评估肝内胆管癌吉西他滨化疗敏感性的标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种评估肝内胆管癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的标志物及其应用。评估肝内胆管细胞癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的标志物为肝内胆管癌患者外周血白细胞或胆管癌组织中免疫细胞表面所表达的CXCR3。评估肝内胆管细胞癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的试剂盒包括CXCR3蛋白表达量的检测相关试剂。评估肝内胆管癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的方法包括以下步骤：1)检测肝内胆管癌患者外周血白细胞或胆管癌组织中免疫细胞表面CXCR3的表达量；2)与预先设定的CXCR3蛋白表达量阈值做比较，高于阈值评定为患者对吉西他滨化疗敏感和/或吉西他滨化疗治疗预后良好，否则评定为对吉西他滨化疗不敏感和/或吉西他滨化疗治疗预后不佳。

【技术实现步骤摘要】
评估肝内胆管癌吉西他滨化疗敏感性的标志物及其应用
本专利技术属于医学生物检测
，涉及一种评估肝内胆管癌吉西他滨化疗敏感性及预后的标志物、试剂盒以及方法。
技术介绍
肝内胆管癌(ICC)发生于二级胆管近端，是第二常见的原发性肝癌，其发病率呈稳步上升趋势。ICC来源于肝内胆管上皮细胞，手术切除是唯一有效的治疗方法，作为一种高度恶性的疾病，只有接受完全R0手术切除的病人才能有更好的生存率。有研究证实放疗和辅助化疗对晚期或侵袭性胆管肿瘤的生存有好处，对于不能切除和转移性ICC的首选治疗方式是吉西他滨和顺铂联合治疗。然而由于复杂的肿瘤异质性，ICC患者对化疗的反应不同。研究表明患者的免疫状态会影响他们的化疗敏感性。因此，通过检测ICC患者免疫功能状态来预测化疗的反应性从而指导临床治疗方案，对于提高患者治疗效果改善生存质量意义重大。CXC亚族趋化因子受体3(CXCR3)高度表达于活化的T淋巴细胞上，属于Thl细胞趋化因子受体，最初被认为是专门协调白细胞转运的趋化因子，现在因其在调节细胞增殖、分化和存活中的多种作用而被公认。它们的正常功能失调会导致各种病理，包括炎症疾病和癌症。CXCR3及其同源的趋化因子(CXCL11、CXCL10、CXCL9、CXCL4和CXCL4L1)参与了许多肿瘤的控制和发展[8]，并被认为是提示患者预后的潜在指示分子。关于吉西他滨化疗方案与CXCR3功能水平之间相互关联的研究尚且十分有限，目前尚未有关于通过CXCR3表达量评估吉西他滨对肝内胆管癌治疗效果的研究。
技术实现思路
<br>本专利技术旨在提供一种CXCR3的新应用，特别是在评估肝内胆管癌吉西他滨化疗敏感性和预后中的应用。本专利技术人经过广泛而深入的研究，首次发现ICC患者肿瘤组织CXCR3的表达与对吉西他滨化疗的敏感性相关，进一步发现患者外周血白细胞中CXCR3表达水平与肿瘤组织内CXCR3表达水平有良好的一致性，能够用于判断肝内胆管癌患者对吉西他滨化疗的敏感性。本专利技术的第一方面，提供了一种评估肝内胆管细胞癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的标志物，所述标志物为肝内胆管癌患者外周血白细胞或胆管癌组织中免疫细胞表面所表达的CXCR3。优选地，所述CXCR3表达于T细胞表面。进一步优选地，所述CXCR3表达于CD4+T细胞表面。本专利技术第二个方面，提供了所述评估ICC吉西他滨化疗敏感性和/或预后标志物在制备评估ICC对吉西他滨化疗敏感性及预后的试剂或试剂盒中的应用。进一步，本专利技术提供了一种评估肝内胆管细胞癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的试剂盒，所述试剂盒包括CXCR3蛋白表达量的检测相关试剂。优选地，所述评估肝内胆管细胞癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的试剂盒检测肝内胆管癌患者外周血白细胞或胆管癌组织中免疫细胞表面所表达的CXCR3。优选地，所述试剂盒检测T细胞表面的CXCR3。进一步优选地，所述试剂或试剂盒检测CD4+T细胞表面的CXCR3。优选地，所述评估肝内胆管细胞癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的试剂盒包括CXCR3的单克隆抗体或多克隆抗体。可选地，所述CXCR3多克隆抗体为Proteintech公司的产品。优选地，所述评估肝内胆管癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的试剂盒包括免疫组化试剂；所述免疫组化试剂包括二甲苯、乙醇、3％H2O2溶液、1％BSA封闭液、DAB显色剂、苏木素和辣根过氧化物酶标记的抗兔IgG。优选地，所述评估肝内胆管癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的试剂盒包括外周血白细胞提取试剂。优选地，所述评估肝内胆管癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的试剂盒还包括与CXCR3蛋白表达量相关的阈值；进一步优选地，CXCR3蛋白表达量高于阈值则评定为对吉西他滨化疗敏感和/或吉西他滨化疗治疗预后良好，否则评定为对吉西他滨化疗不敏感和/或吉西他滨化疗治疗预后不佳。本专利技术第三个方面，提供了一种评估肝内胆管癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的方法，该方法包括以下步骤：1)检测肝内胆管癌患者外周血白细胞或胆管癌组织中免疫细胞表面CXCR3的表达量；2)与预先设定的CXCR3蛋白表达量阈值做比较，高于阈值评定为患者对吉西他滨化疗敏感和/或吉西他滨化疗治疗预后良好，否则评定为对吉西他滨化疗不敏感和/或吉西他滨化疗治疗预后不佳。优选地，当检测的是外周血白细胞中免疫细胞时，步骤1)包括以下具体操作流程：A)从新鲜的外周血中分离出白细胞，优选为单个核细胞；B)对白细胞进行CyTOF分析。优选地，当检测的是胆管癌组织中免疫细胞时，步骤1)包括以下具体操作流程：a)利用免疫组化试剂对胆管癌组织切片进行免疫组化染色；b)利用显微镜和成像装置拍摄为数码照片；c)利用生物图像处理软件分析染色阳性信号强度，给出评分。在本专利技术的一个优选实施例中，采用ImageScope(Aperio公司)软件对整张组织芯片进行扫描，扫描后采用该软件的Algorithms(PositivePixelCount)程序对每个芯片点进行“阳性Pixel”计算，每个组织芯片点的组化评分计算方法为Log10[255/Iavg]，其中Iavg为平均强度，计算方法：平均强度＝(弱阳性象素总强度+阳性象素总强度+强阳性象素总强度)/(弱阳性象素数量+阳性象素数量+强阳性象素数量)；所述CXCR3蛋白表达量阈值为0.25，高于0.25为高表达，等于或低于0.25为低表达。本专利技术首次提出CXCR3的表达水平与吉西他滨疗效具有相关性，并同时提出了外周血白细胞中CXCR3表达水平与肿瘤组织内CXCR3表达水平的一致性，且有良好吉西他滨化疗反应性的患者外周血所高表达的CXCR3主要表达于CD4+T细胞，从而提供了一种通过检测CXCR3的表达水平来判断肝内胆管癌患者吉西他滨疗效和预后的方法和试剂盒，对于肝内胆管癌病人术后监控和序贯治疗具有重要的指导意义。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1是从样本中分离白细胞进行CyTOF分析的工作流程图：提取ICC患者外周血中的免疫细胞，用金属标记的抗体处理，然后用飞行时间质谱细胞仪检测；降维后获得的数据可视化，通过手动门控策略和聚类算法识别细胞簇；图2是来自化疗敏感患者(R)和化疗不敏感者(NR)外周血白细胞(PBMC)的CyTOF数据的tSNE图，确定了免疫谱系；图3是利用FlowSOM聚类方法描绘R和NR外周血T细胞免疫亚群情况，亚群1、16、22(CXCR3+T)在R和NR患者之间表达差异较为明显；图4是29个T细胞簇在总T细胞中占比的柱状图，其中簇1、16、22的差异具有显著性，R与NR两组患者中占比差异明本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种评估肝内胆管细胞癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的标志物，其特征在于，所述标志物为肝内胆管癌患者外周血白细胞或胆管癌组织中免疫细胞表面所表达的CXCR3。/n

