一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基及其制备方法技术

一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基及其制备方法，属于微生物技术领域。该贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基是由原料溶于纯水后灭菌稀释，调节PH得到的，其中原料包括牛肉浸出粉2.4‑3.0g/L、蛋白胨8.0‑10.0g/L、氯化钠4.0‑5.0g/L和磷酸氢二钾4.0‑5.0g/L。该大肠埃希氏菌悬浮培养基在温度35℃±1℃，湿度不小于90%的条件下培养24h，可以达到回收菌数不明显增殖或抑制的效果。应用于贴膜法检测抗菌性能的过程中，确保抗菌性能试验条件有效，测试结果准确。

A suspension medium of Escherichia coli and its preparation method

【技术实现步骤摘要】
一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基及其制备方法
本专利技术属于微生物
，具体涉及一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基及其制备方法。
技术介绍
随着工业化的不断发展和人民生活水平的不断提高，人民对抗菌物品的需求也越来越旺盛。无论是建筑抗菌材料地板瓷砖水管等，还是生活厨房用品砧板陶瓷罐等，都投入了大量的人力物力来研究和制备使其具有抗菌性能，并制定了相应的抗菌检测标准。其中GB/T31402-2015《塑料表面抗菌性能试验方法》、LY/T1926-2010《抗菌木（竹）质地板抗菌性能检验方法与抗菌效果》、JC/T939-2004《建筑用抗菌塑料管抗细菌性能》等抗菌性能测试中都采用了贴膜法来测定抗菌率。其原理都是通过定量接种细菌于待测样品上，用贴膜的方法使细菌均匀接触样品，经过一定时间的培养后（一般为24h），测得样品中的活菌数，并计算出样品的抗菌率。而将细菌与样品贴膜接触培养时则需用到悬浮培养基。为做到抗菌性能测试准确有效，则需要细菌在整个接触过程中，除受样品本身因素外，不产生增殖或抑制作用。LY/T1926-2010、JC/T939-2004、GB/T31402-2015使用悬浮培养基基本原理一致，但配方和浓度均有所不同，且在日常检测中出现培养后菌落出现明显增殖现象。而且适用于贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌专用培养基还未有相关研究。
技术实现思路
针对上述现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于设计提供一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基及其制备方法。本专利技术以贴膜法检测抗菌性能对大肠埃希氏菌回收菌要求入手，开发适用于贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基，该培养基在温度35℃±1℃、湿度不小于90%的条件下培养24h，不产生明显增殖或者抑制作用。为了实现上述目的，采用以下技术方案：所述的一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基，其特征在于由原料溶于纯水后灭菌稀释，调节PH得到，所述原料包括牛肉浸出粉2.4-3.0g/L、蛋白胨8.0-10.0g/L、氯化钠4.0-5.0g/L和磷酸氢二钾4.0-5.0g/L。所述的一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基，其特征在于所述稀释的体积倍数为800-1200倍。所述的一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基，其特征在于所述PH调节至6.8-7.2。所述的一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤：（1）称取原料，所述原料包括牛肉浸出粉2.4-3.0g/L、蛋白胨8.0-10.0g/L、氯化钠4.0-5.0g/L和磷酸氢二钾4.0-5.0g/L，混合溶解于纯水中，高压灭菌，得到培养基母液；（2）纯水稀释步骤（1）所述培养基母液，用无菌的NaOH或HCl溶液调节PH，得到大肠埃希氏菌悬浮培养基。所述的一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基的制备方法，其特征在于所述步骤（1）中高压灭菌条件为：灭菌温度121℃，灭菌时间15-30min。