miR-93抑制剂在制备修复牙本质的药物中的用途制造技术

本发明专利技术公开了一种用于修复牙本质的药物，属于牙本质再生药物领域。发明专利技术人通过研究发现，miR‑93的抑制剂具备促进牙本质再生的作用，其原理是通过抑制miR‑93来提高组蛋白去甲基化酶JMJD3的表达，调节牙髓细胞成牙本质向分化和牙本质的形成。本发明专利技术能促进天然牙本质再生，可作为盖髓术中所使用的盖髓剂，能克服现有盖髓剂所致牙髓弥漫性钙化、操作技术要求高、引起牙齿变色等问题，具备良好的应用前景。

The application of mir-93 inhibitor in the preparation of dentin restorative drugs

【技术实现步骤摘要】
miR-93抑制剂在制备修复牙本质的药物中的用途
本专利技术属于牙本质再生药物领域，尤其涉及miR-93抑制剂在制备修复牙本质的药物中的用途。
技术介绍
牙齿是人体中最坚硬的器官，外形上分为牙冠、牙颈和牙根三部分。结构组成上又分为牙釉质(珐琅质)、牙本质(象牙质)、牙髓(神经腺)等。牙釉质和牙本质保护牙髓组织，避免感染发生牙髓炎。机械损伤、龋坏或牙本质发育不全类疾病会造成牙本质缺损。当缺损暴露牙髓组织时，为修复和保留牙髓，常采用牙髓切断术，即切除感染的部分牙髓组织，在牙髓断面放置药物，促进牙髓断面形成修复性牙本质(reparativedentin)，保留下方活髓组织，从而最大限度保留牙齿正常组织，恢复牙齿功能；前述的药物被称为盖髓剂。提高盖髓剂的疗效，促进修复性牙本质的形成，是提高手术成功率的关键。目前常见的盖髓剂包括氢氧化钙试剂、三氧化矿物凝聚体(MTA)等。虽然其使用已有较长的历史，但也存在明显的问题，如形成的牙本质桥存在裂隙，可能引起牙髓弥漫性钙化，操作技术要求高，引起牙齿变色等。另外，现有的盖髓剂促进牙本质再生的能力不够理想。目前研究者们致力于研究新型生物材料，以促进牙本质的再生。其原理在于，牙髓组织中含有牙髓干细胞(humandentalpulpstemcells，hDPCs)，具有自我增殖和多向分化能力。在某些生物因子的调控下，可促使牙髓干细胞分化形成成牙本质细胞(odontoblast)，分泌牙本质基质，形成新的牙本质硬组织，即修复性牙本质(reparativedentin)。因此探索这类生物材料成为牙本质修复药物研究的方向。MicroRNA-93(miR-93)，也称为miR-93-5p，属于非编码短链RNA序列，可以通过靶向结合在基因mRNA的3’非编码区(3’UTR)，调节基因的表达，从而调控细胞的分化方向。研究发现miR-93可调控血管生成、免疫细胞功能、癌细胞生物性能等，而罕见其在牙齿硬组织生成及修复中的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供miR-93在制备修复牙本质的药物中的用途。本专利技术的技术方案包括：本专利技术首先提供了miR-93抑制剂在制备修复牙本质的药物中的用途。本专利技术的miR-93抑制剂，是指能通过碱基互补配对原理，降低牙髓干细胞内miR-93的活性的物质。如前述的用途，所述药物是诱导牙髓细胞分化形成成牙本质细胞的药物。优选地，所述药物是盖髓剂。盖髓剂，指的是在牙髓切断术中用于覆盖在牙髓断面，促进牙髓断面形成修复性牙本质的药物。如前述的用途，所述抑制剂的活性成分是：与miR-93碱基互补配对的核酸，或与miR-93的前体碱基互补配对的核酸。如前述的用途，所述抑制剂以病毒为载体，优选地，所述病毒是腺相关病毒。如前述的用途，所述miR-93抑制剂的活性成分是序列为CTACCTGCACGAACAGCACTTTG的核酸分子。本专利技术还提供了一种修复牙本质的药物，所述药物以miR-93抑制剂为活性成分。如前述的药物，所述药物是诱导牙髓细胞分化形成成牙本质细胞的药物。优选地，所述药物是盖髓剂。如前述的药物，所述抑制剂的活性成分是：与miR-93碱基互补配对的核酸，或与miR-93的前体碱基互补配对的核酸。如前述的药物，所述抑制剂以病毒为载体；优选地，所述病毒是腺相关病毒。如前述的药物，所述miR-93抑制剂的活性成分是序列为CTACCTGCACGAACAGCACTTTG的核酸分子。