一种免疫组化染色液及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种免疫组化染色液及其应用，免疫组化染色液为含有分开保存的染色A液和染色B液的2液型染色液，染色A液包含二氨基联苯胺、丙二醇、焦亚硫酸钠、Tween‑20和醋酸盐缓冲液，染色B液包含双氧水、金属螯合剂、聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂、木糖和咪唑缓冲液，所述金属螯合剂选自四乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸二钾中任一种。本发明专利技术还提供了上述免疫组化染色液在免疫组化染色中的应用。本发明专利技术的染色液的染色A液和染色B液混合后可在常温下稳定存续23小时以上，且染色时背景着色少，染色效果好，方便使用。

【技术实现步骤摘要】
一种免疫组化染色液及其应用
本专利技术涉及免疫组化
，具体涉及一种免疫组化染色液及其应用。
技术介绍
免疫组化染色是引入附有标记物的外源抗体或抗原，使之锚定于组织或细胞标本中相应的抗原(或抗体)部位，标记物经呈色反应而现实待检抗原或抗体，过氧化物酶是经常使用的一种标记酶，通常使用辣根过氧化物酶，作为辣根过氧化物酶反应的氢供体，日常使用的是显色为茶色的含有二氨基联苯胺(DAB)及过氧化氢的含DAB底物溶液。含DAB底物溶液通常分成两液或三液，即将DAB和过氧化氢分开，避免DAB发生反应，使用时，再将分开保存的两液或三液混合，必须现用现配，并且背景着色深，使用麻烦。
技术实现思路
本专利技术为了解决上述技术问题，提供了一种在常温下可稳定存续时间长，背景着色少的的免疫组化染色液。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：一种免疫组化染色液，其为含有分开保存的染色A液和染色B液的2液型染色液；所述染色A液包含二氨基联苯胺(DAB)、丙二醇、焦亚硫酸钠、Tween-20和醋酸缓冲液；所述染色B液包含双氧水(H2O2)、金属螯合剂、聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂、木糖和咪唑缓冲液，所述金属螯合剂选自四乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸二钾中任一种。在上述技术方案的基础上，本专利技术还可以做如下改进。进一步，所述螯合剂为乙二胺四乙酸二钠(EDTA·2Na)。进一步，所述聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂选自聚氧乙烯月桂基醚(Brij35)、聚氧乙烯鲸蜡基醚(Brij58)、聚氧乙烯硬酯基醚、聚氧乙烯油基醚、聚氧乙烯肉豆蔻基醚、聚氧乙烯辛基十二烷基醚中的任一种。进一步，所述聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂为聚氧乙烯月桂基醚(Brij35)。进一步，所述染色A液中二氨基联苯胺(DAB)、丙二醇、焦亚硫酸钠和Tween-20的浓度分别为45～55mg/mL、75％～85％(v/v)、0.8～1.2mM、0.09％～0.12％(v/v)，余量为醋酸盐缓冲液，所述醋酸盐缓冲液的浓度为0.5～1.5M，pH为5～6。进一步，所述双氧水、乙二胺四乙酸二钠(EDTA·2Na)、聚氧乙烯月桂基醚(Brij35)和木糖的工作浓度分别为0.02％～0.04％(v/v)、1.5～2.5mM、3～4mM和45～55mM，余量为咪唑缓冲液，所述咪唑缓冲液的浓度为0.01～0.05M，pH为7～8。进一步，所述染色液A液与所述染色B液的体积比为1:90～105。本专利技术还提供了上述免疫组化染色液在免疫组化染色中的应用，所述免疫组化染色为使用过氧化物酶标记抗体的免疫组化染色。本专利技术的有益效果是：现有的含有DAB和过氧化氢的染色液为了避免DAB的自氧化反应，使用时将分开保存的溶液混合，混合后无法长时间保存，必须现用现配，而本专利技术的染色液的染色A液和染色B液混合后可在常温下稳定存续23小时以上，且染色时背景着色少，染色效果好，方便使用。附图说明图1为本专利技术试验例1中免疫组化染色液自氧化情况；图2为本专利技术试验例2中免疫组化染色液酶促显色反应结果；图3为本专利技术试验例1和试验例2免疫组化染色液自氧化和酶促显色反应照片图；图4为肺组织细胞表面的α-sma的免疫组化染色照片，放大倍数为200倍；图5为肾组织细胞表面的CK18的免疫组化染色照片，放大倍数为200倍；图6为肾组织细胞表面的CK18的免疫组化染色照片，放大倍数为400倍；图7为胃组织细胞表面的E-cadherin的免疫组化染色照片，放大倍数为200倍。具体实施方式以下结合附图及具体实施例对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。本专利技术提供了一种免疫组化染色液，其为含有分开保存的染色A液和染色B液的2液型染色液，所述染色A液包含二氨基联苯胺(DAB)、丙二醇、焦亚硫酸钠、Tween-20和醋酸盐缓冲液，所述染色B液包含双氧水(H2O2)、金属螯合剂、聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂、木糖和咪唑缓冲液，所述金属螯合剂选自四乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸二钾中任一种。