用于治疗炎症性肠病的药物制造技术

本发明专利技术属于免疫治疗技术领域，公开了一种用于治疗炎症性肠病的药物，所述药物包括CD4‑CD8‑双阴性的T细胞。通过构建炎症性肠病的小鼠模型，然后抽取自体外周血，分离出DN T细胞，体外扩增培养后，再静脉注射回输给自体，能够达到缓解治疗肠道炎症的目的。本发明专利技术首次利用DN T细胞及其免疫治疗方法可以实现对炎症性肠病的免疫治疗，其方法具有减轻肠道炎症等优点，适于炎症性肠病的综合治疗，适用于临床推广应用。

【技术实现步骤摘要】
用于治疗炎症性肠病的药物
本专利技术具体涉及免疫治疗
，更具体的，涉及用于治疗炎症性肠病的药物。
技术介绍
炎症性肠病（inflammatoryboweldisease，IBD）属于自身免疫性疾病，是一种发生在肠道的，要终生治疗并且不可治愈的慢性特发性疾病，具有频繁复发和缓解的临床特点。近十年来，IBD在我国就诊人数呈逐步增加趋势，将成为我国消化系统常见病。IBD的常规药物疗法，例如抗炎剂、糖皮质激素和免疫抑制剂由于其在长期治疗期间的全身不良反应和毒性而受到限制。细胞治疗是通过体外激活、扩增自体或异体的免疫效应细胞，再回输给患者，起到杀伤目标细胞和提高患者免疫功能等作用。细胞免疫治疗是未来炎症性肠病综合治疗的重要组成部分。现有技术还没有关于治疗炎症性肠病的细胞免疫治疗方法。
技术实现思路
针对上述现有技术存在的缺陷，本专利技术的主要目的是提供一种用于治疗炎症性肠病的药物。本专利技术的目的通过以下技术方案实现：一种用于治疗炎症性肠病的药物，所述药物包括CD4-CD8-双阴性的T细胞。优选的，所述CD4-CD8-双阴性的T细胞为CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞（简称为DNT细胞）。本专利技术首先通过构建炎症性肠病的小鼠模型，然后抽取自体外周血，分离出DNT细胞，体外扩增培养后，再静脉注射回输给自体，能够达到缓解治疗肠道炎症的目的。优选的，所述CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞来自外周血。优选的，所述外周血为自体外周血。当然，与自体血型匹配的受试者的外周血也是可以的。优选的，所述自体外周血的CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞通过流式分选方法获得，同时经过体外扩增培养。更优选的，所述体外扩增培养过程中加入白介素-2，能够刺激体DNT细胞的扩增；所述白介素-2的浓度为20ng/mL。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术通过构建炎症性肠病的小鼠模型，然后抽取自体外周血，分离出DNT细胞，体外扩增培养后，再静脉注射回输给自体，能够达到缓解治疗肠道炎症的目的。本专利技术首次利用DNT细胞及其免疫治疗方法可以实现对炎症性肠病的免疫治疗，其方法具有减轻肠道炎症等优点，适于炎症性肠病的综合治疗，适用于临床推广应用。附图说明图1为输入DNT细胞受体肠道病理切片；图2为输入DNT细胞受体小鼠体重下降情况，其中DNT组即为回输组；图3为输入受体小鼠的供体DNT细胞分泌情况；其中，PMA+Ion+BFA组代表小鼠DNT细胞体外刺激组，PMA为佛波酯，PMA和Ionomycin的共同作用可以起到激活细胞的作用。BFA为蛋白转运抑制剂，阻止高尔基体将新分泌蛋白运输到细胞外，从而达到通过流式来检测细胞因子的目的；unstimulated代表未加刺激组。具体实施方式为了对本专利技术的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现对照附图详细说明本专利技术的具体实施方式。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施例1以小鼠为模型建立用于免疫治疗炎症性肠病的DNT细胞的方法一、IBD小鼠模型的建立过程使用葡聚糖硫酸钠（dextransulfatesodium，DSS）诱导小鼠结肠炎模型，给小鼠饮用含3%（w/v）DSS水持续7天，再改用正常水饮用1天，构建小鼠结肠炎模型。每日检测小鼠体重及疾病活动度指数（DAI），用来评价小鼠结肠炎严重程度。DAI评分包括大便性状，直肠出血情况等。二、向建立的小鼠模型中回输DNT细胞用于免疫治疗炎症性肠病的DNT细胞的方法用到以下成分：（1）T细胞的特异性荧光抗体；（2）培养基（10%胎牛血清的1640培养基）；（3）白介素-2（20ng/ml）。具体包括如下步骤：S1.抽取供体小鼠的外周血20ml，采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞；S2.染色标记CD3+CD4-CD8-T细胞（简称为DNT细胞）；S3.流式分选仪分选纯化DNT细胞；S4.加入培养基和白介素-2（20ng/ml）体外培养14天，每隔3天换一次培养基和白介素-2；S5.生理盐水洗涤细胞3次，静脉注射至受体（IBD小鼠模型）体内。S6.疗效判定：以不注射细胞、向受体内注射PBS为对照，检测受体肠道病理情况和体重下降情况。小鼠肠道病理切片的结果如图1，从图1中可以看出，与输入PBS组相比，回输组的肠道病理情况得到了明显改善。小鼠体重下降情况的结果如图2，图2的左图为小鼠肠道长度统计结果，图2的右图为小鼠的体重统计结果，从图2可以看出，与输入PBS组相比，DNT组（即回输组）小鼠的体重下降缓解，且肠道长度较长。流式细胞分选结果如图3，从图3可以看出，小鼠肠道中来自供体小鼠的DNT细胞可分泌细胞因子IL-4保护肠道。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述药物包括CD4-CD8-双阴性的T细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述药物包括CD4-CD8-双阴性的T细胞。


2.根据权利要求1所述的用于治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述CD4-CD8-双阴性的T细胞为CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞。


3.根据权利要求2所述的用于治疗炎症性肠病的药物，其特征在于，所述CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞来自外周血。

【专利技术属性】
技术研发人员：黄曦，王子晴，洪海，吴永坚，
申请(专利权)人：中山大学附属第五医院，
类型：发明
国别省市：广东;44