一种对脑卒中具有保护作用的植物乳杆菌制造技术

本发明专利技术提供一种对脑卒中具有保护作用的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)AR113菌株，植物乳杆菌AR113菌株已在2017年3月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13909。本发明专利技术的植物乳杆菌AR113菌株能够通过提高脑组织的抗氧化酶活性，降低氧化产物水平，激活Nrf‑ARE信号通路，调节抗氧化因子Nrf2、NQO‑1、HO‑1的相对表达量，同时下调促凋亡因子Cyt‑C、Caspase‑3和Bax的mRNA表达，上调抑凋亡因子Bcl‑2的相对表达，进而改善由于脑缺血再灌注引起的脑细胞损伤。

【技术实现步骤摘要】
一种对脑卒中具有保护作用的植物乳杆菌
本专利技术涉及属于微生物
，具体涉及一种对脑卒中具有保护作用的植物乳杆菌。
技术介绍
脑卒中是多种脑血管疾病的严重表现形式，包括出血性和缺血性卒中。在我国，缺血性卒中的发病率要远高于出血性卒中，约占总数的70％。缺血性卒中发生后，尽快恢复患者脑血流是目前救治患者最有效的医疗手段之一。然而，血流再灌注会加剧细胞损伤导致病情的加重，即缺血-再灌注损伤(ischemiareperfusioninjury，I/R)。炎症反应、氧化应激的产生及细胞凋亡是脑缺血再灌注损伤的主要机制，也是卒中后患者神经功能缺损的重要原因。益生菌作为一类对宿主有益的活性微生物，已经广泛用于肠道疾病的辅助治疗。益生菌抗炎、抗氧化、增强免疫和调节微生态等益生功能及其机制已经在各种实验中得到确证，由于菌群-肠-脑轴的存在，应用益生菌来治疗神经系统疾病也得到越来越多的关注，而益生菌对脑缺血再灌注损伤是否有减轻作用及其可能机制值得探讨。体内外实验均已证明本实验室保藏菌株植物乳杆菌AR113具有较强的抗氧化能力，能有效缓解因氧化应激导致的损伤[1,2]，且AR113具有良好的口腔应用基本特性，具备作为口腔益生菌的应用潜力。参考文献[1]LinX,XiaY,WangG,etal.LactobacillusplantarumAR501AlleviatestheOxidativeStressofD-Galactose-InducedAgingMiceLiverbyUpregulationofNrf2-MediatedAntioxidantEnzymeExpression[J].JournalofFoodScience,2018,83(7):1990-1998.[2]LinX,XiaY,WangG,etal.LacticAcidBacteriaWithAntioxidantActivitiesAlleviatingOxidizedOilInducedHepaticInjuryinMice[J].FrontiersinMicrobiology,2018,9:2684.
技术实现思路
本专利技术是为了解决上述问题而进行的，目的在于提供一种对脑卒中具有保护作用的植物乳杆菌。本专利技术提供了一种对脑卒中具有保护作用的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)AR113菌株，具有这样的特征：该植物乳杆菌AR113菌株已在2017年3月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCCNo.13909。本专利技术还提供了利用植物乳杆菌AR113菌株制备对脑卒中具有保护作用的制品中的应用。专利技术的作用与效果本专利技术的植物乳杆菌AR113应用于I/R大鼠口腔内对其舌苔和肠道菌群均有调节作用，并对神经功能缺陷及脑损伤具有一定的保护作用，其主要原因是由于AR113具有优良的抗氧化和抗凋亡活性，AR113口腔应用后，能够调节I/R损伤导致的舌苔菌群失调，并能够维持其肠道菌群的稳态。同时AR113能够减轻I/R损伤导致的神经功能缺陷和脑细胞氧化应激损伤并对细胞凋亡有一定的改善作用。