一种基于CeO制造技术

本发明专利技术属于免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种基于CeO

A kind of CEO based

【技术实现步骤摘要】
一种基于CeO2@MnO2的免疫传感器的制备方法及应用
本专利技术属于纳米功能材料、免疫分析以及生物传感
，涉及一种基于CeO2@MnO2的免疫传感器的制备方法及应用。具体是采用CeO2@MnO2/Ag@Au为检测抗体标记物，实现了对肿瘤标志物的灵敏检测。
技术介绍
近年来，由于肿瘤发病率高、生长和转移速度快，导致死亡人数不断增加。通过对肿瘤标志物的灵敏检测，在临床上可实现早期发现肿瘤，对良性和恶性肿瘤进行鉴别诊断。肿瘤标志物的灵敏检测对肿瘤的治疗效果的观察和评价及肿瘤复发和预后的预测有重大的影响。电化学免疫传感器由于其灵敏度高、制备简单、检测快速、成本低等优点，已经广泛用于各种肿瘤标志物的检测，而且在临床检验、环境监测、食品安全控制、生物监测等领域都有重要的应用价值。本专利技术成功构建了一种基于CeO2@MnO2的免疫传感器，CeO2@MnO2为核壳纳米球，具有大的表面积，能提供更多的结合位点。Ag@Au具有优异的催化性，大的比表面积，良好的稳定性和生物相容性。由于二者的协同作用有助于放大信号，能提高选择性，提高肿瘤标志物检测的灵敏度。
技术实现思路
本专利技术提供了一种基于CeO2@MnO2的免疫传感器的制备方法及应用，实现了对肿瘤标志物的超灵敏检测。本专利技术的目的之一是提供一种基于CeO2@MnO2的免疫传感器的制备方法。本专利技术的目的之二是将所制备的一种基于CeO2@MnO2的免疫传感器应用于肿瘤标志物的高灵敏、特异性检测。本专利技术的技术方案，包括以下步骤。1.一种基于CeO2@MnO2的免疫传感器的制备方法，步骤如下：（1）将直径为4mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；（2）将预处理的玻碳电极浸入质量浓度为1%HAuCl4溶液中，在-0.2V电压下，电镀20~30秒，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；（3）继续将6µL、8~10µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中干燥；（4）继续将3µL、0.5~2.0mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4°C冰箱中晾干；（5）滴加6µL、10fg/mL~100ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4°C冰箱中晾干；（6）将6µL、1~3mg/mL检测抗体孵化物CeO2@MnO2/Ag@Au-Ab2溶液滴至电极表面，置于4°C冰箱中孵化40min，超纯水冲洗电极表面，4°C冰箱中晾干，制得一种基于CeO2@MnO2的免疫传感器。2.所述检测抗体孵化物CeO2@MnO2/Ag@Au-Ab2的制备，步骤如下：（1）CeO2@MnO2的制备将0.10~0.30gCe(NO3)3·6H2O溶于5mLDEG中，快速搅拌下加入2mL浓硝酸溶液、35mL丙酮溶液，继续搅拌30min，将所制备的溶液转移到50mL聚四氟乙烯高压反应釜中，100°C下加热10h；无水乙醇离心洗涤三次，60°C烘箱中干燥5h；在500°C下退火，制得CeO2核壳纳米球；将上述制备的40~50mgCeO2核壳纳米球分散到40mL的0.05mol/L葡萄糖水溶液中，超声30min，转移到50mL的聚四氟乙烯高压反应釜中，170°C下加热4h制得碳包覆的CeO2纳米球；将制备的碳包覆CeO2纳米球分散在40~50mL的0.01mol/LKMnO4溶液中，转移到50mL聚四氟乙烯高压反应釜中，150°C加热3h；产物用超纯水离心洗涤三次，80°C烘箱中干燥10h；产物在450°C下退火除去碳层，制得CeO2@MnO2核壳纳米球；（2）Ag@Au的制备取100~120mL、质量分数为0.01%的HAuCl4溶液加热至沸腾，加入2.5mL、10mg/mL的柠檬酸钠溶液，反应1.5h，冷却至室温，得酒红色的金纳米粒子溶液；取50mL上述金纳米粒子溶液，依次加入20mL、0.1mol/L的十六烷基三甲基溴化铵溶液，2.2mL、0.1mol/L的抗坏血酸溶液，40~50mL、0.01mol/L的AgNO3溶液和5mL、0.25mol/L的NaOH溶液，持续搅拌30min，制得Ag@Au溶液；（3）CeO2@MnO2/Ag@Au的制备在30mLAg@Au溶液中加入20~30mgCeO2@MnO2，用无水乙醇和超纯水依次离心洗涤三次，70°C的烘箱中干燥12h，制得CeO2@MnO2/Ag@Au；（4）检测抗体孵化物CeO2@MnO2/Ag@Au-Ab2的制备将1~3mL、2mg/mL的CeO2@MnO2/Ag@Au溶液加入到0.5~1.5mL、10μg/mL的肿瘤标记物检测抗体Ab2中，4°C恒温震荡箱中震荡孵化12h；离心洗涤，分散至1~3mL的pH为7.38的磷酸盐缓冲液中，制得检测抗体孵化物CeO2@MnO2/Ag@Au-Ab2。3.一种基于CeO2@MnO2的免疫传感器，用于肿瘤标志物的检测，检测步骤如下：（1）使用电化学工作站以三电极体系进行测试，饱和甘汞电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，所制备的传感器为工作电极，在10mL，含10mmol/L的铁氰化钾的pH=5.8~8.0磷酸盐缓冲溶液中进行测试；（2）用差分脉冲伏安法对分析物进行检测，初始电位为0.15V，终止电位为0.50V，脉冲振幅为50mV，脉冲宽度为50ms，脉冲周期为500ms，记录电流变化；（3）记录不同浓度下的肿瘤标志物抗原所对应的电流峰值；（4）利用工作曲线法，求得待测样品中肿瘤标志物抗原的浓度。以上所述的肿瘤标志物，选自下列之一：SCCA、CA125。本专利技术所用原材料均可在化学试剂公司或生物制药公司购买。本专利技术的有益成果（1）采用电沉积金来修饰电极材料，电沉积金具有良好的导电能力和较大的表面积及优良的生物相容性，不但能很好的固载抗体，还可以加快电子传递；（2）采用CeO2@MnO2/Ag@Au作为抗原标记物，Ag@Au具有优异的导电性、极好的催化性、良好的稳定性和生物相容性；Ce2O@MnO2为核壳球型结构，表面积大，可以提供更多的活性位点，且CeO2与MnO2之间的协同作用使其催化性能增强，实现了放大电化学信号的作用，提高了传感器的灵敏度，降低了检测限；（3）一种CeO2@MnO2/Ag@Au的免疫传感器对肿瘤标志物的检测，其对SCCA检测的线性范围为0.1pg/mL~100ng/mL，检测限最低0.03pg/mL，对CA125检测的线性范围为0.1pg/mL~100ng/mL，检测限最低0.03pg/mL表明一种CeO2@MnO2/Ag@Au的免疫传感器可以达到准确测定的目的。具体实施方式现将本专利技术通过具体实施方式进一步说明，但不限于此。实施例1一种基于CeO2@MnO2的免疫传感器的制备方法，步骤如下：（1）将直径为4mm本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于CeO

