一种可气溶胶化的鼠疫F1干粉吸入剂制造技术

本发明专利技术公开了一种可气溶胶化的鼠疫F1干粉吸入剂。本发明专利技术保护一种干粉制剂，原料组成以及配比如下：F1蛋白0.08‑0.12g：CpG 0.08‑0.12g：甘露醇0.8‑1.2g：肌醇0.8‑1.2g：亮氨酸0.4‑0.6g：泊洛沙姆0.04‑0.06ml。本发明专利技术还保护一种干粉制剂的制备方法，包括如下步骤：将溶液SY3进行喷雾冷冻干燥，得到干粉制剂；溶液SY3中，含有F1蛋白0.08‑0.12g/100ml、CpG 0.08‑0.12g/100ml、甘露醇0.8‑1.2g/100ml、肌醇0.8‑1.2g/100ml、亮氨酸0.4‑0.6g/100ml、泊洛沙姆0.04‑0.06％。本发明专利技术中制备得到的干粉制剂具有良好的稳定性，能常温保存，不依赖冷链运输，较液体疫苗节省了运输成本，可以抵抗鼠疫菌侵入小鼠脾肺，对小鼠有免疫保护作用。

An air soluble gelling plague F1 dry powder inhaler

【技术实现步骤摘要】
一种可气溶胶化的鼠疫F1干粉吸入剂
本专利技术涉及一种可气溶胶化的鼠疫F1干粉吸入剂。
技术介绍
根据世界卫生组织提供的数据，世界鼠疫疫情呈上升趋势，在2000年世界卫生组织将鼠疫列为重新抬头的传染病。由于鼠疫耶尔森氏菌可以通过气溶胶途径感染人体，而且鼠疫作为一种烈性传染病，具有传播快、病死率高等特点，鼠疫耶尔森氏菌已被美军列为标准的生物战剂和生物恐怖剂。有效的疫苗是阻断疾病传播的最有效的方式，为了更好的保障人民的生命安全，加强对鼠疫的诊断、预防与治疗具有重大的意义。其中，研制一种安全有效的疫苗是鼠疫防治工作的重点与方向。F1抗原由鼠疫耶尔森氏菌的pMT1质粒上的F1操纵子编码，以多聚体的形式在细胞表面形成荚膜，F1抗体通过阻断F1蛋白的抗吞噬作用从而发挥免疫保护作用。为了达到有效预防肺鼠疫的目的,一般认为疫苗必须经粘膜途径免疫才更有效，但是单纯将疫苗接种到粘膜表面效果并不理想。目前国内外均还未有有效针对鼠疫的肺吸入免疫疫苗。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种可气溶胶化的鼠疫F1干粉吸入剂。本专利技术保护干粉制剂(干粉制剂甲)，原料组成为：F1蛋白、CpG、甘露醇、肌醇、亮氨酸和泊洛沙姆。本专利技术还保护一种干粉制剂(干粉制剂乙)，原料组成以及配比如下：F1蛋白0.08-0.12g：CpG0.08-0.12g：甘露醇0.8-1.2g：肌醇0.8-1.2g：亮氨酸0.4-0.6g：泊洛沙姆0.04-0.06ml。本专利技术还保护一种干粉制剂(干粉制剂丙)，原料组成以及配比如下：F1蛋白0.1g：CpG0.1g：甘露醇1g：肌醇1g：亮氨酸0.5g：泊洛沙姆0.05ml。本专利技术还保护一种干粉制剂的制备方法(方法甲)，包括如下步骤：将溶液SY3进行喷雾冷冻干燥，得到干粉制剂；溶液SY3中，含有F1蛋白、CpG、甘露醇、肌醇、亮氨酸和泊洛沙姆。本专利技术还保护一种干粉制剂的制备方法(方法乙)，包括如下步骤：将溶液SY3进行喷雾冷冻干燥，得到干粉制剂；溶液SY3中，含有F1蛋白0.08-0.12g/100ml、CpG0.08-0.12g/100ml、甘露醇0.8-1.2g/100ml、肌醇0.8-1.2g/100ml、亮氨酸0.4-0.6g/100ml、泊洛沙姆0.04-0.06％(体积百分含量)。本专利技术还保护一种干粉制剂的制备方法(方法丙)，包括如下步骤：将溶液SY3进行喷雾冷冻干燥，得到干粉制剂；溶液SY3中，含有F1蛋白0.1g/100ml、CpG0.1g/100ml、甘露醇1g/100ml、肌醇1g/100ml、亮氨酸0.5g/100ml、泊洛沙姆0.05％(体积百分含量)。以上任一所述溶液SY3中，余量为去离子水。以上任一所述溶液SY3中，余量为灭活核酸酶的去离子水。以上任一所述溶液SY3的pH值为7.2。以上任一所述溶液SY3用1M氢氧化钠溶液调pH值至7.2。以上任一所述喷雾冷冻干燥的方法具体可为：冰浴预冷2小时后的溶液SY3通过二流体喷头的进口直接喷雾至冷介质(例如液氮)中，将冰晶进行真空冷冻干燥。以上任一所述喷雾冷冻干燥的方法具体可为：将溶液SY3冰浴预冷2小时，然后取20ml转入注射器中，注射器出口连接二流体喷头的进口，直接喷雾至液氮中(不锈钢盆中装有3/4体积的液氮，置于磁力搅拌器上进行搅拌；如有需要，喷雾中途添加液氮；喷头离液氮液面≈10cm，设置气泵气压0.15兆帕)，喷出来的雾化液滴，在液氮作用下迅速冷冻成冰晶；将冰晶连同少量剩余液氮转移至不锈刚杯中，开口处封上一层纱布，置于真空冷冻干燥机中干燥36h以上。本专利技术还保护以上任一所述方法制备得到的干粉制剂。本专利技术还保护以上任一所述干粉制剂在制备鼠疫疫苗中的应用。本专利技术还保护一种鼠疫疫苗，其活性成分为以上任一所述干粉制剂。以上任一所述疫苗可为治疗疫苗或预防疫苗。以上任一所述干粉制剂为可气溶胶化的鼠疫F1干粉吸入剂。本专利技术中制备得到的干粉制剂，粒径中值(空气动力学)为2.72-2.88μm，粒子呈圆球状，形态疏松多孔，粒径分布较均匀。干粉制剂有利于疫苗沉积到肺深部，可以增加抗原与粘膜组织接触反应的时间，有助于提高免疫保护效果。本专利技术中制备得到的干粉制剂没有降低F1蛋白的保护效果，对鼠疫耶尔森氏菌攻毒的动物具有明显的保护效果。本专利技术中制备得到的干粉制剂免疫动物，抗体滴度产生持续时间长达三个月，成功地激发了小鼠的粘膜免疫应答。本专利技术中制备得到的干粉制剂，肺局部的黏附力较好，从而延缓了黏膜对其的清除速度，增加了抗原递呈的时间。本专利技术中制备得到的干粉制剂具有良好的稳定性，能常温保存，不依赖冷链运输，较液体疫苗节省了运输成本，且能保持更好的活性。本专利技术中制备得到的干粉制剂可以抵抗鼠疫菌侵入小鼠脾肺，对小鼠有免疫保护作用。本专利技术为鼠疫干粉疫苗的研发可行性提供了支持。本专利技术对于鼠疫的防控具有重大的应用价值。附图说明图1为干粉制剂SY3的吸湿曲线。图2为干粉制剂SY2和干粉制剂SY3的电镜图。图3为动物试验的生存曲线。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。6-8周龄SPF级BALB/c雌性小鼠：北京维通利华实验动物技术有限公司。F1蛋白如序列表的序列1所示。F1蛋白干粉即干粉状态的F1蛋白。CpG，全称为ClassBCpGoligonucleotide(B类CpG寡核苷酸)，具有免疫激活功能，是针对人或小鼠TLR9的免疫刺激剂，是一种典型的黏膜免疫佐剂。实施例中所用的CpG，为sigma公司产品目录号为tlrl-2006的产品，该产品的网址链接为：https://www.invivogen.com/odn2006。甘露醇：Sigma公司，货号为M1902。肌醇：Sigma公司，货号为I7508。亮氨酸(L-亮氨酸)：Sigma公司，货号为L8912。泊洛沙姆(PluronicF-68浓度为10g/100mL的F-68溶液)：Sigma公司，货号为P5556。HRP标记的山羊抗鼠IgG、HRP标记的山羊抗鼠IgG1、HRP标记的山羊抗鼠Ig2a、HRP标记的山羊抗鼠IgA、HRP标记的山羊抗鼠IgM均为abcam公司产品。鼠疫耶尔森氏菌91001全称为鼠疫耶尔森氏菌布氏田鼠疫源地菌株91001，记载于如下文献：宋亚军,鼠疫耶尔森氏菌布氏田鼠疫源地菌株91001全基因组序列测定及初步分析.2003,博士学位论文。手持式液体气溶胶肺递送装置：北京慧荣和科技有限公司的肺部液体定量雾化器。手持式干粉气溶胶肺递送装置：北京慧荣和科技有限公司的肺部干粉本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种干粉制剂，原料组成为：F1蛋白、CpG、甘露醇、肌醇、亮氨酸和泊洛沙姆。/n

