一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法技术

本发明专利技术公开了一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，主要包括以下步骤：S1：样品采集并保存，并配制标准溶液，同时配制同位素内标使用液，待用；S2：分析前将样品和标准品恢复至室温，校正气相色谱‑质谱联用仪条件使符合分析要求；S3：在氮气环境下，加入消泡剂和同位素内标，样品注入吹脱捕集装置的吹脱管中，把样品中低水溶性的挥发性有机化合物及加入的同位素内标化合物吹脱出来；S4：绘制标准色谱图，并进行定量计算；S5：计算标准曲线，对取血样作加标测定回收率，得出回收率和精密度。本发明专利技术用于生物样本VOCs的定性定量分析，其检测效果准确，操作简便，可有效准确的测定生物样本中挥发性有机物。

【技术实现步骤摘要】
一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法
本专利技术涉及检测方法
，具体是涉及一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法。
技术介绍
检验科是临床医学和基础医学之间的桥梁，常与我们息息相关的就是血样和尿样的检测，这两样检查通常是使用最高的检验项目，对于生物样本VOCs的定性定量分析常包括一下几种预处理方式：溶剂解吸法、低温预浓缩-热解吸法、固相微萃取法SPME、低温冷阱样品富集，而对于检测手段通常使用气相色谱技术GC和GC-MS、在线监测质子转移反应质谱PTR-MS、飞行时间质谱TOF-MS。然后上述这些方法进行生物样本VOCs的定性定量分析，会相应出现分析误差较大、检测方法复杂、检测成本较为高昂等问题，而且在检测过程中，空气易对测试目标物产生干扰，而造成检测不准确的情况，因此，现需要一种新型的用于测定生物样本VOCs的方法来解决这些问题。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法。本专利技术的技术方案是:一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，主要包括以下步骤：S1：样品采集并保存，并配制标准溶液，同时配制同位素内标使用液，待用；S2：分析前将样品和标准品恢复至室温，校正气相色谱-质谱联用仪条件使符合分析要求；S3：在氮气环境下，对40mL棕色进样瓶进行吹气；取出10mL水样，打开4mL样品瓶瓶盖，将血样倒入棕色进样瓶中，在4mL进样瓶中分别加入两次纯水进行充分震荡后，将4mL进样瓶中水样倒入40mL棕色进样瓶中，然后依次加入0.039g消泡剂、200μL同位素内标使用液，用纯水将样品瓶加至20mL，密封样品瓶，充分震荡样品瓶；S4：绘制标准色谱图，并进行定量计算；S5：计算标准曲线，对取血样分别作高浓度和低浓度两个水平的加标测定回收率，每个加标样品做六个平行样测定精密度，得出回收率和精密度。进一步地，所述标准系列溶液的配制步骤具体为：(1)称量并配置三氯甲烷2.52mg/mL、四氯化碳6.17mg/mL、苯2.81mg/mL、三氯乙烯3.45mg/mL、二氯一溴甲烷3.28mg/mL、甲苯3.44mg/mL、四氯乙烯2.91mg/mL、一氯二溴甲烷4.17mg/mL、乙苯2.48mg/mL、对二甲苯2.83mg/mL、邻二甲苯2.77mg/mL、三溴甲烷5.74mg/mL单标标准溶液；(2)准确取上述配置的单标三氯甲烷794μL、四氯化碳324μL、苯712μL、三氯乙烯580μL、二氯一溴甲烷610μL、甲苯581μL、四氯乙烯687μL、一氯二溴甲烷480μL、乙苯806μL、对二甲苯707μL、邻二甲苯722μL、三溴甲烷348μL于10.0mL容量瓶中，配制成浓度为200.0μg/mL的标准贮备液，分装入1mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；(3)将标准贮备液用甲醇稀释10倍，摇匀混合，配制成浓度为20.0μg/mL的混标溶液，分装入1mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；(4)在15个进样小瓶中分别加入0.40mL甲醇，取0.40mL20.0μg/mL的混标溶液(A)到第一个小瓶，混匀，得到浓度为10.0μg/mL的混标溶液(B)；(5)同理取0.40mLB到第二个小瓶得到浓度为5.0μg/mL的混标溶液(C)；(6)依次逐级“倍比”稀释，得到浓度为1250、625、313、157、78.3、39.1、9.6、9.78、4.89、2.45、1.22、0.61ng/mL的标准系列；(7)再从这12个小瓶中分别取200μL到43mL进样瓶中，先加20mL纯水，同时加入200μL同位素内标和0.039g消泡剂，加满纯水，密封样品瓶得到梯度为0、0.003、0.006、0.011、0.023、0.045、0.090、0.180、0.361、0.721、1.44、2.88、5.76ng/mL的标准系列，将进样瓶放入超声波振荡器中震荡1min，上机测定。