黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的供试品溶液的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的供试品溶液的制备方法，包括以下步骤：黄芪粉末的制备及称量，氏提取过程，溶液的蒸发与溶解，使用水饱和的正丁醇振摇提取，使用氨试液洗涤提取，溶液的蒸发与再次溶解，液体注入层析柱进行洗脱操作，供试品溶液定容确定。其中，使用氨试液洗涤提取过程中氨试液的静置时间确定为24h，针对同一黄芪供试样品不同的操作人员所制备得到的供试品溶液，利用相同的测定仪器和条件能够得到相同的客观的测定结果；使用氨试液洗涤提取过程中氨试液的成分中采用氨水代替氨溶液，取材方便，成本较低，减少了带毒作业；使用水饱和的正丁醇振摇提取过程中，每次振摇时间为10秒可以避免产生乳化现象。

Preparation of test solution for determination of astragaloside in Astragalus

【技术实现步骤摘要】
黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的供试品溶液的制备方法
本专利技术涉及中药材中含有特定化学成分的测定，尤其涉及一种黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的样品的前处理工艺方法。
技术介绍
黄芪甲苷是黄芪的主要成分，具有很好的药用价值，所以准确测量黄芪中甲苷的含量具有极其重要的意义。目前，对中药材黄芪中黄芪甲苷含量测定通常采用药典中提供测量黄芪甲苷的方法。该包括主要包括：1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(32：68)为流动相；蒸发光散射检测器检测。理论板数按黄芪甲苷峰计算应不低于4000。2)对照品溶液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。3)供试品溶液制备：取本品中粉约4g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4小时，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5cm，柱高为12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去洗脱液，继用70％乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。4)测定法：分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl，供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。但由于上述方法的供试品溶液制备操作过程存在不够细致、全面的缺陷，部分操作细节和时间未定，因此，不同人员测定黄芪甲苷含量会有所差异，该方法可以作为测量黄芪甲苷的粗略步骤，由于人为因素的影响，该方法不能规范统一、精确的测量黄芪中黄芪甲苷的含量，对于认定黄芪药材的品质和药用特性带来了困扰。
技术实现思路
针对上述现有技术，本专利技术提出一种黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的供试品溶液的制备方法，在药典提供的制备供试品溶液的操作过程的基础上加以改进，其操作过程规范统一，细致全面，可操作性强，利用其制备所得的供试品溶液能够更加有效、精确、稳定的测定其中的黄芪甲苷的含量，其测定结果可靠，更具有说服力，能够得到大家的公认。为了解决上述技术问题，本专利技术提出的一种黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的供试品溶液的制备方法，包括以下步骤：步骤一、黄芪粉末的制备及称量：取50g黄芪制备为黄芪中粉，取4g黄芪中粉过3～4号筛，过筛后的黄芪中粉为供试样品；精密称定前将样品摇一摇混匀，进行精密称定，并记录数据；叠好滤纸放在一烧杯中，样品称量到烧杯滤纸中，称量好后折叠封口；步骤二、索氏提取过程：将封装好的滤纸包置于索氏提取器中，加甲醇40ml，常温下浸泡10～12h；再向索氏提取器中加甲醇40～45ml，用水浴锅进行加热，加热回流4h，水浴锅温