一种定量检测人抑制素b的化学发光试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及免疫分析技术领域，提供了一种定量检测人抑制素b的化学发光试剂盒，包括：包被人抑制素b抗体的化学发光板，样本反应液，生物素标记的人抑制素b抗体，链霉亲和素标记酶底物，酶促发光底物。

A chemiluminescence kit for quantitative detection of human inhibin B and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种定量检测人抑制素b的化学发光试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及免疫分析
，具体更涉及一种定量检测人抑制素b的化学发光试剂盒及其制备方法和使用方法。
技术介绍
抑制素b(InhibinB)是由生殖系统细胞分泌产生，与生殖能力有密切关系，对生殖功能具有内分泌、旁分泌和自分泌的调节作用。抑制素b是睾丸来源的糖蛋白激素，成年男性体内血清抑制素b水平与FSH呈显著负相关，对FSH起负反馈作用。男性出生后不久，血清抑制素b水平逐渐上升，于青春期Ⅱ期达到成年人水平，从青春期Ⅲ期至成年，抑制素b与FSH之间一直维持负相关关系。20-30岁时，抑制素b水平到达另一个高峰，此后抑制素b水平随年龄增加逐渐降低。生精功能低下与生精阻滞男性血清抑制素b水平显著低于正常生精功能男性，唯支持细胞综合征(SCO)男性血清抑制素b水平极低，SCO的发生与血清抑制素b的水平显著相关，血清抑制素b的水平还与睾丸体积、精子总数显著相关。抑制素b水平反映了整个睾丸组织的功能，是输精管道的直接产物，成年男性血清中维持可检测的抑制素b水平需要生精细胞的存在，因此抑制素b被认为是男性精子发生的血清标志物。但是现有的关于试剂盒的检测方法，依然存在检测灵敏度和准确度比较低的问题，以及对设备和取样具有非常高的要求，无法做到大通量的检测。
技术实现思路
为了解决上述的技术问题，本专利技术中的第一个方面提供了一种定量检测人抑制素b的化学发光试剂盒，包括：包被人抑制素b抗体的化学发光板，样本反应液，生物素标记的人抑制素b抗体，链霉亲和素标记酶底物，酶促发光底物。作为一种优选的技术方案，本专利技术中所述化学发光板中包被人抑制素b抗体的浓度为1-5ug/mL。作为一种优选的技术方案，本专利技术中所述样本反应液包括葡聚糖、磷酸盐缓冲液、tris缓冲液成分中的至少一种。作为一种优选的技术方案，本专利技术中所述生物素标记的人抑制素b抗体的缓冲液包括Tris盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、蛋白保护剂中的至少一种。作为一种优选的技术方案，本专利技术中所述链霉亲和素标记酶底物包括磷酸盐缓冲液、蛋白保护剂中的至少一种。作为一种优选的技术方案，本专利技术中所述蛋白保护剂包括酪蛋白、牛血清白蛋白、明胶、动物血清、人血清中的至少一种。作为一种优选的技术方案，本专利技术中所述酶底物包括辣根过氧化氢酶、碱性磷酸酶中的至少一种。作为一种优选的技术方案，本专利技术中所述酶促发光底物为辣根过氧化物酶酶促发光底物和/或碱性磷酸酶的酶促发光底物。本专利技术的第二个方面提供了一种所述的化学发光试剂盒的制备方法，步骤至少包括：(1)制备包被人抑制素b抗体的化学发光板；(2)配置生物素标记的人抑制素b抗体的抗体工作液：首先制备生物素标记的人抑制素b抗体，稀释液稀释，稀释比例为1：500-1：5000；(3)配置链霉亲和素标记酶底物工作液：将链霉亲和素标记酶底物进行稀释液稀释，稀释比例为1：500-1：5000；(4)人抑制素b标准品制备：稀释浓度梯度为：0ng/ml、0.0312ng/ml、0.0625ng/ml、0.125ng/ml、0.25ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml，用于制作检测标准曲线；(5)工作洗涤液的配置：0.01MPBST溶液，配制1L的洗涤液：二水磷酸二氢钠、十二水磷酸氢二钠、氯化钠、Tween20；使用时利用超纯水15-25倍稀释，即可。本专利技术的第三个方面提供了一种所述的化学发光试剂盒的使用方法，步骤至少包括：S1：将人抑制素b标准品稀释成不同浓度梯度的标准品，并加入至包被人抑制素b抗体的化学发光板中，100ul/孔，做好标示；S2：按照100ul/孔取标准品梯度浓度和血清/血浆样本，加入对应板孔，做好标示；S3：按照50ul/孔在标准品孔和样品孔中，皆加入样本反应液；S4：35-45℃孵育0.5-2.5h，取出，每孔250ul洗涤工作液，洗涤2-6次，拍干；S5：配置生物素标记的人抑制素b抗体的抗体工作液，取抗体工作液按照100ul/孔加入对应板孔；35-45℃孵育0.5-2.5hh，取出，每孔250ul洗涤工作液，洗涤2-6次，拍干；S6：配置链霉亲和素标记酶底物的工作液，取链霉亲和素标记酶底物的工作液按照50ul/孔加入对应反应孔；50ul/孔，放置35-45℃反应20-40min；取出发光板，每孔250ul洗涤工作液，洗涤2-6次，拍干；S7：在每孔加入50ul酶发光底物，读取发光值；S8：制作标准曲线，计算出待测样本的浓度值。与现有技术相比，本专利技术具有如下优异的有益效果：本专利技术提供了一种定量检测人抑制素b的化学发光试剂盒，本专利技术的优点在于采用酶促化学发光法，将人抑制素b(InhibinB)单克隆抗体或人抑制素b(InhibinB)多克隆抗体包被于化学发光板中，利用酶促催化发光底物，并利用生物素放大系统，提高了试剂盒的灵敏度和准确性；实验证明，化学发光法配合生物素放大系统是一种检测人抑制素b(InhibinB)的有效方法。化学发光法配合生物素放大系统检测系统，对样本种人抑制素b(InhibinB)做出很好的结果判断；相比于市场上人抑制素b(InhibinB)酶联免疫分析法(ELISA)检测试剂盒，检测灵敏度更高，特异性更强；且因本专利技术试剂盒无需做血样处理，操作简便，对于所需设备也无很高要求，可实现大通量检测，免疫诊断部分可实现半自动化或全自动化批量操作。附图说明图1为实施例1中所绘制的标准曲线，回归方程为y＝610052x+4883.9，R2＝0.9993。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术提供技术方案中的技术特征作进一步清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本
技术人员可以理解，除非另外定义，这里使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)具有与本专利技术所属领域中的普通技术人员的一般理解相同的意义。还应该理解的是，诸如通用字典中定义的那些术语应该被理解为具有与现有技术的上下文中的意义一致的意义，并且除非像这里一样定义，不会用理想化或过于正式的含义来解释。本专利技术中的词语“优选的”、“优选地”、“更优选的”等是指，在某些情况下可提供某些有益效果的本专利技术实施方案。然而，在相同的情况下或其他情况下，其他实施方案也可能是优选的。此外，对一个或多个优选实施方案的表述并不暗示其他实施方案不可用，也并非旨在将其他实施方案排除在本专利技术的范围之外。本专利技术提供了一种定量检测人抑制素b的化学发光试剂盒，包括：包被人抑制素b抗体的化学发光板，样本反应液，生物素标记的人抑制素b抗体，链霉亲和素标记酶底物，酶促发光底物。包被人抑制素b抗体的化学发光板的制备在本专利技术中，所述包被人抑制素b抗体的化学发光板为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种定量检测人抑制素b的化学发光试剂盒，其特征在于，包括：包被人抑制素b抗体的化学发光板，样本反应液，生物素标记的人抑制素b抗体，链霉亲和素标记酶底物，酶促发光底物。/n

