一种基于微生物测试片评价抑菌效果的试剂盒及其方法技术

一种基于微生物测试片评价抑菌效果的试剂盒及其方法，属于抑菌效果检测技术领域。本发明专利技术试剂盒包括五个单元：指示菌种、微生物测试片、无菌稀释瓶、无菌移液枪头H和酸度调节剂。评价抑菌效果的方法包括以下步骤：（1）制备菌悬液；（2）制备抑菌液；（3）制备混合液；（4）取混合液滴加至微生物测试片上；（5）放入培养箱中恒温培养，观察微生物测试片上微生物数量。基于微生物测试片简单、方便等优点，本发明专利技术试剂盒及基于微生物测试片评价抑菌效果的方法可以方便快捷地筛选出有效的单体或复配抑菌剂，适用范围广、操作便捷简单并有利于大规模推广。

A kit and its method to evaluate bacteriostatic effect based on microbiological test piece

【技术实现步骤摘要】
一种基于微生物测试片评价抑菌效果的试剂盒及其方法
本专利技术属于抑菌效果检测
，具体涉及一种基于微生物测试片评价抑菌效果的试剂盒及其方法。
技术介绍
防腐保鲜是一个系统工程，影响微生物生长的因素有营养成分、水分含量、水分活度、pH值、温度、抑菌剂成分、包装方式等。其中如何科学快速筛选出有效的防腐抑菌剂及合适比例，决定着研发产品的保质期和产品质量。传统抑菌剂抑菌效果评价方法主要有肉汤稀释法和琼脂扩散法，但都存在操作繁琐、专业化程度高等问题，不利于非专业研发人员的使用。防腐剂是指天然或合成的化学成分，用于加入食品、药品、颜料、生物标本等，以延迟微生物生长或化学变化引起的腐败。常用的化学防腐剂有苯甲酸及其钠盐、山梨酸及其钾盐、脱氢乙酸及其钠盐、丙酸及其钠盐、钙盐等，生物防腐剂有乳酸链球菌素、纳他霉素、ε-聚赖氨酸及其盐酸盐等，除以上常见的防腐剂，肉桂提取物、甘草提取物等植物提取物存在一定的抑菌功效。不同防腐剂抑菌谱及抑菌效果差异很大，因此如何更简便的测定出防腐剂或有抑菌功效的抑菌剂对微生物的抑菌效果直接决定防腐剂的应用合理性。微生物测试片是应用传统的微生物培养方法和现代生物鉴定技术相结合的新型检测技术，测试片的载体中含有可供目标生长的营养成分，以及能够与目标生长过程中的特定产物发生反应而改变颜色的显色底物，通过直接观察菌落颜色即可对菌类作出鉴定，是一种简单、方便的检测方法，节省了操作人员清洗器皿、配制培养基、处置废弃物等工作。基于微生物测试片简单、方便等优点，同时为了方便、快捷的筛选出有效的单体或复配抑菌剂，现专利技术了一种用于评价抑菌剂抑菌效果的试剂盒，适用范围广，操作简单、便捷，利于大规模推广。同时较传统的肉汤稀释法、琼脂扩散法等，该评价方法操作更加简便，专业化需求明显降低。
技术实现思路
针对上述现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于设计提供一种基于微生物测试片评价抑菌效果的试剂盒及其方法。本专利技术试剂盒搭配移液枪、pH计、电子天平和恒温培养箱，采用本专利技术评价抑菌效果的方法，可以比较不同抑菌剂对微生物的抑菌效果，或筛选有效单体或复配抑菌剂。为了实现上述目的，本方法采用以下技术方案：一种基于微生物测试片评价抑菌效果的试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括：试剂盒单元A：指示菌种；试剂盒单元B：微生物测试片；试剂盒单元C：无菌稀释瓶；试剂盒单元D：无菌移液枪头；试剂盒单元E：酸度调节剂。所述的一种基于微生物测试片评价抑菌效果的试剂盒，其特征在于所述指示菌种为经冷冻干燥制得，所述指示菌种包括细菌、霉菌或酵母菌，所述细菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、乳杆菌、大肠杆菌或金黄色葡萄球菌，所述霉菌为黑曲霉或黄曲霉，所述酵母菌为酿酒酵母或白假丝酵母。所述的一种基于微生物测试片评价抑菌效果的试剂盒，其特征在于所述酸度调节剂为柠檬酸、苹果酸、醋酸、柠檬酸钠或碳酸钠。一种基于微生物测试片评价抑菌效果的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）制备菌悬液：取试剂盒中的指示菌种，加入5ml纯净水，充分混匀备用；（2）制备抑菌液：称取0.1-5g抑制剂，加入纯净水10-1000ml，采用酸度调节剂调整PH值为3-9，充分摇匀备用；（3）取试剂盒中的无菌稀释瓶，加入36-40g纯净水、4-5ml步骤（2）得到的抑菌液和0.5ml步骤（1）得到的菌悬液，充分摇匀，得到混合液；（4）取1ml步骤（3）得到的混合液采用无菌移液枪头滴加至试剂盒中的微生物测试片上，放置2-5min；（5）将步骤（4）得到的微生物测试片放入培养箱中恒温培养，然后观察微生物测试片上微生物数量。