一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及体外诊断试剂技术领域，尤其涉及一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的试剂盒及其制备方法。试剂盒包括双联检测卡和检测缓冲液；双联检测卡内设有2019新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条和2019新型冠状病毒IgG抗体检测试纸条，2019新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条和2019新型冠状病毒IgG抗体检测试纸条分别包括样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中样品垫上包被有抗绵羊红细胞抗体，硝酸纤维素膜上设有荧光抗体固相线、检测线和质控线。利用本发明专利技术中的试剂盒可以提高检出率，而且操作简单。

【技术实现步骤摘要】
一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及体外诊断试剂
，尤其涉及一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的试剂盒及其制备方法。
技术介绍
2019新型冠状病毒，即“COVID-19”，2020年2月11日被世界卫生组织命名。新型冠状病毒属于β属的新型冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm。S蛋白是病毒的主要蛋白之一，其编码基因用于病毒分型。N蛋白包裹病毒基因组，可作为诊断抗原。基于目前的流行病学调查，其临床表现：潜伏期一般为3～7天，最长不超过21天。人群普遍易感，以发热、乏力、干咳为主要表现。少数患者伴有鼻塞、流涕、腹泻等症状。重型病例多在一周后出现呼吸困难，严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出凝血功能障碍。值得注意的是重型、危重型患者病程中可为中低热，甚至无明显发热。部分患者仅表现为低热、轻微乏力等，无肺炎表现，多在1周后恢复。多数患者预后良好，儿童病例症状相对较轻，少数患者病情危重。死亡病例多见于老年人和有慢性基础疾病者。可能的传播途径包括飞沫传播、粪口传播以及接触传播。目前COVID-19指南对于疑似患者的检查缺乏特异性以及时效性。过去对疫情的防控时期均有免疫诊断试剂做为辅助诊断的先例，如2003年的传染性非典型肺炎(SARS),钟南山院士曾在专家论坛发表《SARS预防与治疗研究》的期刊中提到“应该考虑结合特异性诊断手段(冠状病毒RT-PCR,ELISA,IgG及IgM免疫荧光检测)等”。人体在接触外来抗原的时候，最早产生的抗体是IgM，是由B细胞表面受体直接分泌，产生IgM的B细胞进入淋巴结，在发生中心接受T细胞和抗原提呈细胞的刺激，进一步成熟，分化为浆细胞，大量产生IgG。IgM一般在感染3-7天后产生，所以可以用IgM来反应机体是不是处于急性感染状态，作为早期诊断的主要指标。IgG抗体较lgM抗体出现稍晚,逐渐上升。现有技术中主要通过核酸进行检测，但是由于样本采集比较困难，此外对实验室的条件以及检测人员的技术水平要求比较高，上述影响因素出现一个都会影响检测结果，导致检测结果呈假阴性，影响检测结果的准确性。因此针对上述问题，本专利技术建立了一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的干式免疫荧光试剂盒及其制备方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的干式免疫荧光试剂盒，利用该试剂盒可以提高检出率，而且操作简单。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是：一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的试剂盒，所述试剂盒包括双联检测卡和检测缓冲液；所述双联检测卡内设有2019新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条和2019新型冠状病毒IgG抗体检测试纸条，所述2019新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条和2019新型冠状病毒IgG抗体检测试纸条分别包括样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中样品垫上包被有抗绵羊红细胞抗体，硝酸纤维素膜上设有荧光抗体固相线、检测线和质控线。作为一种改进的技术方案，所述2019新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条的硝酸纤维素膜的荧光抗体固相线包被有荧光标记的鼠抗人IgM单抗，所述2019新型冠状病毒IgG抗体检测试纸条的硝酸纤维素膜的荧光抗体固相线包被有荧光标记的鼠抗人IgG单抗，且所述2019新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条和所述2019新型冠状病毒IgG抗体检测试纸条的硝酸纤维素膜的检测线包被有2019新型冠状病毒的N蛋白抗原和S蛋白抗原的组合物，质控线包被有羊抗鼠IgG多抗。作为一种改进的技术方案，所述检测缓冲液按照每100mL、10～20mMTris溶液中含有0.1～1.5wt％PEG、0.1～10wt％S9和0.1～0.5v/v％PC300的进行配制。本专利技术所要解决的技术问题是：针对现有技术存在的不足，提供一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的试剂盒的制备方法，该方法下制备的试剂盒可以提高检出率。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案是：一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的试剂盒的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：(1)抗原蛋白组合物稀释液的制备：将抗原包被液与2019新型冠状病毒的N蛋白抗原和S蛋白抗原组合物混合，得到抗原蛋白组合物稀释液；(2)荧光标记抗体稀释液的制备：将固相液与荧光标记的抗体混合，得到荧光标记抗体稀释液；(3)喷膜：将荧光标记抗体稀释液、抗原蛋白组合物稀释液和羊抗鼠IgG多抗分别喷涂在2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体检测试纸条的硝酸纤维素膜上得到荧光抗体固相线、检测线和质控线，再用BSA对抗原检测线进行封闭，封闭结束后进行干燥，得到的硝酸纤维素膜；(4)贴板、裁切得到2019新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条和2019新型冠状病毒IgG抗体检测试纸条；再将上述两种试纸条分别置于双联检测卡的下板块内，将上板块的加样口和检测窗口分别与样品垫和硝酸纤维素膜对齐后与下板块进行组装，即可。作为一种改进的技术方案，步骤(1)中的抗原包被液按照10～50mM、pH7.0～8.0PBS中含有1～3wt％海藻糖和0.5～5v/v％甲醇进行配置，且所述2019新型冠状病毒N蛋白抗原和S蛋抗原的组合物与抗原包被液按照体积比1:2-10的比例混合。作为一种改进的技术方案，步骤(1)中2019新型冠状病毒的N蛋白抗原和S蛋白抗原的组合物中N蛋白抗原和S蛋白抗原按照体积比1:2-10的比例混合。作为一种改进的技术方案，所述步骤(2)中的固相液按照50mM、pH7.0-8.0的PB中含有0.1-1wt％酪蛋白、0.5-10wt％BSA、0.5-10wt％海藻糖、0.1-5wt％PVP、0.01-1v/v％吐温进行配置，且荧光标记的IgM抗体和IgG抗体与所述固相液均按照体积比1:1-10的比例混合。作为一种改进的技术方案，步骤(3)中将喷膜后的硝酸纤维素膜放于15％～40％的湿度、37℃的温度下，干燥0.5h；再用1wt％BSA进行封闭抗原，封闭结束后放入干燥箱，在15％～40％的湿度、37℃的温度下，干燥2h即可。采用了上述技术方案后，本专利技术的有益效果是：与现有技术相比，本专利技术主要具有以下优点：(1)优化了抗原包被工艺，一定浓度的糖类物质的加入增强了抗原结构稳定性；添加一定量的甲醇使抗原质控线条更加均一，避免了仪器吸收荧光不均匀而产生的重复性问题；抗原用一定浓度的BSA进行封闭，增加了特异性和敏感度；采用N蛋白与S蛋白一起包被，降低漏检的同时，增加了试剂盒的灵敏度。同时检测IgM与IgG抗体，提高检出率，避免漏检。(2)本专利技术的试剂盒提供了一种荧光标记固相液，并把荧光标记物固相在NC膜极大提高了精密度；解决了荧光标记物和板条储存条件不一致的困难，同时大大简化了组装工艺，降低了生产成本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括双联检测卡和检测缓冲液；所述双联检测卡内设有2019新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条和2019新型冠状病毒IgG抗体检测试纸条，所述2019新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条和2019新型冠状病毒IgG抗体检测试纸条分别包括样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中样品垫上包被有抗绵羊红细胞抗体，硝酸纤维素膜上设有荧光抗体固相线、检测线和质控线。/n