【技术特征摘要】
1.一种定量检测人抑制素b的化学发光试剂盒，其特征在于，包括：包被人抑制素b抗体的化学发光板，样本反应液，生物素标记的人抑制素b抗体，链霉亲和素标记酶底物，酶促发光底物。


2.如权利要求1所述的化学发光试剂盒，其特征在于，所述化学发光板中包被人抑制素b抗体的浓度为1-5ug/mL。


3.如权利要求1所述的化学发光试剂盒，其特征在于，所述样本反应液包括葡聚糖、磷酸盐缓冲液、tris缓冲液成分中的至少一种。


4.如权利要求1所述的化学发光试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的人抑制素b抗体的缓冲液包括Tris盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、蛋白保护剂中的至少一种。


5.如权利要求1所述的化学发光试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素标记酶底物包括磷酸盐缓冲液、蛋白保护剂中的至少一种。


6.如权利要求4或5所述的化学发光试剂盒，其特征在于，所述蛋白保护剂包括酪蛋白、牛血清白蛋白、明胶、动物血清、人血清中的至少一种。


7.如权利要求1所述的化学发光试剂盒，其特征在于，所述酶底物包括辣根过氧化氢酶、碱性磷酸酶中的至少一种。


8.如权利要求1所述的化学发光试剂盒，其特征在于，所述酶促发光底物为辣根过氧化物酶酶促发光底物和/或碱性磷酸酶的酶促发光底物。


9.一种如权利要求1-9任一项所述的化学发光试剂盒的制备方法，其特征在于，步骤至少包括：
(1)制备包被人抑制素b抗体的化学发光板；
(2)配置生物素标记的人抑制素b抗体的抗体工作液：首先制备生物素标记的人抑制素b抗体，稀释液稀释，稀释比例为1：500-1：5000；
(3...

【专利技术属性】
技术研发人员：辛鑫，张卫兰，
申请(专利权)人：上海磐超生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31