液质联用技术同时检测人血浆中奥美拉唑、雷贝拉唑、兰索拉唑和泮托拉唑对映体的浓度制造技术

本发明专利技术公开了一种手性液相色谱串联质谱法(Chiral‑LC‑MS/MS)，用于同时检测人血浆中奥美拉唑、雷贝拉唑、兰索拉唑和泮托拉唑对映体的浓度。本发明专利技术方法采用含0.2％乙酸的乙酸铵‑乙腈为流动相；本方法检测的4对质子泵抑制剂(PPIs)对映体及其相应的内标色谱峰峰形良好，无杂峰干扰测定，本方法具有较高的特异性；4对PPIs对映体的定量下限均为5.00ng/mL，检测准确度在±20％之内，RSD小于20％。本方法具有较高的灵敏度、准确度和精密度，血浆中的PPIs在5.00～5000ng/mL范围里内线性关系良好，可用于测定人血浆中PPIs的浓度。

Simultaneous determination of omeprazole, rabeprazole, lansoprazole and pantoprazole enantiomers in human plasma by LC-MS

【技术实现步骤摘要】
液质联用技术同时检测人血浆中奥美拉唑、雷贝拉唑、兰索拉唑和泮托拉唑对映体的浓度
本专利技术涉及医药检测技术，具体为一种应用液质联用技术同时检测人血浆中奥美拉唑、雷贝拉唑、兰索拉唑和泮托拉唑对映体的浓度。
技术介绍
质子泵抑制剂(PPIs)包括奥美拉唑、雷贝拉唑、兰索拉唑和泮托拉唑，是临床上应用最为广泛的抗酸药物。通常，PPIs被认为是安全的，然而，随着长期和广泛的临床应用，出现了较多不良反应，如骨质疏松、慢性肾脏疾病、心肌梗塞和中风。酸分泌的抑制效率以及药物的不良作用与血浆浓度密切相关。因此，应建立有立体选择性的高灵敏度方法，测定人血浆中四种主要的PPIs对映体的浓度。目前尚未报道同时测定人血浆中4种PPIs(奥美拉唑、雷贝拉唑、兰索拉唑和泮托拉唑)对映体的手性方法。有文献报道了同时测定非生物样品中PPIs对映体的方法，分析时间为18min，PPIs的定量下限为61.0～77.0ng/mL，鉴于生物样品具有内源性干扰物质，药物浓度较低，文献报道方法不适用于血浆中PPIs对映体的检测。有一些文献报道了在人血浆中分别单独测定奥美拉唑、兰索拉唑、泮托拉唑或雷贝拉唑对映体的手性方法。但是这些方法分析时间一般较长为25至60min，前处理过程复杂，PPIs的线性范围为5.00至20.0ng/mL，需要柱切换或超临界流体色谱法等特定仪器。不适用于生物样本的检测要求，因为，用于治疗药物监测的方法需要简单的预处理、高通量的分析及高灵敏度和选择性。鉴于现有检测方法存在的问题，本申请的专利技术人发现了一种手性方法同时测定人血浆中的PPIs对映体浓度。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有检测方法存在的技术问题，本专利技术提供了一种液质联用技术同时检测人血浆中奥美拉唑、雷贝拉唑、兰索拉唑和泮托拉唑对映体的浓度。技术方案：本专利技术所述的一种液质联用技术同时检测人血浆中奥美拉唑、雷贝拉唑、兰索拉唑和泮托拉唑对映体的浓度，包括以下步骤：S1：储备液的配制：用含0.1％氨水的乙腈溶解4对PPIs对映体对照品，得到一定浓度的各对照品储备液；用含0.1％氨水的乙腈将四种内标充分溶解、稀释，得到一定浓度的内标储备液。S2：工作液的配制：取4对PPIs对映体储备液于EP管中并加入0.1％氨水的乙腈混匀、稀释，得到系列浓度的标准曲线用混合工作液和质控用混合工作液；取四种内标储备液，用含0.1％氨水的乙腈混匀、稀释，得到浓度为20.0μg/mL的混合内标工作液；再取一定量的混合内标工作液，用含0.1％氨水的乙腈稀释得到浓度为50.0ng/mL的含内标的沉淀剂。S3：标准曲线和质控样本的配制：吸取40.0μL空白血浆，再分别加入2.50μL上述相应浓度的标准曲线用或质控用工作液，得到标准曲线样本和质控样本。S4：样品预处理方法：标准曲线样本和质控样本前处理：取上述标准含药血浆样本，加入含内标的沉淀剂，混合离心，取上清液转移至自动进样器样品瓶中，进行Chiral-LC-MS/MS分析，进样量1.0μL；血浆样本的前处理：取血浆样本，加入含内标的沉淀剂，混合离心，取上清液转移至自动进样器样品瓶中，进行Chiral-LC-MS/MS分析，进样量1.0μL。S4中，所述混合离心是指：涡旋10min，于4℃，16000rpm离心15min。S4中，Chiral-LC-MS/MS系统由手性柱(ChiralpakIC色谱柱)、柱温箱(G1316C)、多孔板自动进样器(G4226A)、二元高压泵(G4220A)、API4000串联质谱仪(美国应用生物公司)组成。