【技术特征摘要】
1.一种干粉制剂，原料组成为：F1蛋白、CpG、甘露醇、肌醇、亮氨酸和泊洛沙姆。


2.一种干粉制剂，原料组成以及配比如下：
F1蛋白0.08-0.12g：CpG0.08-0.12g：甘露醇0.8-1.2g：肌醇0.8-1.2g：亮氨酸0.4-0.6g：泊洛沙姆0.04-0.06ml。


3.一种干粉制剂，原料组成以及配比如下：
F1蛋白0.1g：CpG0.1g：甘露醇1g：肌醇1g：亮氨酸0.5g：泊洛沙姆0.05ml。


4.一种干粉制剂的制备方法，包括如下步骤：
将溶液SY3进行喷雾冷冻干燥，得到干粉制剂；
溶液SY3中，含有F1蛋白、CpG、甘露醇、肌醇、亮氨酸和泊洛沙姆。


5.一种干粉制剂的制备方法，包括如下步骤：
将溶液SY3进行喷雾冷冻干燥，得到干粉制剂；...

【专利技术属性】
技术研发人员：李璐，杨文慧，周冬生，孙岩松，邱业峰，高波，法云智，王效义，杨慧盈，赵月娥，于学东，胡凌飞，熊小路，焦俊，殷喆，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11