进一步地，所述同位素内标的配制步骤具体为：(1)分别取三氯甲烷(C13)0.5539g、四氯化碳(C13)0.0581g、苯(D5)0.0421g、三氯乙烯(C13)0.1057g、甲苯(D5)0.0435g、乙苯(D10)0.0451g、对二甲苯(D10)0.0452g、邻二甲苯(D4)0.0357g、三溴甲烷(C13)0.0908g，用甲醇定容至10.00mL，得到同位素单标储备液；分别取上述储备液三氯甲烷(C13)0.181mL、四氯化碳(C13)1.721mL、苯(D5)2.375mL、三氯乙烯0.946mL、甲苯(D5)2.299mL、乙苯(D10)2.217mL、对二甲苯(D10)2.212mL、邻二甲苯(D4)2.801mL、三溴甲烷(C13)1.101mL，用甲醇定容至50.00mL，得到浓度为200μg/mL的同位素混标贮备液，分装入1mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；(2)取上述同位素混标贮备液1.0mL，用甲醇稀释至10.00mL，得到浓度为20.0μg/mL同位素混标中间液；(3)取同位素混标中间液0.2mL，用甲醇稀释至10.00mL，得到浓度为400.0ng/mL的同位素内标使用液，在标准曲线、空白、血液中分别加入200μL同位素内标使用液。进一步地，所述定量具体为：计算血液中被测组分的浓度ρi＝(Ci×Cis2/Cis1)×V1/V其中，ρi：实际样品中目标物的浓度，ng/mL；Ci:标准曲线计算的样品测定液中被测组分的浓度，ng/mL；Cis1:标准系列内标物浓度，ng/mL；Cis2:样品中内标物的浓度，ng/mL；V1:血样稀释后的体积，mL；V:血样体积，mL。进一步地，所述步骤S1的采集方法具体为：1)采样器皿，选用标识刻度4mL棕色玻璃瓶附螺旋盖及白色聚四氟乙烯垫片，采样前，需在80℃真空烘箱中烘烤24h，待烘箱冷却至室温后，使用高纯氮气将烘箱压力降至大气压；2)样品采集：将真空采样管中样品轻轻倾倒入4mL棕色螺口样品瓶中，使样品瓶完全充满，用带有白色特氟龙垫片的瓶盖拧紧；3)样品保存，样品于4℃冷藏保存，样品在采样后10周内完成分析。进一步地，所述步骤S2中气相色谱-质谱联用仪参数具体为：色谱条件：色谱柱:Rtx-VMS石英毛细管柱(30m×0.25mm×1.4μm)；柱温：柱温起始温度为35℃，保持5min，以6℃/min升至160℃，保持6min，20℃/min升至210℃,保持2min；载气：氦气，1.0mL/min，恒流方式；质谱条件：离子源温度：230℃，四级杆温度：150℃。定量离子选择质谱图中离子丰度最高相对稳定的离子，每种化合物的保留时间和质谱峰顶点值由已知标准物质全扫描模式和SIM方式确定，色谱峰最宽为4s，SIM驻留时间要最好保证每个峰有15个到20个数据点，每个样品的分析时间为30min。进一步地，所述步骤S3中吹气采用吹扫捕集本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：/nS1：样品采集并保存，并配制标准溶液，同时配制同位素内标使用液，待用；/nS2：分析前将样品和标准品恢复至室温，校正气相色谱-质谱联用仪条件使符合分析要求；/nS3：在氮气环境下，对40mL棕色进样瓶进行吹气；取出10mL水样，打开4mL样品瓶瓶盖，将血样倒入棕色进样瓶中，在4mL进样瓶中分别加入两次纯水进行充分震荡后，将4mL进样瓶中水样倒入40mL棕色进样瓶中，然后依次加入0.039g消泡剂、200μL同位素内标使用液，用纯水将样品瓶加至20mL，密封样品瓶，充分震荡样品瓶；/nS4：绘制标准色谱图，并进行定量计算；/nS5：计算标准曲线，对取血样分别作高浓度和低浓度两个水平的加标测定回收率，每个加标样品做六个平行样测定精密度，得出回收率和精密度。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：
