一种免核酸提取的病毒保存液制造技术

本发明专利技术公开了一种免核酸提取的病毒保存液，包含A组分和B组分，其中A组分包含：酸性缓冲液、吐温20和酸性蛋白酶；其中，酸性缓冲液的摩尔浓度为20mM‑100mM，pH在1.0‑5.0，吐温20的体积百分比为0.1％‑2％，酸性蛋白酶的浓度为0.1‑100mg/mL；B组分包含：中性或偏碱性缓冲液，其浓度为0.5‑1M，pH为7.0‑9.0。本发明专利技术的保存液可用保存RNA病毒和DNA病毒，在保存的过程中病毒感染力被严重减弱，甚至完全丧失感染力，并且保存液可以直接用来进行病毒核酸扩增，无效进行核酸提取。

A virus preservation solution free from nucleic acid extraction

【技术实现步骤摘要】
一种免核酸提取的病毒保存液
本专利技术涉及分子生物学
，具体涉及一种既能保存病毒样品又能直接用于核酸扩增的保存液。
技术介绍
病毒(Virus)是一种具有比较原始的生命形态和生命特征的非细胞生物，通常由基因组和外壳蛋白构成。通常病毒具有如下特点：形体微笑，缺乏细胞结构；只含有一种核酸，DNA或者RNA；依靠自身核酸进行复制；缺乏完整的酶和能量系统；严格的细胞内寄生。从遗传物质分类，病毒可以分为DNA病毒、RNA病毒、蛋白质病毒(如:朊病毒)。从病毒结构上来看，病毒可以分为真病毒(Euvirus，简称病毒)和亚病毒(Subvirus，包括类病毒、拟病毒、朊病毒)。从寄主类型上看，病毒可以分为噬菌体(细菌病毒)、植物病毒(如烟草花叶病毒)、动物病毒(如禽流感病毒、天花病毒、HIV等)。从病毒性质来分，病毒可以分为温和病毒(例如HIV)、烈性病毒(例如狂犬病毒)。从病毒形态上来分，病毒可以分为球状病毒、杆状病毒、砖形病毒、冠状病毒、丝状病毒、轮状病毒、有包膜的球状病毒、具有球状头部的病毒、封于包含体内的昆虫病毒等。目前，国际病毒分类委员会正式批准的病毒分类系统有3个目，62个科。病毒在自然界分布广泛，可感染细菌、真菌、植物、动物和人，常引起宿主发病。例如麻疹病毒可以引起宿主比如人呼吸道疾病，肝炎病毒可以引发宿主肝炎。2003年爆发的SARS和2020年初爆发的冠状病毒肺炎，造成大量人员感染，给我国造成了沉重的经济负担。为了研究病毒的分类地位、致病机理等，需要从宿主生物中分离保存病毒。科研人员经过不懈努力开发出了病毒保存液，用来保存病毒。第一代病毒保存液，病毒的致病性并未得到衰减，在研究、运输过程中存在被感染的风险。为此，研究人员又开发了第二代保存液，在该保存液中，病毒的被灭活，致病性得以衰减，或完全灭活，因此安全运输，但是这种保存液并不适合用来直接分析，比如直接用来进行核酸扩增分析，往往还需要进行复杂的核酸提取过程。在临床检测中，往往又需要直接用保存于保存液中的样品直接进行核酸扩增分析。由此可见，本领域急需即可以灭活病毒又可以直接用于核酸扩增无需核酸提取的病毒保存液。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种既可以保存病毒，又可以直接用于核酸扩增无需核酸提取的病毒保存液，从而解决现有技术存在的保存液难以直接用于核酸扩增的技术问题。本专利技术的目的及其技术问题的解决是通过以下技术方案实现的。一方面，本专利技术提供了一种免核酸提取的病毒保存液，包含A组分和B组分，其中A组分包含：酸性缓冲液、吐温20和酸性蛋白酶；其中，酸性缓冲液的摩尔浓度为20mM-100mM，pH在1.0-5.0，吐温20的体积百分比为0.1％～2％，酸性蛋白酶的浓度为0.1-100mg/mL；B组分包含：中性或偏碱性缓冲液，其浓度为0.5-1M，pH为7.0-9.0。在一个实施方案中，病毒为RNA病毒或DNA病毒。在另一方面，本专利技术提供了一种病毒核酸扩增方法，包括以下步骤：1)将病毒样品保存于上述A组分中；2)将1)的保存有病毒样品的A组分与权利要求1-5中任一项所述的B组分混合均匀，于室温下放置1-20分钟，和3)将2)的混合溶液加载到核酸扩增仪中进行核酸扩增。在一个实施方案中，A组分与B组分按1:1体积比混合。与现有技术相比，本专利技术具有突出的有益技术效果。从上述技术方案可知，本专利技术至少具有以下有点：本专利技术的病毒保存液，适用范围广，可以适用于保存RNA病毒和DNA病毒，在保存的过程中病毒感染力被严重减弱，甚至完全丧失感染力；另一方面本专利技术的病毒保存液在保存有病毒样品的情况下，可以直接用来进行核酸扩增，进行序列分析，避免提取病毒DNA的复杂过程。具体实施方式下面将结合具体实施方案对本专利技术的技术方案进行清楚、完整的描述，但是本领域技术人员应当理解，下文所述的实施方案仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。基于本专利技术中的实施方案，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方案，都属于本专利技术保护的范围。众所周知，病毒根据其遗传物质可以分为DNA病毒、RNA病毒以及蛋白质病毒如朊病毒。根据其感染宿主，病毒可以分为细菌病毒、植物病毒、动物病毒。本专利技术的免核酸提取的病毒保存液可以用来保存植物病毒和动物病毒。在本专利技术的实施方案中，植物病毒包括但不限于例如呼肠孤病毒科例如烟草花叶病毒、甘蔗花叶病毒、黄瓜花叶病毒、玉米线条病毒、香蕉束顶病毒、水仙潜隐病毒、马铃薯卷叶病毒、马铃薯A病毒、马铃薯S病毒、甘薯羽状斑驳病毒、水稻草矮病毒、水稻瘤矮病毒等。在本专利技术的实施方案中，动物病毒，包括但不限于牛痘病毒、疱疹病毒科病毒(Herpesviridae)、单纯疱疹病毒、EB病毒(Epstein-Barrvirus)、人腺病毒、人乳头瘤病毒、乙型肝炎病毒、逆转录病毒科(例如人免疫缺陷病毒)、轮状病毒、丝状病毒科病毒(Filoviridae)(如马尔堡病毒和埃博拉病毒)、登革热病毒、流感病毒、汉坦病毒、严重急性呼吸综合征冠状病毒、肠病毒、犀牛病毒、肝炎病毒、诺如病毒、诺瓦克病毒、甲病毒(Alphavirus)、基孔肯雅病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、西部马脑炎病毒、东部马脑炎病毒、圣路易斯脑炎病毒、西尼罗河病毒、黄热病病毒和克罗伊茨费尔特-雅各布病、虫媒病毒、黄病毒(Flavivirus)、非洲猪瘟病毒和RNA病毒。在本专利技术的实施方案中，病毒样品可以是上述病毒的样品，例如含有上述病毒的拭子，例如咽拭子、鼻拭子、口腔拭子、肛拭子、创口拭子；体液，例如血液、淋巴液、灌洗液、泪液、唾液、痰、尿液、粪便或其他形式的样品。在本专利技术的免核酸提取的病毒保存液的实施方案中，在A组分中，酸性缓冲液的摩尔浓度为20mM-100mM，pH在1.0-5.0。在具体实施方案中，酸性缓冲液的摩尔浓度可以为25mM、30mM、35mM、40mM、45mM、50mM、55mM、60mM、65mM、70mM、75mM、80mM、85mM、90mM、95mM、100mM，其pH可以为1.1-4.9、1.2-4.8、1.3-4.7、1.4-4.6、1.5-4.5、1.6-4.4、1.7-4.3、1.8-4.2、1.9-4.1、2.0-4.0、2.1-3.9、2.2-3.8、2.3-3.7、2.4-3.6、2.5-3.5、2.6-3.4、2.7-3.3、2.8-3.2、2.9-3.1。在本专利技术的具体实施方案中，酸性缓冲液可以为乙酸-乙酸钠缓冲液，例如0.1M的乙酸-乙酸钠缓冲液，pH2.0。在酸性条件下，酸性蛋白酶保持高活性，可以降价病毒使其毒力下降或变成无毒。在本专利技术的实施方案中，在A组分中，吐温20的体积百分比为0.1-2％，例如0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免核酸提取的病毒保存液，其特征在于，包括A组分和B组分，其中A组分包含：/n酸性缓冲液、吐温20和在酸性条件下有活性的蛋白酶；其中，酸性缓冲液的摩尔浓度为20mM-100mM，pH在1.0-5.0，吐温20的体积百分比为0.1％～2％，酸性蛋白酶的浓度为0.1-100mg/mL；/nB组分包含：中性或偏碱性缓冲液，其浓度为0.5-1M，pH为7.0-9.0。/n