度设定在80℃～85℃；步骤三、溶液的蒸发与溶解：将步骤二加热回流后的溶液倒入蒸发皿中，用甲醇润洗索氏提取器和蒸馏烧瓶，将润洗用的溶液倒入该蒸发皿中，用水浴锅加热蒸发皿使其中的溶液浓缩至干，在蒸发皿中加一棉花球和5ml水，水浴加热40～50℃，使蒸发皿中的干物溶解，将溶液倒入分液漏斗中；用5ml水润洗蒸发皿，然后将润洗后的溶液倒入所述的分液漏斗中；步骤四、使用水饱和的正丁醇振摇提取：量取20ml的水饱和的正丁醇润洗所述的蒸发皿后倒入分液漏斗，再取20ml的水饱和的正丁醇倒入分液漏斗中得到混合溶液，对分液漏斗进行封口，摇匀后静置1h，放出分液漏斗中下层液体的一半至第一烧杯，继续静置1h，放出剩余的下层液体至第二烧杯；将第一烧杯中的液体再次倒回分液漏斗，重复四次步骤四的过程；步骤五、使用氨试液洗涤提取：将第二烧杯中的收集到的液体倒入所述分液漏斗中，取20ml氨试液润洗第二烧杯后后倒入所述分液漏斗，取20ml氨试液倒入所述分液漏斗中，静置12h，放出下层液体的一半到废液瓶中，继续静置12h放出剩余的下层液体到所述废液瓶中；步骤六、溶液的蒸发与再次溶解：将所述分液漏斗中的上层液体即正丁醇混合液倒入蒸发皿中，在用水饱和的正丁醇溶液润洗分液漏斗，润洗后的液体倒入蒸发皿中，放在水浴锅上进行蒸干，在蒸发皿中加一棉花球和5ml水，30℃加热，使蒸发皿中的干物溶解；步骤七、层析柱的过滤洗脱：将溶解后得到的液体注入层析柱中，进行如下操作：7-1)先用50ml水洗脱，弃去该洗脱液；7-2)再用40％乙醇30ml洗脱，弃去该洗脱液；7-3)继用70％乙醇80ml洗脱，用蒸发皿收集该洗脱液，该步骤7-3)中，保持液面在D101之上，先加入几滴该洗脱液，放开层析柱下面阀门，液体慢慢滴入蒸发皿，同时上面不断加入洗脱液，加入速度与液体慢慢滴入蒸发皿的速度相同；步骤八、供试品溶液定容确定：层析柱中的液体滴尽后用洗耳球挤压层析柱上面开口，将蒸发皿中溶液蒸干，将所得干物转移至5ml容量瓶中，加甲醇至5ml刻度，摇匀，至此制备得到供试品溶液。进一步讲，本专利技术所述的黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的供试品溶液的制备方法，其中，步骤二的索氏提取过程中，再次加入甲醇的量以完成回流为准；水浴锅温度以甲醇沸腾为准。步骤四的使用水饱和的正丁醇振摇提取过程中的摇匀操作是振摇10秒。步骤五的使用氨试液洗涤提取过程中所用氨试液由氨水和水混合而成，氨水和水的体积比为4:6。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：(1)本工艺在药典方法的基础上进行改进，结合药典优点加以改进，规范了操作工艺，利用本专利技术制备得到的供试品溶液，使得黄芪甲苷的含量测定更加准确，结果更具有说服力。(2)由于在本专利技术中限定了正丁醇的提取时间为两小时，使得黄芪同一样品测定出的黄芪甲苷含量数值是客观的；在用氨试液进行洗涤时，因为，传统的方法在该静置时间上没有统一的规定，本专利技术设置了规范了的该氨试液静置时间，可操作性强。(3)在药典中氨试液要求为氨溶液与水配比，但氨溶液高危高毒属于国家管制药品，大部分机构和人员无法购买，作为不同药品的氨水可以代替它的作用。本专利技术中的氨试液的成分中采用氨水代替氨溶液，不但取材方便，成本较低，而且减少了带毒作业。(4)在使用水饱和的正丁醇振摇提取过程中，如果震摇时间过长会产生乳化现象，本专利技术中限定了合理的振摇时间为10秒，从而可以避免产生乳化现象。附图说明图1是本专利技术所述的供试品溶液制备的过程框图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的说明，但下述实施例绝非对本专利技术有任何限制。本专利技术提出的一种黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的供试品溶液的制备方法，如图1所示包括以下步骤：步骤一、黄芪粉末的制备及称量取50g黄芪制备为黄芪中粉，取4g黄芪中粉过3～4号筛，过筛后的黄芪中粉为样品；精密称定前将样品摇一摇混匀，进行精密称定，并记录数据；叠好滤纸放在一烧杯中，样品称量到本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的供试品溶液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤一、黄芪粉末的制备