【技术特征摘要】
1.一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括双联检测卡和检测缓冲液；所述双联检测卡内设有2019新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条和2019新型冠状病毒IgG抗体检测试纸条，所述2019新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条和2019新型冠状病毒IgG抗体检测试纸条分别包括样品垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，其中样品垫上包被有抗绵羊红细胞抗体，硝酸纤维素膜上设有荧光抗体固相线、检测线和质控线。


2.根据权利要求1所述的一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的试剂盒，其特征在于：所述2019新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条的硝酸纤维素膜的荧光抗体固相线包被有荧光标记的鼠抗人IgM单抗，所述2019新型冠状病毒IgG抗体检测试纸条的硝酸纤维素膜的荧光抗体固相线包被有荧光标记的鼠抗人IgG单抗，且所述2019新型冠状病毒IgM抗体检测试纸条和所述2019新型冠状病毒IgG抗体检测试纸条的硝酸纤维素膜的检测线包被有2019新型冠状病毒的N蛋白抗原和S蛋白抗原的组合物，质控线包被有羊抗鼠IgG多抗。


3.根据权利要求1所述的一种联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的试剂盒，其特征在于：所述检测缓冲液按照每100mL、10～20mMTris溶液中含有0.1～1.5wt％PEG、0.1～10wt％S9和0.1～0.5v/v％PC300的进行配制。


4.一种如权利要求1所述的联合检测2019新型冠状病毒IgM和IgG抗体的干式免疫荧光试剂盒的制备方法，其特征在于所述制备方法包括以下步骤：
(1)抗原蛋白组合物稀释液的制备：将抗原包被液与2019新型冠状病毒的N蛋白抗原和S蛋白抗原组合物混合，得到抗原蛋白组合物稀释液；
(2)荧光标记抗体稀释液的制备：将固相液与荧光标记的抗体混合，得到荧光标记抗体稀释液；
(3)喷膜：将荧光标记抗体稀释液、抗原蛋白组合物稀释液和羊抗鼠IgG多抗分别喷...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨帆，杨致亭，姚瀚鑫，杨金红，彭芹，
申请(专利权)人：青岛汉唐生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37