【技术特征摘要】
1.一种免核酸提取的病毒保存液，其特征在于，包括A组分和B组分，其中A组分包含：
酸性缓冲液、吐温20和在酸性条件下有活性的蛋白酶；其中，酸性缓冲液的摩尔浓度为20mM-100mM，pH在1.0-5.0，吐温20的体积百分比为0.1％～2％，酸性蛋白酶的浓度为0.1-100mg/mL；
B组分包含：中性或偏碱性缓冲液，其浓度为0.5-1M，pH为7.0-9.0。


2.根据权利要求1所述的病毒保存液，其特征在于，在A组分中，所述酸性缓冲液为乙酸-乙酸钠缓冲液。


3.根据权利要求1所述的病毒保存液，其特征在于，在A组分中，所述酸性蛋白酶为胃蛋白酶、胰蛋白酶或黑曲霉酸性蛋白酶。


4.根据权利要求1所述的病毒保存液，其特征在于，在B组分中，所述中性或偏碱缓冲液为Tris-HCl或Tris-乙酸。


5.根据权利要求1所述的病毒保存液，其特征在于所述病毒为RNA病毒或DNA病毒。


6.一种病毒核酸扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)将病毒样品保存于权利要求1-5中任一项所述的A组分中；
2)将1)的保存有病毒样品的A组分与权利要求1-5中任一项所述的B组分混合均匀，于室温下放置1-20分钟，和
3)将2)的混合溶液加载到核酸扩增仪...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐堤，
申请(专利权)人：北京天恩泽基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11