一种双功能血管生成抑制剂及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种双功能血管抑制剂，其具有VEGF抑制活性和FGF抑制活性，能够抑制VEGF和FGF双因子或者高糖诱导的细胞增殖、细胞迁移和/或管腔成形。本发明专利技术还涉及该双功能血管抑制剂抑制视网膜血管生成的用途，如糖尿病视网膜病变，年龄相关黄斑变性等。

A bifunctional angiogenesis inhibitor and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种双功能血管生成抑制剂及其用途
本专利技术涉及一种双功能血管生成抑制剂及其用途，具体涉及一种具有VEGF抑制活性和FGF抑制活性的融合蛋白及其在抑制VEGF和FGF双因子或者高糖诱导的细胞增殖、细胞迁移和/或管腔成形中的用途，如抑制视网膜血管生成血管新生相关眼部疾病，糖尿病视网膜病变，年龄相关黄斑变性等。
技术介绍
眼底新生血管是多种眼部疾病的严重并发症，新生血管可以在角膜、虹膜睫状体、脉络膜、视网膜、黄斑及视盘等几乎眼内所有组织中出现，它能够引起这些部位的组织出血、渗出及增生等一系列病理改变，因而造成眼球结构和功能的破坏，严重损害视功能。这一系列的眼底病变包括糖尿病视网膜病变(diabeticretinopathy，DR)、早产儿视网膜病(retinopathyofprematurity，ROP)、年龄相关性黄斑变性(age-relatedmaculardegeneration，AMD)等，严重影响视力，甚至致盲。研究表明，VEGF是目前所知对血管新生最特异、最有效的生长因子。1990年代以来，以VEGF为靶标，通过阻断VEGF信号通路抑制眼底血管新生的药物成为开发的热点。兰尼单抗(Ranibizumab，商品名Lucentis)可特异性地结合VEGF-A，已获美国FDA批准用于治疗湿性老年黄斑变性和糖尿病性黄斑水肿。VEGFTrap-Eye(阿柏西普或Eylea)是美国Regeneron制药公司开发的抗VEGF重组蛋白，临床研究结果显示对DME(糖尿病性黄斑水肿)的疗效令人满意，已递交治疗DME补充申请。KH902(康柏西普，Conbercept)是成都康弘公司开发的针对老年黄斑变性(AMD)的VEGFR-Fc重组蛋白，2013年12月批准上市用于治疗AMD。以VEGF为靶标的雷珠单抗等成功用于DR的临床研究和临床应用中表明VEGF是DR的主要有效靶标之一。尽管针对VEGF靶标的药物在临床上取得了很大的进展，由于血管新生受多种因子的调节，血管新生的调控是一个十分复杂的动态平衡过程。现有的药物在临床治疗中也存在很大的局限性，因此如何进一步提高抗血管新生的临床治疗效果是研究者需要解决的问题，也是研究开发下一代抗血管新生药物的重点。成纤维细胞生长因子(FGF)是一种结合肝素的生长因子家族，其在多种生物学功能上具有重要作用，例如细胞增殖、分化、迁移、血管新生和肿瘤发生。其通过结合并活化细胞表面FGF受体(FGFR)发挥其多种生物学功能。成纤维细胞生长因子受体(fibroblastgrowthfactorreceptor，FGFR)是与成纤维细胞生长因子(FGF)家族成员相结合的受体，其一部分参与疾病过程。申请人在专利CN201110131029.X公开了一种靶向VEGF和FGF的双特异性融合蛋白(专利CN201110131029.X的28#融合蛋白，以下简称VF28)，研究结果表明VF28融合蛋白具有良好的生物学活性，能够有效的靶向VEGF和FGF靶点，在治疗或预防肿瘤和/或眼科血管新生性疾病方面有显著的疗效。但是，在研究过程中发现，制备的VF28随着保存时间的延长存在活性不稳定的问题，在开展的3批次VF28原液长期试验中(-80℃±10℃长期试验条件)，放置0时、1个月、3个月、6个月，进行结合活性(ELISA法)分析，数据显示，在1个月、3个月、6个月各监测时间点分别有1批次、2批次、3批次VF28原液结合活性检测结果不符合评价标准要求(FGF端的结合活性不符合导致)；在开展的3批VF28成品加速试验条件稳定性试验中，25℃±2℃加速试验条件下放置1个月，进行细胞活性分析。结果显示：三个批次中有一个批次的VF28成品细胞活性检测结果超出评价标准要求，不符合评价标准要求。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供了一种改构的、靶向VEGF和FGF的双功能血管生成抑制剂RC28-05，其不仅具有良好的生物学活性，能够有效的抑制视网膜血管生成，在诸如糖尿病视网膜病变，年龄相关黄斑变性等眼部疾病中有显著的疗效，并且制备的产品保存稳定，不易降解，对储藏温度、环境等要求较低。具体的，本专利技术提供了一种双功能血管生成抑制剂，其具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。进一步的，所述的双功能血管生成抑制剂，具有VEGF抑制活性和FGF抑制活性。进一步的，所述的双功能血管生成抑制剂，能够抑制VEGF和FGF双因子或者高糖诱导的细胞增殖、细胞迁移和/或管腔成形。本专利技术提供了上述双功能血管生成抑制剂在制备用于抑制视网膜血管生成的药物中的用途。进一步的，提供了上述双功能血管生成抑制剂在制备用于治疗血管新生相关眼部疾病的药物中的用途。优选的，所述血管新生相关眼部疾病选自：年龄相关性黄斑变性例如干性AMD和湿性AMD，糖尿病视网膜病变例如非增殖型DR、增殖型DR和DME，糖尿病性黄斑水肿，早产儿视网膜病和视网膜血管阻塞。进一步的，提供了上述双功能血管生成抑制剂在糖尿病对象中改善视网膜损伤之药物中的用途。优选的，所述的视网膜损伤为短期视网膜损伤。进一步的，所述短期视网膜损伤选自减少视网膜血管网中凋亡细胞的数量、降低血-视网膜屏障的渗漏、抑制视网膜胶质细胞反应性增生、以及改善神经视网膜和视网膜血管的超微结构。优选的，所述的视网膜损伤为长期视网膜损伤。进一步的，所述长期视网膜损伤选自改善视网膜屏障渗漏以及抑制毛细血管基底膜的增厚。进一步的，提供了上述双功能血管生成抑制剂在制备用于在视网膜病对象中改善视网膜无血管灌注区或者降低视网膜新生血管细胞核数之药物中的用途，优选的，视网膜病对象为早产儿。进一步的，提供了上述双功能血管生成抑制剂在制备用于在对象中降低视网膜血管内皮细胞增殖、移行和/或管腔形成之药物中的用途。本专利技术还提供了一种包含编码双功能血管生成抑制剂的核苷酸序列的分离的多核苷酸，其中所述双功能血管生成抑制剂的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，其核苷酸序列如SEQIDNO:3所示的。本专利技术还提供了一种包含上述多核苷酸的核酸构建体，所述多核苷酸可操作地连接于一个或几个调控序列，所述调控序列指导所述多肽在表达宿主中的产生。本专利技术还提供了一种包含上述多核苷酸的载体，优选的，所述载体为表达载体，所述的多核苷酸可操作地连接于一个或多个调控序列，所述调控序列指导所述多肽在表达宿主中的产生。本专利技术还提供了一种包含上述多核苷酸或核酸构建体或表达载体的宿主细胞，所述多核苷酸可操作地连接于一个或多个调控序列，所述调控序列指导多肽的产生。优选的，所述细胞为哺乳动物细胞或人源细胞。更优选的，所述细胞为CHO细胞。本专利技术还提供了一种制备所述的双功能血管生成抑制剂的方法，该方法包括在允许表达该双功能血管生成抑制剂的条件下培养前述任一项所述的宿主细胞，并且回收该抑制剂。本专利技术还提供了一种包含前述任一项所述的多肽和/或载体的药物组合物。本专利技术还提供了一种包含上述组合物的试剂盒。附图说明本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种双功能血管生成抑制剂，其具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181207 CN 20181149102311.一种双功能血管生成抑制剂，其具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。