S1：样品采集并保存，并配制标准溶液，同时配制同位素内标使用液，待用；
S2：分析前将样品和标准品恢复至室温，校正气相色谱-质谱联用仪条件使符合分析要求；
S3：在氮气环境下，对40mL棕色进样瓶进行吹气；取出10mL水样，打开4mL样品瓶瓶盖，将血样倒入棕色进样瓶中，在4mL进样瓶中分别加入两次纯水进行充分震荡后，将4mL进样瓶中水样倒入40mL棕色进样瓶中，然后依次加入0.039g消泡剂、200μL同位素内标使用液，用纯水将样品瓶加至20mL，密封样品瓶，充分震荡样品瓶；
S4：绘制标准色谱图，并进行定量计算；
S5：计算标准曲线，对取血样分别作高浓度和低浓度两个水平的加标测定回收率，每个加标样品做六个平行样测定精密度，得出回收率和精密度。


2.如权利要求1所述的一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，其特征在于，所述标准系列溶液的配制步骤具体为：
(1)称量并配置三氯甲烷2.52mg/mL、四氯化碳6.17mg/mL、苯2.81mg/mL、三氯乙烯3.45mg/mL、二氯一溴甲烷3.28mg/mL、甲苯3.44mg/mL、四氯乙烯2.91mg/mL、一氯二溴甲烷4.17mg/mL、乙苯2.48mg/mL、对二甲苯2.83mg/mL、邻二甲苯2.77mg/mL、三溴甲烷5.74mg/mL单标标准溶液；
(2)准确取上述配置的单标三氯甲烷794μL、四氯化碳324μL、苯712μL、三氯乙烯580μL、二氯一溴甲烷610μL、甲苯581μL、四氯乙烯687μL、一氯二溴甲烷480μL、乙苯806μL、对二甲苯707μL、邻二甲苯722μL、三溴甲烷348μL于10.0mL容量瓶中，配制成浓度为200.0μg/mL的标准贮备液，分装入1mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；
(3)将标准贮备液用甲醇稀释10倍，摇匀混合，配制成浓度为20.0μg/mL的混标溶液，分装入1mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；
(4)在15个进样小瓶中分别加入0.40mL甲醇，取0.40mL20.0μg/mL的混标溶液(A)到第一个小瓶，混匀，得到浓度为10.0μg/mL的混标溶液(B)；
(5)同理取0.40mLB到第二个小瓶得到浓度为5.0μg/mL的混标溶液(C)；
(6)依次逐级“倍比”稀释，得到浓度为1250、625、313、157、78.3、39.1、9.6、9.78、4.89、2.45、1.22、0.61ng/mL的标准系列；
(7)再从这12个小瓶中分别取200μL到43mL进样瓶中，先加20mL纯水，同时加入200μL同位素内标和0.039g消泡剂，加满纯水，密封样品瓶得到梯度为0、0.003、0.006、0.011、0.023、0.045、0.090、0.180、0.361、0.721、1.44、2.88、5.76ng/mL的标准系列，将进样瓶放入超声波振荡器中震荡1min，上机测定。


3.如权利要求1所述的一种用于测定生物样本中挥发性有机物的方法，其特征在于，所述同位素内标的配制步骤具体为：
(1)分别取三氯甲烷(C13)0.5539g、四氯化碳(C13)0.0581g、苯(D5)0.0421g、三氯乙烯(C13)0.1057g、甲苯(D5)0.0435g、乙苯(D10)0.0451g、对二甲苯(D10)0.0452g、邻二甲苯(D4)0.0357g、三溴甲烷(C13)0.0908g，用甲醇定容至10.00mL，得到同位素单标储备液；分别取上述储备液三氯甲烷(C13)0.181mL、四氯化碳(C13)1.721mL、苯(D5)2.375mL、三氯乙烯0.946mL、甲苯(D5)2.299mL、乙苯(D10)2.217mL、对二甲苯(D10)2.212mL、邻二甲苯(D4)2.801mL、三溴甲烷(C13)1.101mL，用甲醇定容至50.00mL，得到浓度为200μg/mL的同位素混标贮备液，分装入1mL棕色安瓿瓶中，封口后置于冰箱中，冷藏保存；
(2...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋宁慧，张爱国，荣维广，张圣虎，张芹，卜元卿，王博，王艺璇，
申请(专利权)人：生态环境部南京环境科学研究所，江苏省疾病预防控制中心江苏省公共卫生研究院，
类型：发明
国别省市：江苏;32