一种上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒，该试剂盒，包括试剂盒盒体以及试剂盒盒盖，试剂盒盒体内壁紧贴有保温隔水层，所述的试剂盒盒体内底部设有冷盒，冷盒上设置有底盒，底盒内设置有多个放置槽和多个放置孔，多个放置槽内设置有螺旋样品室和微流控芯片，多个放置孔内设置有多个试剂瓶，多个试剂瓶形成试剂瓶组。该试剂盒设计组合合理、使用存放节约、运输方便的可以直接用于常温环境使用保存与运输，克服了低温保藏试剂繁琐的低温环境维持冷链运输储存及使用过程，节约储存运输使用能耗，确保了试剂盒中的试剂耗材组合用于上皮型、上皮间质混合型与间质型的CTCs富集捕获与检测过程的有效性。

A test kit for mixed epithelial stromal circulating tumor cells

【技术实现步骤摘要】
一种上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒
本技术涉及试剂盒以及上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测领域，具体涉及一种上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒。
技术介绍
循环肿瘤细胞(CirculatingTumorCells，CTCs)为自发或因诊疗操作由实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞，是存在于外周血中的各类肿瘤细胞的统称。CTCs主要是由上皮型CTCs、上皮间质混合型CTCs和间质型CTCs亚群组成的异质性种群。肿瘤转移扩散是导致癌症进展与相关死亡的主要原因。CTCs在肿瘤形成远端转移的过程中扮演着重要的角色。恶性肿瘤患者血液中若含有较多数量的CTCs，则预示着预后不良与肿瘤转移的概率增加。CTCs诱发的肿瘤转移主要涉及上皮间质转化(EpithelialtoMesenchymalTransition，EMT)与间质上皮转化(MesenchymaltoEpithelialTransition，MET)两个动态过程，其中EMT过程涉及肿瘤细胞从原发灶脱落入血形成具有转移侵袭性的上皮间质混合型CTCs，MET过程参与了远端转移灶的形成、稳定和增殖过程。在上述CTCs发生EMT与MET的过程中伴随着上皮型、上皮间质混合型和间质型不同表型间的CTCs转变，且在肿瘤发生发展的不同阶段(早期、进展期与转移期)中对于上述不同亚群的CTCs检测具有不同的临床应用价值：上皮型CTCs的检测分析可应用于肿瘤的早期辅助鉴别诊断与预后评估等方向；上皮间质混合型与间质型CTCs检测分析可指导进展期和转移期的肿瘤患者的转移复发监测和疗效监测等。因此，以无创的方式获取与检测肿瘤患者外周血中的不同亚群的CTCs对肿瘤患者临床肿瘤早期辅助诊断、预后判断、肿瘤治疗疗效监测与评价、肿瘤转移复发监测以及早期预警、个体化治疗指导和改善肿瘤患者的生存状态都有着重要的临床应用价值。CTCs在外周血中的数量非常稀少，仅占外周血白细胞的1/106～1/107，因此对于不同类型CTCs的有效富集与检测技术瓶颈更高、难度更大，一直影响着CTCs的实际应用。目前CTCs的富集检测主要采用以下2种形式：①依赖抗EpCAM富集捕获CTCs与抗细胞角蛋白(CK8、CK18和CK19等)抗体及CD45鉴别检测CTCs的方法(代表为CellSearch系统)，此种方法仅针对上皮型CTCs的富集与检测，无法检测间质表型与上皮间质混合型的CTCs；②不依赖捕获标记物富集CTCs(膜过滤法、梯度离心法等)，虽然克服了富集捕获标志物的限制，但是此种方式的富集特异性不高，会漏检具有特殊生物物理特性的CTCs，且仍存在无法检测上皮间质混合型的CTCs。因此常规CTCs的富集与检测往往局限于单一类群的CTCs的富集与检测，无法检测上皮间质混合型的CTCs，由于CTCs的异质性、动态演化等原因影响，单一类型的富集检测方法很大程度限制了CTCs的临床应用效果。为克服现有CTCs富集检测技术缺陷局限，本技术设计了一种设计组合合理、使用存放运输节约方便的上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒，确保上皮间质混合型、上皮型与间质型的CTCs进行富集捕获与检测试剂组合性能，从而为基于CTCs的肿瘤的精准治疗临床应用提供更加可靠的诊断、治疗和预后判断证据奠定基础。
技术实现思路