【技术特征摘要】
1.一种评估肝内胆管细胞癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的标志物，其特征在于，所述标志物为肝内胆管癌患者外周血白细胞或胆管癌组织中免疫细胞表面所表达的CXCR3。


2.如权利要求1所述的评估肝内胆管细胞癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的标志物在制备评估肝内胆管癌对吉西他滨化疗敏感性及预后的试剂或试剂盒中的应用。


3.一种评估肝内胆管细胞癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括CXCR3蛋白表达量的检测相关试剂。


4.如权利要求3所述的评估肝内胆管细胞癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后的试剂盒，其特征在于，检测肝内胆管癌患者外周血白细胞或胆管癌组织中免疫细胞表面所表达的CXCR3。


5.如权利要求3所述的评估肝内胆管细胞癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后试剂盒，其特征在于，包括免疫组化试剂。


6.如权利要求3所述的评估肝内胆管细胞癌吉西他滨化疗敏感性和/或预后试剂盒，其特征在于，包括外周血白细胞提取试剂。


7.如权利要求3所述的评估肝内胆管细胞癌...

【专利技术属性】
技术研发人员：王红阳，陈磊，杨应成，吴彤，
申请(专利权)人：中国人民解放军海军军医大学第三附属医院，
类型：发明
国别省市：上海;31