所述的一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基的制备方法，其特征在于所述步骤（2）中稀释体积倍数为800-1200倍。所述的一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基的制备方法，其特征在于所述步骤（2）中PH调节至6.8-7.2。所述的培养基在贴膜法检测抗菌性能上的应用。利用本专利技术大肠埃希氏菌悬浮培养基在温度35℃±1℃，湿度不小于90%的条件下培养24h，可以达到回收菌数不明显增殖或抑制的效果。应用于贴膜法检测抗菌性能的过程中，确保抗菌性能试验条件有效，测试结果准确。附图说明图1为0h和24h大肠埃希氏菌回收菌数。具体实施方式以下将通过具体实施例和附图对本
技术实现思路
作进一步说明。实施例：1、制备大肠埃希氏菌悬浮培养基：（1）称取牛肉浸出粉3.0g、蛋白胨10.0g、氯化钠5.0g和磷酸氢二钾5.0g溶入1000mL纯水中，121℃高压灭菌15-30min,得到培养基母液。（2）将培养基母液用纯水稀释至100-1500倍不同体积，用无菌的NaOH或HCl溶液调节pH至6.8-7.2，得到大肠埃希氏菌悬浮培养基，可用于后续贴膜法检测抗菌性能试验。2、试验菌株：大肠埃希氏菌ATCC25922，取第2-5代的营养琼脂培养基斜面18-24h新鲜培养物，用5mL0.03mol/L磷酸缓冲液反复冲洗斜面，洗下菌苔，振荡混匀，稀释至108CFU/mL。再用步骤1得到的大肠埃希氏菌悬浮培养基稀释，使细菌的浓度在1.0×105CFU/ml-10.0×105CFU/ml,用做接种液。3、接种培养：选用一次性培养皿作为对照样品，吸取接种液0.4mL滴加在培养皿中心，取40mm×40mm无菌薄膜盖于接种液上，并向下轻轻按压薄膜使菌液向四周扩散，确保菌液不要从薄膜边缘溢出，盖上培养皿盖。放置于恒温恒湿培养箱中，温度35℃±1℃，相对湿度不小于90%的条件下，培养24±1h。4、细菌回收：接种后，分别对0h接触时间和24h接触时间培养皿进行细菌回收。在各培养皿中加入10ml浓度0.85%生理盐水进行充分冲洗，然后进行10倍梯度稀释，并取各梯度稀释液1ml至培养皿里。在每个培养皿中注入15ml温度45℃的营养琼脂，轻轻摇晃以分散细菌。倒置培养皿，并于35℃±1℃的培养箱里培养48h。培养后，对培养血中菌落数在30-300之间的菌落进行计数。记下每个稀释度培养血上的菌落数并保留2位有效数字,记录稀释倍数，并计算测得细菌数，得到结果如图1。经对0h接触时间和24h接触时间培养皿进行细菌回收进行比较分析，该悬浮培养基母液稀释体积倍数为800-1200倍范围内，在温度35℃±1℃、湿度不小于90%的条件下培养24h，可以达到回收菌数不明显增殖或抑制的效果。本专利技术并不局限于前述的具体实施方式。本专利技术扩展到任何在本说明书中披露的新特征或任何新的组合，以及披露的任一新的方法或过程的步骤或任何新的组合。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基，其特征在于由原料溶于纯水后灭菌稀释，调节PH得到，所述原料包括牛肉浸出粉2.4-3.0g/L、蛋白胨8.0-10.0g/L、氯化钠4.0-5.0g/L和磷酸氢二钾4.0-5.0g/L。/n

【技术特征摘要】
1.一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基，其特征在于由原料溶于纯水后灭菌稀释，调节PH得到，所述原料包括牛肉浸出粉2.4-3.0g/L、蛋白胨8.0-10.0g/L、氯化钠4.0-5.0g/L和磷酸氢二钾4.0-5.0g/L。


2.如权利要求1所述的一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基，其特征在于所述稀释的体积倍数为800-1200倍。


3.如权利要求1所述的一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基，其特征在于所述PH调节至6.8-7.2。


4.一种贴膜法检测抗菌性能用大肠埃希氏菌悬浮培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）称取原料，所述原料包括牛肉浸出粉2.4-3.0g/L、蛋白胨8.0-10.0g/L、氯化钠4.0-5.0g/L和磷酸氢二钾4.0-5...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘鹏鹏，周志南，吴渊，夏琪琪，盛华栋，张水锋，
申请(专利权)人：浙江方圆检测集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33