疫球蛋白类制品中残留的IgA的方法，所述的方法包括如下步骤：(1)以人血浆分离组分Ⅱ沉淀(FⅡ沉淀)为原料，以注射用水充分溶解FⅡ沉淀制得FⅡ悬液；(2)调节溶液电导率至1.0～3.0ms/cm，pH至6.00～7.50；(3)使用亲脂性过滤器(一次过滤)过滤杂质，收集一次滤清液；(4)调节一次滤清液电导至1.0～3.0ms/cm，pH至6.50～8.00；(5)使用阴离子交换层析吸附IgA(二次过滤)，收集二次滤清液；(6)调整二次滤清液的pH至4.1±0.3；(7)超滤调整后的二次滤清液，即得所述的低IgA残留的人免疫球蛋白G制品。

【技术实现步骤摘要】
一种去除人免疫球蛋白类制品中残留的IgA的方法
本专利技术属于医药生物
，具体的，涉及一种去除人免疫球蛋白类制品中残留的IgA的方法。
技术介绍
人免疫球蛋白是一种有免疫活性的动物蛋白，是由淋巴细胞(B细胞)产生的一种糖蛋白，主要存在于血浆中，也见于其他体液、组织和一些分泌液中。人血浆内的免疫球蛋白主要分为五类，即免疫球蛋白G(IgG)，免疫球蛋白A(IgA)，免疫球蛋白M(IgM)，免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E(IgE)。IgG，IgA，IgM还有亚类，IgG，IgD，IgE均为单体。其中IgG是最主要的免疫球蛋白，占人血浆免疫球蛋白的75％左右；IgA在人血清中含量仅次于IgG，占人血浆免疫球蛋白的15％左右。人免疫球蛋白G(IgG)有4个亚类：免疫球蛋白G1、免疫球蛋白G2、免疫球蛋白G3和免疫球蛋白G4。人免疫球蛋白是治疗原发性免疫缺乏症，继发性免疫缺乏症，自身免疫性疾病(川崎病，特发性血小板减少性紫癜)的有效药物。从1999年至今，人免疫球蛋白治疗范围在不断增加，如皮肤病，神经系统疾病，器官移植等，所以越来越广泛的应用。目前国内外主要采用低温乙醇法由健康人血浆分离组分Ⅱ，进而以组分Ⅱ制备人免疫球蛋白。制备的人免疫球蛋白IgG亚类齐全，其值与正常人血浆IgG亚类分布相近，并保留IgG的Fc段生物学活性。前面介绍了，人血浆中IgA含量仅次于IgG，而且血浆中IgA的性质与IgG相似，因此，去除IgA是提高人免疫球蛋白制品纯度的关键。尽管制备工艺的不同，所有人免疫球蛋白类制品均含有一定量的IgA。如果患者存在选择性IgA缺乏，在使用免疫球蛋白类制品时，即使有少量的IgA可能会触发过敏反应，因此患者缺乏IgA是静丙制品禁止的指征。国内虽鲜有IgA过敏反应的报到，但IgA残留量控制不可不重视。2018年12月经第十一届药典委员会血液制品专业委员会审议，国家药典委员会发布了《中国药典》2020年版(三部)血液制品拟增修订内容，拟在静注球蛋白类血液制品药典标准中新增IgA残留量标准。综上所述，人免疫球蛋白制品适应症不断增加，在临床上越来越广的应用，其需求量越来越大。随着人免疫球蛋白的用量增加，其安全性引起高度重视，提高人免疫球蛋白质量指标，探讨一种去除人免疫球蛋白类制品IgA残留量的方法是必不可少的。
技术实现思路
本专利技术首先涉及一种制备低IgA残留的人免疫球蛋白G制品的方法，所述方法包括如下步骤：(1)以人血浆分离组分Ⅱ沉淀(FⅡ沉淀)为原料，以注射用水充分溶解FⅡ沉淀制得FⅡ悬液；(2)调节溶液电导率至1.0～3.0ms/cm，pH至6.00～7.50；(3)使用亲脂性过滤器(一次过滤)过滤杂质，收集一次滤清液；(4)调节一次滤清液电导至1.0～3.0ms/cm，pH至6.50～8.00；(5)使用阴离子交换层析吸附IgA(二次过滤)，收集二次滤清液；(6)调整二次滤清液的pH至4.1±0.3；(7)调整后的二次滤清液进行超滤和过滤除菌，即得所述的低IgA残留的人免疫球蛋白G制品。步骤(1)所述的溶解FⅡ沉淀制得FⅡ悬液为：用0～4℃注射用水溶解组分Ⅱ沉淀，注射用水用量为组分Ⅱ沉淀重量的3-10倍，搅拌2～4小时，使沉淀充分溶解。步骤(3)所述的使用亲脂性过滤器过滤杂质的步骤为：使用ZetaPlusDELP滤器，用注射用水及平衡缓冲液平衡ZetaPlusDELP过滤器；将调节好电导及pH的FⅡ沉淀溶解上样，过滤过程压力小于2.4bar；所述的平衡缓冲液为：用低温注射水及0.5mol/LNaOH调节醋酸缓冲液pH至6.00～7.50，电导率调节至1.0～3.0ms/cm。步骤(5)所述使用阴离子交换层析吸附IgA(二次过滤)的步骤为：使用EmphazeTMAEX滤器，用注射用水及平衡缓冲液冲洗EmphazeTMAEX过滤器；将调节好电导及pH的一次过滤液上样，过滤过程压力小于2.4bar；所述的平衡缓冲液为：用低温注射水及0.5mol/LNaOH调节醋酸缓冲液pH至6.00～8.00，电导率调节至1.0～3.0ms/cm。步骤(7)所述的超滤为：使用孔径30kD或50kD的超滤膜，用5～10个制品体积的注射用水进行超滤透析，超滤温度为控制在0～15℃，超滤后用注射用水调节蛋白浓度至50～60g/L，同时调节pH至4.1±0.3。