2.一种分离的包含编码双功能血管生成抑制剂的核苷酸序列的多核苷酸，其中所述双功能血管生成抑制剂的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。


3.权利要求2所述的多核苷酸，其具有SEQIDNO:3所示的核苷酸序列。


4.一种核酸构建体，其包含权利要求2或3所述的多核苷酸，所述多核苷酸可操作地连接于一个或多个调控序列，所述调控序列指导所述多肽在表达宿主中的产生。


5.一种载体，其包含权利要求2或3所述的多核苷酸，其中权利要求2或3所述的多核苷酸可操作地连接一个或多个调控序列。


6.权利要求5所述的载体，所述载体为表达载体，所述调控序列指导所述多肽在表达宿主中的产生。


7.一种宿主细胞，其包含权利要求2或3所述的多核苷酸或权利要求4所述的核酸构建体或权利要求6所述的表达载体，所述多核苷酸可操作地连接于一个或多个调控序列，所述调控序列指导多肽的产生。


8.权利要求7所述的宿主细胞，所述细胞为哺乳动物细胞或人源细胞；所述哺乳动物细胞进一步优选为CHO细胞。


9.一种药物组合物，其特征在于所述药物组合物包含如权利要求1中所述的多肽或权利要求2或3中所述的多核苷酸或权利要求4中所述的核酸构建体或权利要求5或6中所述的载体。


10.一种试剂盒，其特征在于所述试剂盒包含权利要求9所述的药物组合物。


11.权利要求1所述的双功能血管生成抑制剂或权利要求2或3所述的多核苷酸或权利要求4所述的核酸构建体或权利要求5或6所述的载体在制备用于抑制VEGF和FGF双因子或者高糖诱导的细胞增殖、细胞迁移和/或管腔成形中的药物中的用途。


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【专利技术属性】
技术研发人员：姜静，房健民，栾雪晶，姚雪静，王凌，
申请(专利权)人：荣昌生物制药烟台有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37