Chiral-LC-MS/MS方法的色谱条件：柱温箱设定为30℃，使用ChiralpakIC色谱柱(5μm，4.6mm×150mm)分离分析物，进样量为1.0μL，流动相为乙腈:10mM乙酸铵(含0.2％乙酸)＝50:50(v/v)，等度条件，流速为0.60mL/min，分析时间为10min。Chiral-LC-MS/MS方法的质谱条件：离子源的极性为正离子，离子监测方式为多反应监测，经过电参数优化后，去簇电压为55V，碰撞电压分别为15.5、22.0、17.5和16.0V，数据采集和处理系统为Analyst1.6.2。根据上述检测方法，在电喷雾离子化正离子条件下，4对PPIs对映体奥美拉唑、雷贝拉唑、兰索拉唑和泮托拉唑的母离子均为[M+H]+峰，m/z分别为346.2、360.1、370.1和384.1；分别以此为母离子进行产物离子扫描，得到的产物离子峰分别为m/z198.2、242.2、252.1、和200.2，色谱图见图1～图4。有益效果：与现有技术相比，本专利技术法建立了一种简单、快速、灵敏度高和选择性好的用于同时测定人血浆中的奥美拉唑、雷贝拉唑、兰索拉唑和泮托拉唑对映体浓度的Chiral-LC-MS/MS方法，4对PPIs对映体及其相应的内标色谱峰峰形良好，无杂峰干扰测定，本方法具有较高的特异性；4对PPIs对映体的定量下限均为5.00ng/mL，准确度在±20％之内，RSD小于20％，本方法具有较高的灵敏度、准确度和精密度。附图说明图1是奥美拉唑的产物离子扫描图；图2是雷贝拉唑的产物离子扫描图；图3是兰索拉唑的产物离子扫描图；图4是泮托拉唑的产物离子扫描图；图5是LC-MS/MS法测定血浆中奥美拉唑的特异性色谱图；图6是LC-MS/MS法测定血浆中雷贝拉唑的特异性色谱图；图7是LC-MS/MS法测定血浆中兰索拉唑的特异性色谱图；图8是LC-MS/MS法测定血浆中泮托拉唑的特异性色谱图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术的技术方案进行详细说明：仪器、试剂来源：LC-MS/MS系统：1290Infinity高效液相色谱仪、柱温箱(G1316C)、多孔板自动进样器(G4226A)、二元高压泵(G4220A)、API4000串联质谱仪(美国应用生物公司)。色谱工作站：软件：1.6.2版本，美国应用生物公司；电子天平：BP211D型，Sartorius；分析天平：AL-204型，MettlerToledo；高速冷冻离心机：STRATOS，Thermo；涡旋混合仪(Mixmate)：PCB-11型，Eppendorf；微型涡旋仪：XW-80A型，上海沪西分析仪器厂有限公司；低温冰箱(-40℃)：DW-FL270，美菱；冰箱(4℃)：BCD-272WBCS，海尔；移液器：P29398D(100～1000μL)，Eppendorf；G30871E(20～200μL)，Eppendorf；H16091D(0.10～2.50μL)，Eppendorf；纯水仪：Milli-QGrandient，Millipore中国有限公司；左旋兰索拉唑：纯度：98.7％，由南京优科生物医药有限公司提供，批号：NA；右旋兰索拉唑：纯度：99.5％，由南京优科生物医药有限公司提供，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种应用液质联用技术同时检测人血浆中奥美拉唑、雷贝拉唑、兰索拉唑和泮托拉唑对映体浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：储备液的配制：用含0.1％氨水的乙腈分别溶解4对PPIs对映体对照品，得到各对照品储备液；用含0.1％氨水的乙腈分别溶解四种内标对照品，得到各内标储备液。/nS2：工作液的配制：分别取4对PPIs对映体储备液于EP管中并加入0.1％氨水的乙腈稀释、混匀，得到系列浓度的标准曲线用混合工作液和质控用混合工作液；取四种内标储备液，用含0.1％氨水的乙腈稀释、混匀，得到浓度为20.0μg/mL的混合内标工作液；同法稀释得到浓度为50.0ng/mL的含内标的沉淀剂。/nS3：标准曲线和质控样本的配制：取40.0μL空白血浆，分别加入2.50μL上述相应浓度的标准曲线或质控用混合工作液，得到标准曲线样本和质控样本。/nS4：标准曲线和质控样本前处理：取上述标准含药血浆样本，加入含内标的沉淀剂，混合离心，取上清液转移至自动进样器样品瓶中，进行Chiral-LC-MS/MS分析；血浆样本的前处理：取血浆样本，加入含内标的沉淀剂，混合离心，取上清液转移至自动进样器样品瓶中，进行Chiral-LC-MS/MS分析。/n...