及称量：取50g黄芪制备为黄芪中粉，取4g黄芪中粉过3～4号筛，过筛后的黄芪中粉为供试样品；精密称定前将样品摇一摇混匀，进行精密称定，并记录数据；叠好滤纸放在一烧杯中，样品称量到烧杯滤纸中，称量好后折叠封口；/n步骤二、索氏提取过程：将封装好的滤纸包置于索氏提取器中，加甲醇40ml，常温下浸泡10～12h；再向索氏提取器中加甲醇40～45ml，用水浴锅进行加热，加热回流4h，水浴锅温度设定在80℃～85℃；/n步骤三、溶液的蒸发与溶解：将步骤二加热回流后的溶液倒入蒸发皿中，用甲醇润洗索氏提取器和蒸馏烧瓶，将润洗用的溶液倒入该蒸发皿中，用水浴锅加热蒸发皿使其中的溶液浓缩至干，在蒸发皿中加一棉花球和5ml水，水浴加热40～50℃，使蒸发皿中的干物溶解，将溶液倒入分液漏斗中；用5ml水润洗蒸发皿，然后将润洗后的溶液倒入所述的分液漏斗中；/n步骤四、使用水饱和的正丁醇振摇提取：量取20ml的水饱和的正丁醇润洗所述的蒸发皿后倒入分液漏斗，再取20ml的水饱和的正丁醇倒入分液漏斗中得到混合溶液，对分液漏斗进行封口，摇匀后静置1h，放出分液漏斗中下层液体的一半至第一烧杯，继续静置1h，放出剩余的下层液体至第二烧杯；将第一烧杯中的液体再次倒回分液漏斗，重复四次步骤四的过程；/n步骤五、使用氨试液洗涤提取：将第二烧杯中的收集到的液体倒入所述分液漏斗中，取20ml氨试液润洗第二烧杯后后倒入所述分液漏斗，取20ml氨试液倒入所述分液漏斗中，静置12h，放出下层液体的一半到废液瓶中，继续静置12h放出剩余的下层液体到所述废液瓶中；/n步骤六、溶液的蒸发与再次溶解：将所述分液漏斗中的上层液体即正丁醇混合液倒入蒸发皿中，在用水饱和的正丁醇溶液润洗分液漏斗，润洗后的液体倒入蒸发皿中，放在水浴锅上进行蒸干，在蒸发皿中加一棉花球和5ml水，30℃加热，使蒸发皿中的干物溶解；/n步骤七、层析柱的过滤洗脱：将溶解后得到的液体注入层析柱中，进行如下操作：/n7-1)先用50ml水洗脱，弃去该洗脱液；/n7-2)再用40％乙醇30ml洗脱，弃去该洗脱液；/n7-3)继用70％乙醇80ml洗脱，用蒸发皿收集该洗脱液，该步骤7-3)中，保持液面在D101之上，先加入几滴该洗脱液，放开层析柱下面阀门，液体慢慢滴入蒸发皿，同时上面不断加入洗脱液，加入速度与液体慢慢滴入蒸发皿的速度相同；/n步骤八、供试品溶液定容确定：层析柱中的液体滴尽后用洗耳球挤压层析柱上面开口，将蒸发皿中溶液蒸干，将所得干物转移至5ml容量瓶中，加甲醇至5ml刻度，摇匀，至此制备得到供试品溶液。/n...

【技术特征摘要】
1.一种黄芪药材中黄芪甲苷含量测定的供试品溶液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、黄芪粉末的制备及称量：取50g黄芪制备为黄芪中粉，取4g黄芪中粉过3～4号筛，过筛后的黄芪中粉为供试样品；精密称定前将样品摇一摇混匀，进行精密称定，并记录数据；叠好滤纸放在一烧杯中，样品称量到烧杯滤纸中，称量好后折叠封口；
步骤二、索氏提取过程：将封装好的滤纸包置于索氏提取器中，加甲醇40ml，常温下浸泡10～12h；再向索氏提取器中加甲醇40～45ml，用水浴锅进行加热，加热回流4h，水浴锅温度设定在80℃～85℃；
步骤三、溶液的蒸发与溶解：将步骤二加热回流后的溶液倒入蒸发皿中，用甲醇润洗索氏提取器和蒸馏烧瓶，将润洗用的溶液倒入该蒸发皿中，用水浴锅加热蒸发皿使其中的溶液浓缩至干，在蒸发皿中加一棉花球和5ml水，水浴加热40～50℃，使蒸发皿中的干物溶解，将溶液倒入分液漏斗中；用5ml水润洗蒸发皿，然后将润洗后的溶液倒入所述的分液漏斗中；
步骤四、使用水饱和的正丁醇振摇提取：量取20ml的水饱和的正丁醇润洗所述的蒸发皿后倒入分液漏斗，再取20ml的水饱和的正丁醇倒入分液漏斗中得到混合溶液，对分液漏斗进行封口，摇匀后静置1h，放出分液漏斗中下层液体的一半至第一烧杯，继续静置1h，放出剩余的下层液体至第二烧杯；将第一烧杯中的液体再次倒回分液漏斗，重复四次步骤四的过程；
步骤五、使用氨试液洗涤提取：将第二烧杯中的收集到的液体倒入所述分液漏斗中，取20ml氨试液润洗第二烧杯后后倒入所述分液漏斗，取20ml氨试液倒入所述分液漏斗中，静置12h，放出下层液体的一半到废液瓶中，继续静置12h放出剩余的...

【专利技术属性】
技术研发人员：公剑，冉庆生，白洋，
申请(专利权)人：内蒙古天创药业科技股份有限公司，达茂旗天创中药材科技有限公司，
类型：发明
国别省市：内蒙;15