本专利技术修复牙本质的药物，通过抑制miR-93来诱导牙髓细胞分化为成牙本质细胞，分泌形成修复性牙本质，来实现牙本质再生。在构思上与现有盖髓剂不同，为牙本质再生提供新的治疗思路。本专利技术修复牙本质的药物，在动物模型中验证了受损牙齿能再生牙本质，可弥补现有盖髓剂在疗效上的不足，应用前景良好。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1：大鼠磨牙牙髓切断术模型的构建流程。取5周龄大鼠，麻醉固定后，术前清洁上颌第一磨牙，行颌面开髓，生理盐水冲洗，髓腔止血，髓腔内放置凝胶海绵，注射病毒药物，涂布粘接剂，注射并固化流体树脂，完成大鼠磨牙牙髓切断术模型的构建。图2：miR-93表达下调病毒药物促进修复性牙本质的形成。收集牙髓切断术后4周及6周的大鼠磨牙，microCT发现miR-93表达下调病毒的药物促进牙髓中修复性牙本质的形成，并且随观察时间的延长，修复性牙本质的生成增多。图3：miR-93表达下调病毒药物通过调控JMJD3表达调节修复性牙本质形成。收集牙髓切断术后6周的大鼠磨牙，免疫组化染色发现，miR-93表达下调病毒促进修复性牙本质的形成(图C’中*标记)。修复性牙本质周围成牙本质细胞中JMJD3蛋白表达升高(图C’中橙色箭头标记)。图4：人牙髓干细胞分化为成牙本质细胞过程中miR-93表达模式。A)光镜下显示人牙髓细胞形态；B)流式细胞术检测人牙髓细胞具有间充质干细胞表面标记物特征，即CD29阳性，CD90阳性，CD34阴性，CD45阴性；C)牙髓干细胞可矿化诱导形成成牙本质细胞，表达碱性磷酸酶(ALP)活性，分泌牙本质基质形成矿化结节；D)牙髓干细胞分化为成牙本质细胞过程中，miR-93表达下调；E)牙髓干细胞分化为成牙本质细胞过程中，JMJD3表达升高；F)牙髓干细胞分化为成牙本质细胞过程中，JMJD3的异构体UTX表达无明显变化。图5：miR-93表达下调病毒药物促进牙髓干细胞分化形成成牙本质细胞。A)转染病毒后牙髓细胞内表达GFP荧光，证实病毒转染进入细胞并稳定表达；B)qRT-PCR验证转染后细胞内miR-93表达下调；C)ALP和茜素红染色检测miR-93表达下调药物促进牙髓干细胞分化形成成牙本质细胞，并分泌形成基质矿化结节；D)miR-93表达下调药物促进牙髓细胞表达成牙本质向分化基因Osterix(OSX)；E)miR-93表达下调药物促进牙髓细胞表达成牙本质向分化基因Osteocalcin(OCN)。图6：miR-93通过调控靶基因JMJD3调控牙髓干细胞分化。A)转染后细胞中miR-93表达下调促进JMJD3基因的表达；B)miR-93表达下调对UTX的表达无明显调控作用；C)TargetScan及miRBase数据库预测miR-93靶向作用于JMJD3mRNA的位点及序列；D)双荧光素酶报告基因检测miR-93可靶向结合在JMJD3mRNA的3’UTR区域，抑制JMJD3的表达。具体实施方式实施例1miR-93表达下调病毒促进体内牙本质生成1.方法1.1质粒构建以及病本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.miR-93抑制剂在制备修复牙本质的药物中的用途。/n

【技术特征摘要】
1.miR-93抑制剂在制备修复牙本质的药物中的用途。


2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物是诱导牙髓细胞分化形成成牙本质细胞的药物；优选地，所述药物是盖髓剂。


3.如权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述抑制剂的活性成分是：与miR-93碱基互补配对的核酸，或与miR-93的前体碱基互补配对的核酸。


4.如权利要求3所述的用途，其特征在于：所述抑制剂以病毒为载体，优选地，所述病毒是腺相关病毒。


5.如权利要求3所述的用途，其特征在于：所述miR-93抑制剂的活性成分是序列为CTACCTGCACGAACAGCACTTTG的核酸分子。

【专利技术属性】
技术研发人员：周雅川，吴偲，高诗祺，周学东，郑黎薇，
申请(专利权)人：四川大学，
类型：发明
国别省市：四川;51