【技术特征摘要】
1.一种基于CeO2@MnO2的免疫传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：
（1）将直径为4mm的玻碳电极用Al2O3抛光粉打磨，超纯水清洗干净；
（2）将预处理的玻碳电极浸入质量浓度为1%HAuCl4溶液中，在-0.2V电压下，电镀20~30秒，室温下晾干，超纯水冲洗电极表面，晾干；
（3）继续将6µL、8~10µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab1滴加到电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中干燥；
（4）继续将3µL、0.5~2.0mg/mL的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到电极表面，超纯水冲洗电极表面，4°C冰箱中晾干；
（5）滴加6µL、10fg/mL~100ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4°C冰箱中晾干；
（6）将6µL、1~3mg/mL检测抗体孵化物CeO2@MnO2/Ag@Au-Ab2溶液滴至电极表面，置于4°C冰箱中孵化40min，超纯水冲洗电极表面，4°C冰箱中晾干，制得一种基于CeO2@MnO2的免疫传感器。


2.如权利要求1所述的一种基于CeO2@MnO2的免疫传感器的制备方法，其特征在于，所述检测抗体孵化物CeO2@MnO2/Ag@Au-Ab2的制备，步骤如下：
（1）CeO2@MnO2的制备
将0.10~0.30gCe(NO3)3·6H2O溶于5mLDEG中，快速搅拌下加入2mL浓硝酸溶液、35mL丙酮溶液，继续搅拌30min，将所制备的溶液转移到50mL聚四氟乙烯高压反应釜中，100°C下加热10h；无水乙醇离心洗涤三次，60°C烘箱中干燥5h；在500°C下退火，制得CeO2核壳纳米球；
将上述制备的40~50mgCeO2核壳纳米球分散到40mL的0.05mol/L葡萄糖水溶液中，超声30min，转移到50mL的聚四氟乙烯高压反应釜中，170°C下加热4h制得碳包覆的CeO2纳米球；将制备的碳包覆CeO2纳米球分散在40~50mL的0.01mol/LKMnO4溶液中，转移到50mL聚四氟乙烯高压反应釜中，150°C加热3h；产物用超纯水离心洗涤三次，80°C烘箱中干燥10h；产物在450°C下退火除去碳层，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李月云，刘尚华，李新进，徐振，
申请(专利权)人：山东理工大学，
类型：发明
国别省市：山东;37