一株洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一株洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株及其用途。该菌株命名为LSG‑1，微生物保藏编号为CGMCC No.19595，保藏日期为2020年04月20日，保藏单位为中国普通微生物菌种保藏管理中心。本发明专利技术公开了其在制备水产动物饲料添加剂中的应用，保持动物机体与肠道内微生物之间处于微态平衡状态，同时参与肠道内的物质代谢，从而达到抗菌、促进生长、提高饲料利用率的作用，提高鱼体的生长性能，为水产动物饲料的益生菌添加剂提供参考。

【技术实现步骤摘要】
一株洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株及其用途
本专利技术涉及一株芽孢杆菌菌株及其用途，属于水产
，特别涉及一株洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株及其用途。
技术介绍
洛氏鱥鱼(Rhynchocyprislagowskii(Dybowski,1869))隶属于鲤形目，鲤科、雅罗鱼亚科、鱥属，拉氏鱥鱼属野生小型经济鱼类，天然水域常见个体30g-40g，人工养殖最大个体可达500g以上，其肉质细嫩、肉味鲜美、肌间刺少、营养极其丰富，是高蛋白质、高脂肪的鱼类，蛋白质中人体必需氨基酸和鲜味氨基酸含量丰富，是优质的动物蛋白质。开发拉氏鱥鱼人工养殖前景十分广阔。目前，在中国作为饲料添加剂的益生菌，其中芽孢杆菌属主要有地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌等。蜡状芽孢杆菌分布广泛，常见于土壤、灰尘和污水中，在植物性食品和许多生熟食品中也常见。蜡状芽孢杆菌是一种好氧性、在厌氧情况下也可很好生长的革兰氏阳性杆菌，具有促进动物生长、提高免疫力以及预防疾病等优点，已被作为益生菌广泛应用于饲料、农业、水产养殖等各领域。在动物生产方面，蜡状芽孢杆菌微生态制剂已在养殖业上得到应用。蜡状芽孢杆菌以孢子状态进入动物消化道生长繁殖，保持动物机体与肠道内微生物之间处于微态平衡状态，同时参与肠道内的物质代谢，从而达到抗菌、促进生长、提高饲料利用率的作用。在现有文献中，与蜡状芽孢杆菌在水产中应用相关的文献较少，属于鱼源的蜡状芽孢杆菌基本没有。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术目的是提供一株洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株，其能提高鱼体的生长性能，为水产动物饲料的益生菌添加剂提供参考。本专利技术的另一目的是提供洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株在制备水产动物饲料添加剂中的应用。为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案：本专利技术提供一株洛氏鱥蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)菌株，命名为LSG-1，微生物保藏编号为CGMCCNo.19595，保藏日期为2020年04月20日，保藏单位为中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本专利技术提供如上所述的洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株在制备水产动物饲料添加剂中的应用。进一步地，所述洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株的最适浓度为1×108cfu/mL。本专利技术提供如上所述的洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株在制备水产动物饲料益生菌添加剂中的应用。本专利技术提供如上所述的洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株在制备冷水鱼饲料添加剂中的应用。本专利技术提供如上所述的洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株在制备冷水鱼饲料益生菌添加剂中的应用。本专利技术提供如上所述的洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株在制备冷水鱼疫苗免疫调节剂或免疫增强剂中的应用。本专利技术提供如上所述的洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株在制备冷水鱼活载体疫苗中的应用。本专利技术提供如上所述的洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株在制备洛氏鱥饲料添加剂中的应用。本专利技术提供如上所述的洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株在制备抗菌、促进生长、高饲料利用率的洛氏鱥饲料添加剂中的应用。本专利技术提供一种洛氏鱥蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)菌株，核苷酸序列如下1)-4)任一种所示：1)如SEQIDNo.1所示的核苷酸序列；或2)与SEQIDNo.1的互补序列能够进行杂交的核苷酸序列；或3)与SEQIDNo.1所示的核苷酸序列至少具有97％或以上同源性的核苷酸序列；或4)在SEQIDNo.1所示的核苷酸序列的基础上进行一个或多个碱基的缺失、取代或插入的核苷酸序列变体，且该核苷酸序列变体仍具有相似的功能或活性。