本发明专利技术提供了分离的重组溶瘤腺病毒、药物组合物及其在治疗肿瘤和/或癌症的药物中的用途。所述重组溶瘤腺病毒为选择复制型溶瘤腺病毒，并且该重组溶瘤腺病毒的基因组中整合有能够在肿瘤细胞中抑制PDL1表达的外源shRNA的编码序列。该病毒在正常原代细胞中的复制能力远远低于其在肿瘤细胞中的复制能力，并且所表达的shPDL1能够显著降低肿瘤细胞内高表达的PDL1蛋白水平，从而使溶瘤病毒的溶瘤杀伤作用和免疫细胞的抗肿瘤免疫刺激作用产生协同效果。
Isolated recombinant oncolytic adenovirus, pharmaceutical composition and their use in the treatment of tumor and / or cancer drugs
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】分离的重组溶瘤腺病毒、药物组合物及其在治疗肿瘤和/或癌症的药物中的用途
本专利技术属于生物
，具体而言，涉及分离的重组溶瘤腺病毒、药物组合物及其在治疗肿瘤和/或癌症的药物中的用途。
技术介绍
根据2013年1月世界卫生组织网站公布的人口死亡病因最新报告，2008年全世界约有760万人死于癌症，占全世界死亡总数的13％，而且这个数字每年还在迅猛增长，预计到2030年，这个数字将超过1310万。在我国，恶性肿瘤发病率正以年均3％～5％的速度递增，2002年全国每年恶性肿瘤新发病例达219万，到2020年，每年新发病人数量将会超过300万人。癌症已经成为世界上的头号死因之一。而且肿瘤的治疗已经成为当今医学领域的重点和难点，也越来越受到人们的重视。肿瘤发生(Tumorigenesis)是一个多因素和多步骤的过程，主要为细胞受到外界致癌因子(包括物理辐射、化学物质和病毒等)的刺激，细胞受到损伤导致细胞内部DNA等遗传物质发生改变，进而引起细胞内部信号转导通路的异常与紊乱，细胞表现为疯狂增殖、抵抗凋亡、停止分化和具备侵袭组织与迁移的能力，最终影响人体重要脏器功能危及生命。目前肿瘤的主要治疗方式包括手术治疗、放射治疗、化学治疗、生物治疗和免疫治疗等。虽然这些治疗手段在一定程度上有助于肿瘤的控制，但还是不能从根本上解决问题。溶瘤病毒疗法也属于生物治疗的范畴，溶瘤病毒的研究最早可以追溯到上个世纪五十年代。当时发现一名宫颈癌患者在感染狂犬病病毒后肿瘤随之消退。受某些肿瘤患者在感染病毒后出现自发性肿瘤缓解这一现象的启发，第一波溶瘤病毒研究热潮自此开始。溶瘤病毒是指感染肿瘤细胞后能够选择性地在靶细胞内复制，最终导致肿瘤细胞裂解和死亡的一类病毒。这类病毒依靠其本身的特异性在肿瘤细胞中复制来裂解肿瘤细胞，细胞裂解后释放出来的病毒又可以进一步感染周围的肿瘤细胞，同时对正常细胞和组织则没有破坏作用，或影响较小。溶瘤病毒一般分为二类：一类为野生型病毒和自然变异的弱毒病毒株，这类病毒天然就对某些肿瘤细胞有亲和力，如呼肠孤病毒、新城疫病毒以及自主复制的细小病毒等，这些病毒能够在某些肿瘤细胞中繁殖并裂解细胞，具有天然的特异性溶瘤活性；另一类是对病毒基因组进行改造后，只能在肿瘤细胞内复制的病毒。目前人们已经通过基因工程方法改造了腺病毒、单纯疱疹病毒、流感病毒和人牛痘病毒等。其中腺病毒是溶瘤病毒研究开展相对较早溶瘤机理研究相对较为清楚的，腺病毒中又以5型腺病毒研究得更为清楚。腺病毒发现后不久曾被用来治疗头颈部恶性肿瘤，注射腺病毒后肿瘤有不同程度缩小，但治疗后肿瘤易复发，效果难以持久；直到1996年，Bischoff等首次报道去除部分E1B的重组腺病毒Onyx-015能在p53异常的肿瘤细胞选择性复制引起肿瘤杀伤作用，溶瘤腺病毒研究才再次受到广泛关注并且发展迅速，因此出现了许多新型溶瘤腺病毒种类。我国在2006年就批准上市了上海三维生物技术有限公司研发的一种具有溶瘤作用的重组人5型腺病毒H101(一种删除了E1B55K和E3基因的溶瘤腺病毒)(NDA号为：国药准字S20060027)，可以实现在p53突变型的肿瘤细胞中特异性复制并溶解肿瘤细胞。溶瘤腺病毒日益成为恶性肿瘤治疗的一种新手段。除此之外，在与肿瘤的斗争过程中肿瘤免疫治疗也是一种非常重要的手段。它主要包括抗体疗法、T细胞疗法和肿瘤疫苗等。抗体被称为癌症的新靶分子“药物”，可通过打靶肿瘤周围的免疫细胞辅助激活效应细胞，促进更有效的抗肿瘤免疫；也可通过补体依赖细胞毒导致肿瘤细胞的杀伤，或通过诱导肿瘤细胞凋亡。T细胞疗法是通过静脉给药，把体外扩增的肿瘤特异性自体T细胞(例如：CAR-T)注入体内的一种疗法。肿瘤疫苗治疗是通过调动机体的免疫系统产生特异性抗体及效应性T细胞的方法，称为主动特异性免疫治疗。大量的临床实验证明肿瘤免疫治疗在治疗肿瘤的过程中发挥了非常积极的作用，但是肿瘤免疫治疗过程中的最大问题还是肿瘤逃逸。肿瘤的免疫逃逸机制与机体对肿瘤的免疫应答之间存在着极为复杂的关系。肿瘤免疫治疗的过程中早期肿瘤特异性的CD8+T细胞是激活的，随着肿瘤生长到后期失去了杀伤的功能。通常T细胞的活化除了需要通过APC递呈MHC-抗原肽给抗原特异性T细胞提供第一信号外，还需要一系列协同刺激分子提供第二信号，进而才能使T细胞达到生理活化阈值产生正常的免疫应答。如果缺少共刺激分子提供的第二信号，将会导致T细胞的无反应性或特异性免疫耐受甚至进入凋亡。因此，正性和负性协同刺激信号的调节及两者之间的平衡在机体免疫应答的整个过程中起着重要的调节作用。目前在肿瘤和/或癌症的免疫治疗中，仍然需要更加有效的治疗方案和由此开发出的药物。