附图说明图1是本专利技术的实施例1中动物实验设计示意图；图2是本专利技术的实施例2中大鼠舌苔菌群属水平组成示意图；图3是本专利技术的实施例2中大鼠舌苔细菌科水平物种丰度聚类图；图4是本专利技术的实施例2中大鼠舌苔菌群非度量多维尺度分析示意图；图5是本专利技术的实施例2中大鼠舌苔菌群组间主要物种差异图；图6是本专利技术的实施例3中大鼠肠道菌群属水平的组成图；图7是本专利技术的实施例3中大鼠肠道细菌属水平主要差异物种分析示意图；图8是本专利技术的实施例3中大鼠肠道菌群非度量多维尺度分析示意图；图9是本专利技术的实施例3中大鼠肠道菌群组间LEfSe分析示意图；图10是本专利技术的实施例4中AR113对I/R大鼠神经功能评分的影响示意图；图11是本专利技术的实施例5中水迷宫实验移动轨迹示意图；图12是本专利技术的实施例6中AR113对I/R大鼠脑梗死体积的影响图；图13是本专利技术的实施例7中脑组织HE染色图；图14是本专利技术的实施例8中AR113对I/R大鼠脑组织中SOD、GSH-Px、CAT酶活性、MDA以及H2O2水平的影响示意图；图15是本专利技术的实施例8中AR113对I/R大鼠脑组织抗氧化相关因子的调节作用示意图；图16是本专利技术的实施例9中AR113对I/R大鼠脑细胞凋亡的影响示意图。具体实施方式为了使本专利技术实现的技术手段与功效易于明白了解，以下结合实施例及附图对本专利技术作具体阐述。以下实施例中所涉及的主要试剂如水合氯醛(TCA)、2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)和4％多聚甲醛购自国药集团化学试剂公司；BCA蛋白检测试剂盒、SOD检测试剂盒、GSH-Px检测试剂盒、CAT检测试剂盒、H2O2检测试剂盒和MDA检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所；Trizol、反转录试剂盒和SYBRGreen试剂盒购自TaKaRa公司。实施例中采用的引物具体DNA序列信息见表1，由上海生工公司合成。细菌多样性由上海美吉生物医药科技有限公司测序。表1荧光定量q-PCR反应扩增引物序列下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明均可从商业途径得到。实施例1：大鼠脑缺血再灌注模型制作和实验分组大鼠脑缺血再灌注模型制作：所有大鼠术前12h禁食但不禁水，称重后腹腔注射10％水合氯醛(质量浓度)进行麻醉(3.5mL/kg)，仰卧位固定，颈正中线切口，沿胸锁乳突肌内缘分离肌肉和筋膜，分离左侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)，在CCA远心端和近心端及ECA处挂线备用。用微动脉夹暂时夹闭ICA，然后近心端结扎CCA、ECA，接着在距CCA分叉部4mm处剪一小口，将栓线插入到ICA，这时用绕在CCA远心端的细线轻轻系牢栓线，于缺血2h后缓慢将栓线拔出行再灌注制备脑缺血再灌注模型。图1是本专利技术的实施例1中动物实验设计示意图。将27只实验大鼠适应性饲养一周后随机分为3组，每组9只，实验设计如图1所示。假手术组(Sham组)：仅分离颈部血管，不进行栓线步骤，且实验期间每天口腔喷雾0.01MPBS溶液1ml，连续14天。缺血再灌注组(I/R组)：在时间点②即第7天利用大脑中动脉栓塞法制备缺血再灌注模型，且实验期间每天口腔喷雾0.01MPBS溶液1ml，连续14天。植物乳杆菌AR113干预组(AR113组)：造模前一周(时间段①)每天口腔喷雾AR113菌悬液(109CFU/ml)1ml，造模后给予AR113连续一周同①。实施例2：植物乳杆菌AR113对I/R大鼠舌苔微生物群的结构调节通过16SrDNA高通量测序本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对脑卒中具有保护作用的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)AR113菌株，其特征在于：所述植物乳杆菌AR113菌株已在2017年3月22日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.13909。/n

【技术特征摘要】
1.一种对脑卒中具有保护作用的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)AR113菌株，其特征在于：所述植物乳杆菌AR113菌株已在2017年3月22日保藏于中国微生物...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾连中，熊智强，夏永军，王光强，张汇，赖凤羲，宋馨，
申请(专利权)人：上海理工大学，
类型：发明
国别省市：上海;31