本专利技术还涉及由所述方法制备获得的低IgA残留的IgG制品，其特征在于，所述的IgG制品中的IgA残留量小于或等于20μg/ml。包含所述的低IgA残留的IgG制品的药物。本专利技术还涉及所述的方法在制备IgG药物中的应用。本专利技术还涉及所述的低IgA残留的IgG制品在制备药物中的应用，所述的药物为：以IgG为有效活性成分的药物。本专利技术的有益效果在于，公开一种去除人免疫球蛋白类制品中残留的IgA的方法。本专利技术根据人免疫球蛋白类制品低温乙醇法制作工艺特点，组分Ⅱ(FⅡ)的深加工步骤采用过滤吸附方式降低制品IgA残留量。本方法以FⅡ溶解悬液为原料，优化选择适当的pH、电导等关键条件，使用EmphazeTMAEX过滤器过滤吸附IgA，以达到降低人免疫球蛋白类制品IgA残留量的目的。附图说明图1、本专利技术方法制备的IgG原液的纯度检测图谱图2、本专利技术方法制备的IgG原液中不同状态的IgG含量分析图图3、本专利技术所述的方法的工艺流程图具体实施方式主要缓冲液配置：醋酸缓冲液：配制10kgpH4.0的醋酸-醋酸钠溶液，所需醋酸钠量1.089kg；0.5mol/LNaOH：配制1.0L0.5mol/LNaOH溶液，所需NaOH20g；1.0mol/LHCL：配制10.0L1.0mol/LHCL，所需HCL量为834ml；平衡缓冲液A：用低温注射水及0.5mol/LNaOH调节醋酸缓冲液pH至6.00～8.00，电导率调节至1.0～3.0ms/cm；实施例1、去除IgG成分中的IgA工艺分解流程采用低温乙醇法由健康人血浆分离组分Ⅱ(FⅡ)得到FⅡ沉淀，随后进行如下处理(工艺流程参见图3)：1、FⅡ沉淀溶解：(1)FⅡ沉淀溶解：用0～4℃注射用水溶解组分Ⅱ沉淀，注射用水用量为组分Ⅱ沉淀重量的3-10倍，搅拌2～4小时，使沉淀充分溶解，观察沉淀完全溶解呈悬液状态；(2)调节pH及电导：用注射用水和醋酸缓冲液调节电导至1.0～3.0ms/cm，pH至6.00～7.50，优选为pH6.00或7.50；2、ZetaPlusDELP滤器过滤(一次过滤)：(1)ZetaPlusDELP滤器(3M公司)的平衡：用注射用水及平衡缓冲液A冲洗ZetaPlusDELP过滤器；(2)上样：将调节好电导及pH的FⅡ沉淀溶解上样，过滤过程压力(小于2.4bar)低于过滤系统最大耐受压力本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种制备低IgA残留的人免疫球蛋白G制品的方法，所述方法包括如下步骤：/n(1)以人血浆分离组分Ⅱ沉淀(FⅡ沉淀)为原料，以注射用水充分溶解FⅡ沉淀制得FⅡ悬液；/n(2)调节溶液电导率至1.0～3.0ms/cm，pH至6.00～7.50；/n(3)使用亲脂性过滤器(一次过滤)过滤杂质，收集一次滤清液；/n(4)调节一次滤清液电导至1.0～3.0ms/cm，pH至6.50～8.00；/n(5)使用阴离子交换层析吸附IgA(二次过滤)，收集二次滤清液；/n(6)调整二次滤清液的pH至4.1±0.3；/n(7)对调整后的二次滤清液进行超滤并过滤除菌，即得所述的低IgA残留的人免疫球蛋白G制品。/n

【技术特征摘要】
1.一种制备低IgA残留的人免疫球蛋白G制品的方法，所述方法包括如下步骤：
(1)以人血浆分离组分Ⅱ沉淀(FⅡ沉淀)为原料，以注射用水充分溶解FⅡ沉淀制得FⅡ悬液；
(2)调节溶液电导率至1.0～3.0ms/cm，pH至6.00～7.50；
(3)使用亲脂性过滤器(一次过滤)过滤杂质，收集一次滤清液；
(4)调节一次滤清液电导至1.0～3.0ms/cm，pH至6.50～8.00；
(5)使用阴离子交换层析吸附IgA(二次过滤)，收集二次滤清液；
(6)调整二次滤清液的pH至4.1±0.3；
(7)对调整后的二次滤清液进行超滤并过滤除菌，即得所述的低IgA残留的人免疫球蛋白G制品。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的溶解FⅡ沉淀制得FⅡ悬液为：
用0～4℃注射用水溶解组分Ⅱ沉淀，注射用水用量为组分Ⅱ沉淀重量的3-10倍，搅拌2～4小时，使沉淀充分溶解。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(3)所述的使用亲脂性过滤器(一次过滤)过滤杂质的步骤为：
使用ZetaPlusDELP滤器，用注射用水及平衡缓冲液平衡ZetaPlusDELP过滤器；
将调节好电导及pH的FⅡ沉淀溶解上样，过滤过程压力小于2.4bar；
所述的平衡缓冲液为：用低温注射水及0.5mol/LNaOH调节醋酸缓冲液pH至6...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩韧，邢延涛，高斌，曾双迎，李星，张云骁，陈曦，杨鑫，王敏，刘春杰，梅峰，彭焱，刘娜，黄锡安，吴强，张云，刘智鹏，李策生，
申请(专利权)人：国药集团武汉血液制品有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42