【技术特征摘要】
1.一种应用液质联用技术同时检测人血浆中奥美拉唑、雷贝拉唑、兰索拉唑和泮托拉唑对映体浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：储备液的配制：用含0.1％氨水的乙腈分别溶解4对PPIs对映体对照品，得到各对照品储备液；用含0.1％氨水的乙腈分别溶解四种内标对照品，得到各内标储备液。
S2：工作液的配制：分别取4对PPIs对映体储备液于EP管中并加入0.1％氨水的乙腈稀释、混匀，得到系列浓度的标准曲线用混合工作液和质控用混合工作液；取四种内标储备液，用含0.1％氨水的乙腈稀释、混匀，得到浓度为20.0μg/mL的混合内标工作液；同法稀释得到浓度为50.0ng/mL的含内标的沉淀剂。
S3：标准曲线和质控样本的配制：取40.0μL空白血浆，分别加入2.50μL上述相应浓度的标准曲线或质控用混合工作液，得到标准曲线样本和质控样本。
S4：标准曲线和质控样本前处理：取上述标准含药血浆样本，加入含内标的沉淀剂，混合离心，取上清液转移至自动进样器样品瓶中，进行Chiral-LC-MS/MS分析；血浆样本的前处理：取血浆样本，加入含内标的沉淀剂，混合离心，取上清液转移至自动进样器样品瓶中，进行Chiral-LC-MS/MS分析。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，S1中，所述4对PPIs对映体对照品为左旋兰索拉唑、右旋兰索拉唑、埃索美拉唑镁、右旋奥美拉唑钠、左旋泮托拉唑、右旋泮托拉唑、左旋雷贝拉唑钠、右旋雷贝拉唑钠。


3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述四种内标对照品为右旋泮托拉唑-d6、奥美拉唑-d3、兰索拉唑-d4、雷贝拉唑-d4。


4.根据权利要求1所述的检测方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：王永庆，孙鲁宁，张烨，杨雨晴，沈叶，张宏文，王敦建，应玉雯，
申请(专利权)人：江苏省人民医院南京医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32