本技术的目的在于提供了一种上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒，该试剂盒设计组合合理、使用存放节约、运输方便的可以直接用于常温环境使用保存与运输的上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒，克服了低温保藏试剂繁琐的低温环境维持冷链运输储存及使用过程，节约储存运输使用能耗。确保了上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒中的试剂耗材组合用于上皮型、上皮间质混合型与间质型的CTCs富集捕获与检测过程的有效性。为弥补现有技术无法有效富集检测上皮间质混合型CTCs的缺陷，本技术的目的还在于利用上皮间质混合型循环肿瘤细胞特异性捕获抗体组合与检测特异性抗体试剂组合，提供一种简捷高效的上皮间质混合型CTCs的检测方式。本技术解决上述问题所采用的技术方案是：一种上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒，包括试剂盒盒体以及与所述试剂盒盒体配合的试剂盒盒盖，所述的试剂盒盒体内壁紧贴有保温隔水层，所述的试剂盒盒体内底部设有冷盒，所述的冷盒上设置有底盒，所述的底盒内设置有多个放置槽和多个放置孔，所述的多个放置槽内设置有螺旋样品室和微流控芯片，所述的多个放置孔内设置有多个试剂瓶，多个试剂瓶形成试剂瓶组。本技术中，所述的试剂盒盒体有保温隔水层，由底座隔断分为上下两层：试剂盒盒体上层为包括底座的试剂瓶、螺旋样品室和微流控芯片放置层，下层为冷盒放置层，所述底座上有若干个放置孔和放置槽，所述的试剂瓶组的试剂瓶依次放置在放置孔中、螺旋样品室和微流控芯片放置在放置槽中；所述的冷盒放置层，放置已经过低温冷冻处理的冷盒；所述的试剂瓶组采用上皮间质混合型CTCs捕获检测试剂组包括盛装在试剂板内的上皮间质混合型CTCs特异性捕获抗体组与盛装在试剂瓶组中的带有荧光标记物的上皮间质混合型CTCs特异性检测抗体组和反应体系辅助试剂。冷盒可在常温环境中维持试剂盒整体低温状态确保试剂性能，便于试剂盒的常温快捷保存、运输与使用。所述的放置孔大小与试剂瓶尺寸一一吻合对应，并且能够适当固定试剂瓶；所述的放置槽中有若干个隔断，每个隔断空间大小与单个螺旋样品室和单个微流控芯片的外包装尺寸对应，保证螺旋样品室和微流控芯片被放置槽适当卡住，不会随意移动或掉出，可更好地保护和固定螺旋样品室和微流控芯片。以下作为本技术的优选技术方案：所述的保温隔水层包括珍珠棉、覆合在所述珍珠棉上的铝箔以及贴合在所述铝箔上的PVC层，即所述的保温隔水层为双面贴合PVC含有珍珠棉覆合铝箔的防水隔热层，PVC为聚氯乙烯(Polyvinylchloride)。本技术所述试剂盒盒体内的保温隔水层为双面贴合PVC含有珍珠棉覆合铝箔的防水隔热层，保温时效可达18小时以上，同时可根据运输保存使用环境温度情况配合更换冷盒，更长时间维持所述试剂组与耗材的低温状态确保试剂性能。本技术所述的底座的材料为低密度发泡材料。低密度发泡材料质量轻，无污染，加工塑型方便，可重复使用，具有极好的防震抗冲击防潮性能，能有效固定以及保护试剂瓶组、螺旋样品室和微流控芯片。此外，发泡材料具有一定的低温保温性能可以协助维持试剂的低温状态。本技术所述的冷盒为无冰、无电源可重复使用的长效供冷冷源，可保证试剂盒使用、储藏与运输过程中的冷源供应，以持续维持低温环境。所述的试剂盒盒体通过所述底座隔断分为上下两层，上层为包括底座的试剂瓶组、螺旋样品室和微流控芯片放置层，下层为冷盒放置层。本技术所述的底座的放置孔为有底的圆孔，所述的放置槽为通槽。实际应用中，放置孔的形状是根据试剂瓶设计的，试剂瓶竖直放置在放置孔内，有底的圆孔便于加工且可以更好地吻合试剂瓶尺寸并保护试剂瓶；放置槽的形状是根据螺旋样品室和微流控芯片外包装的形状设计而成，为薄片状或长条状通槽本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒，包括试剂盒盒体以及与所述试剂盒盒体配合的试剂盒盒盖，其特征在于，所述的试剂盒盒体内壁紧贴有保温隔水层，所述的试剂盒盒体内底部设有冷盒，所述的冷盒上设置有底盒，所述的底盒内设置有多个放置槽和多个放置孔，所述的多个放置槽内设置有螺旋样品室和微流控芯片，所述的多个放置孔内设置有多个试剂瓶，多个试剂瓶形成试剂瓶组。/n

【技术特征摘要】
1.一种上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒，包括试剂盒盒体以及与所述试剂盒盒体配合的试剂盒盒盖，其特征在于，所述的试剂盒盒体内壁紧贴有保温隔水层，所述的试剂盒盒体内底部设有冷盒，所述的冷盒上设置有底盒，所述的底盒内设置有多个放置槽和多个放置孔，所述的多个放置槽内设置有螺旋样品室和微流控芯片，所述的多个放置孔内设置有多个试剂瓶，多个试剂瓶形成试剂瓶组。


2.根据权利要求1所述的上皮间质混合型循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于，所述的保温隔水层包括珍珠棉、覆合在所述珍珠棉上的铝箔以及贴合在所述铝箔上的PVC层。


3.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔莹，张开山，
申请(专利权)人：杭州华得森生物技术有限公司，
类型：新型
国别省市：浙江;33