OX40单克隆抗体及应用制造技术

本发明专利技术涉及单克隆抗体领域，特别涉及OX40单克隆抗体及应用。本发明专利技术提供的OX40的单克隆抗体，(I)、其重链的三个CDR区的氨基酸序列；且(II)、其轻链的三个CDR区的氨基酸序列；或与所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与所述氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或与所述序列至少有80％同源性的氨基酸序列。与现有OX40单克隆抗体相比，本发明专利技术公开的单克隆抗体对抗原具有较强的特异性、较高的亲和力。该单克隆抗体能用于免疫荧光染色、Western blot、ELISA和流式细胞等检测。

【技术实现步骤摘要】
OX40单克隆抗体及应用
本专利技术涉及单克隆抗体领域，特别涉及OX40单克隆抗体及应用。
技术介绍
OX40(又称CD134)属于肿瘤坏死因子受体超家族(TNFRSF)，是相对分子质量约50kD的Ⅰ型跨膜糖蛋白。OX40是一个相对保守的分子，主要表达在活化的CD4+和CD8+T细胞表面，其配体OX40L在活化的B细胞、树突细胞和内皮细胞上均有表达。在机体的免疫应答过程中，OX40/OX40L作为一对重要的共刺激分子，为T、B细胞的激活提供了重要的共刺激信号，其信号传导也与效应细胞存在和功能相关。由于OX40/OX40L在机体的免疫应答和自身免疫性疾病的发生发展中发挥了重要作用，并随着生物学功能的进一步揭示逐渐成为临床干预自身免疫性疾病、移植排斥反应和肿瘤的一个理想靶点。研制OX40的抗体，能够为进一步研究、揭示OX40/OX40L的生物学功能(如该分子的作用以及相关信号通路)提供基础。目前，有几个市售的科研用抗人OX40的鼠源单克隆抗体，如Invitrogen公司、LifeSpanBioSciences公司。但是这几个在售的OX40的鼠源单克隆抗体的特异性不够强，亲和力不够高。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供OX40单克隆抗体及应用。该单克隆抗体对抗原具有较强的特异性、较高的亲和力。能用于免疫荧光染色、Westernblot、ELISA和流式细胞等检测。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了OX40的单克隆抗体，(I)、其重链的三个CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO:5、6和7所示的氨基酸序列；且(II)、其轻链的三个CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO:8、9和10所示的氨基酸序列；或(III)、(I)或(II)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(I)或(II)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或(IV)、与(I)、(II)或(III)所述序列至少有80％同源性的氨基酸序列。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述的单克隆抗体，(V)、其重链可变区具有如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；且(VI)、其轻链可变区具有如SEQIDNO:4中任一项所示的氨基酸序列；或(VII)、(V)或(VI)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(V)或(VI)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或(VIII)、与(V)、(VI)或(VII)所述序列至少有80％同源性的氨基酸序列。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述的单克隆抗体，所述多个为2个、3个、4个或5个。本专利技术还提供了编码所述的单克隆抗体的核苷酸。在本专利技术的一些具体实施方案中，所述的核苷酸，(IX)、其重链具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列；且(X)、其轻链具有SEQIDNO:3所示的核苷酸序列；或(XI)、(IX)或(X)所述的核苷酸序列经修饰、取代、缺失或添加一个或多个碱基获得的核苷酸序列；(XII)、与(IX)、(X)或(XI)所述的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列；(XIII)、如(IX)、(X)、(XI)或(XII)所述的核苷酸序列的互补序列。本专利技术还提供了一种表达载体，包括编码所述单克隆抗体的核苷酸。在此基础上，本专利技术还提供了转化或转染所述表达载体的宿主细胞。本专利技术还提供了所述单克隆抗体的制备方法，包括：培养所述宿主细胞、诱导OX40的单克隆抗体的表达。此外，本专利技术还提供了结合物，包含经化学标记或生物标记的所述的单克隆抗体。在上述研究的基础上，本专利技术还提供了所述单克隆抗体或所述结合物与固体介质或半固体介质偶联制得的偶联物。本专利技术还提供了所述单克隆抗体或所述结合物或所述偶联物在制备预防和/或治疗自身免疫性疾病的药物中的应用或用于制备免疫荧光染色、Westernblot检测、ELISA检测、流式细胞检测的产品中的应用。本专利技术还提供了药物，包括所述单克隆抗体或所述结合物或所述偶联物以及药学上可接受的辅料。此外，本专利技术还提供了试剂盒，包括所述单克隆抗体或所述结合物或所述偶联物以及可接受的助剂。