作为优选的，所述螯合剂为乙二胺四乙酸二钠(EDTA·2Na)。作为优选的，所述聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂选自聚氧乙烯月桂基醚(Brij35)、聚氧乙烯鲸蜡基醚(Brij58)、聚氧乙烯硬酯基醚、聚氧乙烯油基醚、聚氧乙烯肉豆蔻基醚、聚氧乙烯辛基十二烷基醚中的任一种。作为优选地，所述聚氧乙烯(POE)烷基醚系非离子表面活性剂为Brij35。作为优选的，所述染色A液中二氨基联苯胺(DAB)、丙二醇、焦亚硫酸钠和Tween-20的浓度分别为45～55mg/mL、75％～85％(v/v)、0.8～1.2mM、0.09％～0.12％(v/v)，余量为醋酸盐缓冲液，所述醋酸盐缓冲液的浓度为0.5～1.5M，pH为5～6。作为优选地，所述双氧水(H2O2)、乙二胺四乙酸二钠(EDTA·2Na)、聚氧乙烯月桂基醚(Brij35)和木糖的浓度分别为0.02％～0.04％(v/v)、1.5～2.5mM、3～4mM和45～55mM，余量为咪唑缓冲液，所述咪唑缓冲液的浓度为0.01～0.05M，pH为7～8。作为优选的，所述染色A液与所述染色B液的体积比为1:90～105。实施例1配制免疫组化染色液1、用醋酸和氢氧化钠配制pH为5.3的醋酸盐缓冲液，醋酸盐的浓度为1M；用咪唑和盐酸配制pH为7.5的咪唑缓冲液，咪唑的浓度为0.02M；2、制备染色A液：取0.19g焦亚硫酸钠溶于1mL醋酸盐缓冲液中，量取150μL醋酸盐缓冲液，加入800μL丙二醇、1μL焦亚硫酸钠溶液、1μLTween-20和50mgDAB，并用醋酸盐缓冲液补足至1mL；3、制备染色B液：取0.672g乙二胺四乙酸二钠溶于10mL咪唑缓冲液中，量取90mL咪唑缓冲液，加入30μL双氧水、0.4gBrij35、1mL乙二胺四乙酸二钠溶液和0.751g木糖，并用咪唑缓冲液补足至100mL。其中Brij35的分子量为1199.56.根据本领域公知常识，四乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸二钾均为常用的监护螯合剂，本实施例优选乙二胺四乙酸二钠，也可选用四乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸或乙二胺四乙酸二钾；常用的聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂包括聚氧乙烯月桂基醚(Brij35)、聚氧乙烯鲸蜡基醚(Brij58)、聚氧乙烯硬酯基醚、聚氧乙烯油基醚、聚氧乙烯肉豆蔻基醚、聚氧乙烯辛基十二烷基醚中，本实施例选用Brij35，相应的也可以选择聚氧乙烯鲸蜡基醚(Brij58)、聚氧乙烯硬酯基醚、聚氧乙烯油基醚、聚氧乙烯肉豆蔻基醚或聚氧乙烯辛基十二烷基醚。染色A液和染色B液分开保存，使用时，将染色A液和染色B液以1:90～105的比例混合。<本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫组化染色液，其特征在于，其为含有分开保存的染色A液和染色B液的2液型染色液；/n所述染色A液包含二氨基联苯胺、丙二醇、焦亚硫酸钠、Tween-20和醋酸盐缓冲液；/n所述染色B液包含双氧水、金属螯合剂、聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂、木糖和咪唑缓冲液，所述金属螯合剂选自四乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸二钾中任一种。/n

【技术特征摘要】
1.一种免疫组化染色液，其特征在于，其为含有分开保存的染色A液和染色B液的2液型染色液；
所述染色A液包含二氨基联苯胺、丙二醇、焦亚硫酸钠、Tween-20和醋酸盐缓冲液；
所述染色B液包含双氧水、金属螯合剂、聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂、木糖和咪唑缓冲液，所述金属螯合剂选自四乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸二钠和乙二胺四乙酸二钾中任一种。


2.根据权利要求1所述的一种免疫组化染色液，其特征在于，所述螯合剂为乙二胺四乙酸二钠。


3.根据权利要求2所述的一种免疫组化染色液，其特征在于，所述聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂选自聚氧乙烯月桂基醚、聚氧乙烯鲸蜡基醚、聚氧乙烯硬酯基醚、聚氧乙烯油基醚、聚氧乙烯肉豆蔻基醚、聚氧乙烯辛基十二烷基醚中的任一种。


4.根据权利要求3所述的一种免疫组化染色液，其特征在于，所述聚氧乙烯烷基醚系非离子表面活性剂为聚氧乙烯月桂基醚。


5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵红洲，
申请(专利权)人：武汉赛维尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42