一种金银莲花基因组DNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种金银莲花基因组DNA的提取方法，具体包括如下步骤：S1、取适量金银莲花叶片放入研钵中，利用液氮研磨成粉状，研磨结束后取适量的粉末放入离心管中，S2、加入裂解液，65℃水浴25min，S3、加入1/3体积的5M乙酸钾于4℃沉降10min，离心收集上清，S4、加入等体积酚、氯仿和异戊醇，本发明专利技术涉及生物技术领域。该金银莲花基因组DNA的提取方法，可实现通过增加了乙酸钾沉降步骤，去除杂质，使提取的DNA不再粘稠，样本正常，很好的避免了由于原始样本中的杂质过多，导致提取的DNA粘稠，电泳无法跑出胶孔的情况发生，而利用本方法在增加了乙酸钾步骤后，提取过程也相对容易，更加高效，同时也大大方便了后续的建库上机等相关操作。

【技术实现步骤摘要】
一种金银莲花基因组DNA的提取方法
本专利技术涉及生物
，具体为一种金银莲花基因组DNA的提取方法。
技术介绍
金银莲花(学名：Nymphoidesindica(L.)O.Kuntze)：多年生水生草本，茎圆柱形，不分枝，形似叶柄，顶生单叶。叶飘浮，近革质，宽卵圆形或近圆形，下面密生腺体，基部心形，全缘，具不甚明显的掌状叶脉，叶柄短，圆柱形，花多数，簇生节上，花梗细弱，圆柱形，不等长，分裂至近基部，裂片长椭圆形至披针形，先端钝，脉不明显；花冠白色，基部黄色，分裂至近基部，冠筒短，裂片卵状椭圆形，先端钝，腹面密生流苏状长柔毛，蒴果椭圆形，花果期8-10月，金银莲花是公园常见的水生花卉，叶似睡莲，椭圆形至心形，革质光滑，青绿色，漂浮于水面；常在夏天开白色的小花，花齿绒毛状，幼小娇柔，带给人一种花欲静而风不止，景有尽而意无穷的美感，在风景区或公园湖面成片种植金银莲花，夏秋时节。植物基因组的提取方法为CTAB法，而类似于金银莲花这种含有多糖多酚等次生代谢产物的水生植物，在对其DNA提取过程中，多酚类物质极易氧化，氧化后的产物与DNA分子发生不可逆结合，同时多糖又与DNA形成粘稠的胶状复合物，使提取的DNA样品不仅呈棕褐色难于溶解，而且也不易被限制性内切酶和TaqDNA聚合酶所识别，从而导致PCR扩增和酶切的失败，以致使金银莲花的分子生物学研究进展缓慢。目前，在金银莲花的DNA提取方面很多人进行了研究，但大多是针对小量的提取，并且蛋白去除也不够彻底，为了进行金银莲花的基因组测序研究，本专利技术针对金银莲花的多酚和多糖的特性，以CTAB法为基础进行了不同的改良，对其叶片DNA的提取进行了研究。
技术实现思路
(一)解决的技术问题针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种金银莲花基因组DNA的提取方法，实现低成本、易操作、并最终获得较高质量的基因组，方便后续的建库、上机以及PCR反应。(二)技术方案为实现以上目的，本专利技术通过以下技术方案予以实现：一种金银莲花基因组DNA的提取方法，具体包括如下步骤：S1、取适量金银莲花叶片放入研钵中，利用液氮研磨成粉状，研磨结束后取适量的粉末放入离心管中；S2、加入裂解液，65℃水浴25min；S3、加入1/3体积的5M乙酸钾于4℃沉降10min，离心收集上清；S4、加入等体积酚、氯仿和异戊醇，并抽提一次；S5、离心后向上清中加入等体积氯仿和异戊醇，并抽提一次；S6、离心后向上清中加入0.7倍的异丙醇，混匀后沉淀10min；S7、离心后用75％乙醇清洗沉淀2次；S8、加入适量的10mMTris-HCl溶解。优选的，所述步骤S2中加入的裂解液为2％的CTAB以及β-ME。优选的，所述步骤S3中乙酸钾的pH为5.2。优选的，所述步骤S4中酚、氯仿和异戊醇的等体积比为25:24:1。优选的，所述步骤S5中加入氯仿和异戊醇的等体积比为24:1。优选的，所述步骤S8中Tris-HCl中含有RNaseA。优选的，所述CTAB裂解液的配方为：100mMTris-HCl(pH8.0)、20mMEDTA、1.4MNaCl、2％(W/V)CATB、20％(W/V)PVP和0.4％(V/V)β-巯基乙醇。(三)有益效果本专利技术提供了一种金银莲花基因组DNA的提取方法。