本专利技术提供了OX40的单克隆抗体，(I)、其重链的三个CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO:5、6和7所示的氨基酸序列；且(II)、其轻链的三个CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO:8、9和10所示的氨基酸序列；或(III)、(I)或(II)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(I)或(II)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或(IV)、与(I)、(II)或(III)所述序列至少有80％同源性的氨基酸序列。与现有OX40单克隆抗体相比，本专利技术公开的单克隆抗体对抗原具有较强的特异性、较高的亲和力。该单克隆抗体能用于免疫荧光染色、Westernblot、ELISA和流式细胞等检测。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。图1示OX40蛋白的纯化(M：蛋白分子量标准；1：诱导表达菌破碎上清；2～4：纯化的OX40蛋白)；图2示OX40抗体效价的测定结果；图3示免疫荧光检测OX40单抗的特异性(1：空载对照；2：同型抗体对照；3：8F8单克隆抗体细胞株)；图4示Westernblot检测OX40单抗的特异性(1：空载对照；2：8F8株单克隆抗体)；图5示本专利技术提供的8F8单克隆抗体亲和力检测图。具体实施方式本专利技术公开了OX40单克隆抗体及应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。本专利技术提供了OX40单克隆抗体的氨基酸序列，可经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得新的氨基酸序列，且具有与本专利技术提供的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列。或者与公开序列至少有80％同源性的氨基酸序列可作为替代方案。本专利技术提供了OX40单克隆抗体的核苷酸序列，其互补序列或因遗传密码的简并性而与本专利技术公开核苷酸序列不同，但编码相同蛋白的序列，或与本专利技术公开序列至少有80％同源性的序列可作为替代方案。本专利技术提供了OX40单克隆抗体的核苷酸序列，经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与本专利技术公开核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列可作为替代方案。本专利技术采用小鼠腹水生产抗体，也可以采用大规模培养分泌抗体的杂交瘤细胞或稳定表达抗体基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.OX40的单克隆抗体，其特征在于，/n(I)、其重链的三个CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQ ID NO:5、6和7所示的氨基酸序列；且/n(II)、其轻链的三个CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQ ID NO:8、9和10所示的氨基酸序列；或/n(III)、(I)或(II)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(I)或(II)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或/n(IV)、与(I)、(II)或(III)所述序列至少有80％同源性的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.OX40的单克隆抗体，其特征在于，
(I)、其重链的三个CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO:5、6和7所示的氨基酸序列；且
(II)、其轻链的三个CDR区的氨基酸序列分别具有如SEQIDNO:8、9和10所示的氨基酸序列；或
(III)、(I)或(II)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(I)或(II)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或
(IV)、与(I)、(II)或(III)所述序列至少有80％同源性的氨基酸序列。


2.如权利要求1所述的单克隆抗体，其特征在于，
(V)、其重链可变区具有如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列；且
(VI)、其轻链可变区具有如SEQIDNO:4中任一项所示的氨基酸序列；或
(VII)、(V)或(VI)所述氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或多个氨基酸获得的氨基酸序列，且与(V)或(VI)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或
(VIII)、与(V)、(VI)或(VII)所述序列至少有80％同源性的氨基酸序列。


3.如权利要求1或2所述的单克隆抗体，其特征在于，所述多个为2个、3个、4个或5个。


4....

【专利技术属性】
技术研发人员：万晓春，陈有海，李俊鑫，刘绿艳，刘茂玄，
申请(专利权)人：深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44