技术实现思路
为解决上述现有技术中所存在的问题，本专利技术提供了分离的重组溶瘤腺病毒、药物组合物及其在治疗肿瘤和/或癌症的药物中的应用。具体而言，本专利技术提供了：(1)一种分离的重组溶瘤腺病毒，其中该重组溶瘤腺病毒为选择复制型溶瘤腺病毒，并且该重组溶瘤腺病毒的基因组中整合有能够在肿瘤细胞中抑制PDL1表达的外源shRNA的编码序列。(2)根据(1)所述的重组溶瘤腺病毒，其中所述外源shRNA的编码序列如SEQ ID NOs.16、19和22中的任一者所示。(3)根据(1)所述的重组溶瘤腺病毒，其中该重组溶瘤腺病毒的基因组中缺失了E1B19K基因、E1B55K基因、和全部E3区基因。(4)根据(1)或(3)所述的重组溶瘤腺病毒，其中所述重组溶瘤腺病毒的基因组中包含E1A基因编码序列；优选的是，所述E1A基因编码序列是在CMV启动子控制下的。(5)根据(1)所述的重组溶瘤腺病毒，其中所述重组溶瘤腺病毒是对5型腺病毒进行基因改造而得到的。(6)一种药物组合物，其中该药物组合物包括作为活性成分的根据(1)-(5)中任一项所述的重组溶瘤腺病毒，及可药用辅料。(7)根据(6)所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含5×107-5×1012vp/天剂量的所述重组溶瘤腺病毒。(8)根据(6)所述的药物组合物，其中所述重组溶瘤腺病毒配制成通过瘤内注射给药或静脉给药。(9)一种用于制备(1)-(5)中任一项所述的重组溶瘤腺病毒的载体，其中所述载体包含在启动子控制下的外源shRNA编码序列，该shRNA编码序列如SEQ ID NOs.16、19和22中的任一者所示。(10)根据(9)所述的载体，其中所述载体采用pShuttle作为基本骨架，并且在该基本骨架中依次包含可操作地连接的、控制所述外源shRNA编码序列表达的启动子、所述外源shRNA编码序列、控制所述E1A基因编码序列表达的启动子、和所述E1A基因编码序列。(11)一种含有(9)或(10)所述的载体的宿主细胞。(12)根据(11)所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞稳定表达所述载体。(13)一种分离的shRNA，其中该shRNA的编码序列如SEQ ID NOs.16、19和22中的任一者所示，并且该shRNA能够在肿瘤细胞中抑制PDL1的表达本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的重组溶瘤腺病毒，其中该重组溶瘤腺病毒为选择复制型溶瘤腺病毒，并且该重组溶瘤腺病毒的基因组中整合有能够在肿瘤细胞中抑制PDL1表达的外源shRNA的编码序列。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170928 CN 2017108992916一种分离的重组溶瘤腺病毒，其中该重组溶瘤腺病毒为选择复制型溶瘤腺病毒，并且该重组溶瘤腺病毒的基因组中整合有能够在肿瘤细胞中抑制PDL1表达的外源shRNA的编码序列。
根据权利要求1所述的重组溶瘤腺病毒，其中所述外源shRNA的编码序列如SEQ ID NOs.16、19和22中的任一者所示。
根据权利要求1所述的重组溶瘤腺病毒，其中该重组溶瘤腺病毒的基因组中缺失了E1B19K基因、E1B55K基因和全部E3区基因。
根据权利要求1或3所述的重组溶瘤腺病毒，其中所述重组溶瘤腺病毒的基因组中包含E1A基因编码序列；优选的是，所述E1A基因编码序列是在CMV启动子控制下的。
根据权利要求1所述的重组溶瘤腺病毒，其中所述重组溶瘤腺病毒是对5型腺病毒进行基因改造而得到的。
一种药物组合物，其中该药物组合物包括作为活性成分的根据权利要求1-5中任一项所述的重组溶瘤腺病毒，及可药用辅料。
根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含5×10
7-5×10
12vp/天剂量的所述重组溶瘤腺病毒。
根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述重组溶瘤腺病毒配制成通过瘤内注射给药或静脉给药。
一种用于制备权利要求1-5中任一项所述的重组溶瘤腺病毒的载体，其中所述载体包含在启动子控制下的外源shRNA编码序列，该shRNA编码序列如SEQ ID NOs.16、19和22中的任一者所示。
根据权利要求9所述的载体，其中所述载体采用pShuttle作为基本骨架，并且在该基本骨架中依次包含可操作地连接的、控制所述外源shRNA编码序列表达的启动子、所述外源shRNA编码序列、控制所...
【专利技术属性】
技术研发人员：绳纪坡，傅瑾，赵荣华，秦云，陈霖，康三毛，胡放，
申请(专利权)人：杭州康万达医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33
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