与现有技术相比具备以下有益效果：该金银莲花基因组DNA的提取方法，具体包括如下步骤：S1、取适量金银莲花叶片放入研钵中，利用液氮研磨成粉状，研磨结束后取适量的粉末放入离心管中，S2、加入裂解液，65℃水浴25min，S3、加入1/3体积的5M乙酸钾于4℃沉降10min，离心收集上清，S4、加入等体积酚、氯仿和异戊醇，并抽提一次，S5、离心后向上清中加入等体积氯仿和异戊醇，并抽提一次，S6、离心后向上清中加入0.7倍的异丙醇，混匀后沉淀10min，S7、离心后用75％乙醇清洗沉淀2次，S8、加入适量的10mMTris-HCl溶解，可实现通过增加了乙酸钾沉降步骤，去除杂质，使提取的DNA不再粘稠，样本正常，很好的避免了由于原始样本中的杂质过多，导致提取的DNA粘稠，电泳无法跑出胶孔的情况发生，而利用本方法在增加了乙酸钾步骤后，提取过程也相对容易，更加高效，同时也大大方便了后续的建库上机等相关操作。附图说明图1为本专利技术采用常规的CTAB法进行提取不加乙酸钾的实施例示意图；图2为本专利技术加乙酸钾的实施例示意图。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。请参阅图1-2，本专利技术实施例提供一种技术方案：一种金银莲花基因组DNA的提取方法，具体包括如下步骤：S1、取适量金银莲花叶片放入研钵中，利用液氮研磨成粉状，研磨结束后取适量的粉末放入离心管中；S2、加入裂解液，65℃水浴25min，裂解液为2％的CTAB以及β-ME，CTAB裂解液的配方为：100mMTris-HCl(pH8.0)、20mMEDTA、1.4MNaCl、2％(W/V)CATB、20％(W/V)PVP和0.4％(V/V)β-巯基乙醇；S3、加入1/3体积的5M乙酸钾于4℃沉降10min，离心收集上清，乙酸钾的pH为5.2；S4、加入等体积酚、氯仿和异戊醇，并抽提一次，酚、氯仿和异戊醇的等体积比为25:24:1；S5、离心后向上清中加入等体积氯仿和异戊醇，并抽提一次，氯仿和异戊醇的等体积比为24:1；S6、离心后向上清中加入0.7倍的异丙醇，混匀后沉淀10min；S7、离心后用75％乙醇清洗沉淀2次；S8、加入适量的10mMTris-HCl溶解，Tris-HCl中含有RNaseA。如图1所示，用常规的CTAB法进行提取，因为原始样本中的杂质过多，导致提取的DNA粘稠，电泳无法跑出胶孔。如图2所示，而利用本方法在增加了乙酸钾步骤后，提取的DNA不再粘稠了，样本正常，提取过程也相对容易，高效了很多，同时后续的建库上机等相关操作也方便了不少。综上，本专利技术可实现通过增加了乙酸钾沉降步骤，去除杂质，使提取的DNA不再粘稠，样本正常，很好的避免了由于原始样本中的杂质过多，导致提取的DNA粘稠，电泳无法跑出胶孔的情况发生，而利用本方法在增加了乙酸钾步骤后，提取过程也相对容易，更加高效，同时也大大方便了后续的建库上机等相关操作。需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种金银莲花基因组DNA的提取方法，其特征在于：具体包括如下步骤：/nS1、取适量金银莲花叶片放入研钵中，利用液氮研磨成粉状，研磨结束后取适量的粉末放入离心管中；/nS2、加入裂解液，65℃水浴25min；/nS3、加入1/3体积的5M乙酸钾于4℃沉降10min，离心收集上清；/nS4、加入等体积酚、氯仿和异戊醇，并抽提一次；/nS5、离心后向上清中加入等体积氯仿和异戊醇，并抽提一次；/nS6、离心后向上清中加入0.7倍的异丙醇，混匀后沉淀10min；/nS7、离心后用75％乙醇清洗沉淀2次；/nS8、加入适量的10mM Tris-HCl溶解。/n

【技术特征摘要】
1.一种金银莲花基因组DNA的提取方法，其特征在于：具体包括如下步骤：
S1、取适量金银莲花叶片放入研钵中，利用液氮研磨成粉状，研磨结束后取适量的粉末放入离心管中；
S2、加入裂解液，65℃水浴25min；
S3、加入1/3体积的5M乙酸钾于4℃沉降10min，离心收集上清；
S4、加入等体积酚、氯仿和异戊醇，并抽提一次；
S5、离心后向上清中加入等体积氯仿和异戊醇，并抽提一次；
S6、离心后向上清中加入0.7倍的异丙醇，混匀后沉淀10min；
S7、离心后用75％乙醇清洗沉淀2次；
S8、加入适量的10mMTris-HCl溶解。


2.根据权利要求1所述的一种金银莲花基因组DNA的提取方法，其特征在于：所述步骤S2中加入的裂解液为2％的CTAB以及β-ME。


3.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴冬晴，
申请(专利权)人：嘉兴菲沙基因信息有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33