所述的一种基于微生物测试片评价抑菌效果的方法，其特征在于所述步骤（5）中恒温培养条件为：菌种为细菌的微生物测试片培养温度35-37℃，培养时间24-48h，菌种为霉菌或酵母菌的微生物测试片培养温度25-30℃，培养时间2-4d。本专利技术具有以下有益效果：基于微生物测试片简单、方便等优点，本专利技术试剂盒及基于微生物测试片评价抑菌效果的方法可以方便快捷地筛选出有效的单体或复配抑菌剂，适用范围广、操作便捷简单并有利于大规模推广。附图说明图1为无抑菌剂时枯草芽孢杆菌感染菌落图；图2为添加0.02g/LNISIN抑菌剂时枯草芽孢杆菌感染菌落图；图3为添加0.04g/LNISIN抑菌剂时枯草芽孢杆菌感染菌落图；图4为添加0.08g/LNISIN抑菌剂时枯草芽孢杆菌感染菌落图；图5为样品1抑菌剂、样品2抑菌剂和对照组的抑菌效果对比图。具体实施方式以下结合附图与实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1：试验材料：试剂盒（含指示菌种：枯草芽孢杆菌）、娃哈哈纯净水（市购，596ml/瓶）、称量纸、量程200-1000μl移液枪、电子天平（量程：500g；精度：0.001g）、恒温培养箱。试剂盒：试剂盒单元A：指示菌种，枯草芽孢杆菌，将枯草芽孢杆菌在PCA培养基上划线培养，用无菌生理盐水制成浓度为5-6lgCFU/ml的菌悬液，取0.5ml菌悬液、0.8ml脱脂乳于10ml西林瓶中，-80℃冷冻10-20h后于冷冻干燥机上进行冷冻干燥处理10-20h，制备完成的枯草芽孢杆菌菌粉可于常温保存。试剂盒单元B：微生物测试片，3片，提供目标菌生长的营养成分。试剂盒单元C：无菌稀释瓶，50ml量程，用于抑菌液、菌悬液的比例混合等。试剂盒单元D：无菌移液枪头，10个，搭配移液枪使用，转移抑菌液、菌悬液等液体。试剂盒单元E：酸度调节剂，用于调节抑菌液的pH值。实施例2：使用实施例1中的试验材料进行NISIN不同用量的抑菌效果评价试验。（1）菌悬液制备：在生物安全柜中进行试验操作，用移液枪取5ml无菌生理盐水于无菌试管中；用接种针从培养皿中取培养好的枯草芽孢杆菌于无菌水中，并用振荡器充分混匀。用菌落计数法测定初始菌悬液浓度，根据测定结果对初始菌悬液进行稀释至2-6lgCFU/ml。（2）抑菌液制备：称取0.32g乳酸链球菌素（1000IU/mg）于无菌蓝盖瓶中，加入500ml无菌水充分混匀，NISIN浓度为0.64g/L，对初始NISIN溶液进行逐步对倍稀释，配成浓度为0.32g/L、0.16g/L、0.08g/L、0.04g/L、0.02g/L,采用酸度调节剂调节PH3-9。（3）混合液：向7根准备好含有5ml菌悬液的试管分别加入制备好的抑菌液5ml，无菌水代替保鲜液添加作为对照组，充分混匀。最终混合液的NISIN浓度为0.32g/L、0.16g/L、0.08g/L、0.04g/L、0.02g/L、0g/L。（4）混合液滴加：取1ml混合液滴加至微生物测试片上，放置2-5min，待混合液完全被吸收。（5）培养：将微生物测试片置于36℃生化培养箱中培养。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于微生物测试片评价抑菌效果的试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括：/n试剂盒单元A：指示菌种；/n试剂盒单元B：微生物测试片；/n试剂盒单元C：无菌稀释瓶；/n试剂盒单元D：无菌移液枪头；/n试剂盒单元E：酸度调节剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于微生物测试片评价抑菌效果的试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括：
试剂盒单元A：指示菌种；
试剂盒单元B：微生物测试片；
试剂盒单元C：无菌稀释瓶；
试剂盒单元D：无菌移液枪头；
试剂盒单元E：酸度调节剂。


2.如权利要求1所述的一种基于微生物测试片评价抑菌效果的试剂盒，其特征在于所述指示菌种为经冷冻干燥制得，所述指示菌种包括细菌、霉菌或酵母菌，所述细菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌、乳杆菌、大肠杆菌或金黄色葡萄球菌，所述霉菌为黑曲霉或黄曲霉，所述酵母菌为酿酒酵母或白假丝酵母。


3.如权利要求1所述的一种基于微生物测试片评价抑菌效果的试剂盒，其特征在于所述酸度调节剂为柠檬酸、苹果酸、醋酸、柠檬酸钠或碳酸钠。


4.一种基于微生物测试片评价抑菌效果的方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑柏根，黄亦存，吴佳艳，周玥，
申请(专利权)人：浙江圣达生物研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33