进一步地，洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株，核苷酸序列与SEQIDNo.1所示的核苷酸序列至少具有99％或以上同源性的核苷酸序列。本专利技术提供一种用于扩增洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株序列的引物，所述引物的上游引物序列如SEQIDNo.2所示；下游引物序列如SEQIDNo.3所示。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术所提供的洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株有助于保持动物机体与肠道内微生物之间处于微态平衡状态，同时参与肠道内的物质代谢，从而达到抗菌、促进生长、提高饲料利用率的作用；浓度为1×108cfu/mL的鱼源蜡状芽孢杆菌为最适浓度，增重率约是对照组的1.3倍，特定生长率、脏体比、肠长指数和肠体指均为最好；提高鱼体的生长性能，为水产动物饲料的益生菌添加剂提供参考。附图说明图1为实施例中蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)菌落形态；图2为实施例中用邻接法(NJ)构建的10个菌种16SrRNA核苷酸序列系统发育树；图3为效果试验例中蜡状芽孢杆菌对洛氏鱥抗病力的影响；所有的数据表示成活率；不同组间的小写字母表示差异显著性(P<0.05)。具体实施方式现结合附图与具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1菌株的分离与鉴定：(1)菌株的分离无菌条件下取出洛氏鱥肠道内容物，加入无菌的生理盐水进行稀释，取其中3个最适稀释度的稀释液100μL涂布于LB培养基上，37℃恒温培养箱中培养24h。挑取形态特征不同的优势菌群进行纯培养，待菌落形态生长一致时，挑取单菌落，用体积分数为40％的甘油对其进行菌落的保藏，备用。(2)菌株的鉴定对菌株进行形态学鉴定：观察纯化后的菌落形态，如图1所示，并进行革兰氏染色镜检。对菌株进行生理生化鉴定：参照《常见细菌系统鉴定手册》所述方法进行。采用细菌生化微量反应管对分离菌株生化特征进行测定，并用一株地衣芽孢杆菌作参考菌，进行同步实验，如表1所示。表1菌株生化鉴定结果注：“+”表示阳性；“-”表示阴性。对菌株进行分子生物学鉴定：首先，制备DNA模板，将LSG-1菌株接种在LB平板上，37℃培养过夜。取单一菌落接种LB培养液中，37℃震荡培养24h。取菌悬液1mL用DNA提取试剂盒制备DNA，并作为PCR反应的模板。然后，进行16SrRNA的PCR扩增、克隆与测序。采用PCR扩增16SrRNA，以通用引物：27F:AGAGTTTGATCMTGGCTCAG和1492R:TACGGYTACCTTGTTACGACT。PCR反应体系(50μL)：2xTransTaqHiFiPCRSuperMixⅠ25μL，DNA模板3μL，上、下游引物各1μL，双蒸水20μL。PCR程序：94℃预变性5min；95℃10s，55℃20s，72℃1.5min，35个循环；72℃延伸10min。PCR产物纯化后交由吉林省库美生物科技有限公司进行测序，结果如SEQIDNo.1所示。最后，构建16SrRNA的序列分析及系统发育树。将测定的菌株LSG-1的16SrRNA序列在GenBank中进行Blast搜索和分析，选用ClustalW法与相关菌属不同种的16SrRNA序列进行同源序列分析比对，测出LSG-1序列与已知序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株，命名为LSG-1，微生物保藏编号为CGMCC No.19595，保藏日期为2020年04月20日，保藏单位为中国普通微生物菌种保藏管理中心。/n

【技术特征摘要】
1.一株洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株，命名为LSG-1，微生物保藏编号为CGMCCNo.19595，保藏日期为2020年04月20日，保藏单位为中国普通微生物菌种保藏管理中心。


2.权利要求1所述的洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株在制备水产动物饲料添加剂中的应用。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株的最适浓度为1×108cfu/mL。


4.权利要求1所述的洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株在制备水产动物饲料益生菌添加剂中的应用。


5.权利要求1所述的洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株在制备冷水鱼饲料添加剂中的应用。


6.权利要求1所述的洛氏鱥蜡状芽孢杆菌菌株在制备冷水鱼疫苗免疫调节剂或免疫增强剂中的应用。


7.权利要求1所述的洛氏鱥蜡状芽孢杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：张东鸣，陈玉珂，吴振超，王秋举，蔺丽丽，郭志欣，刘洪健，
申请(专利权)人：吉林农业大学，通化师范学院，
类型：发明
国别省市：吉林;22