提供了一种重组人碱性成纤维细胞生长因子（rh‑bFGF）的突变核酸分子，和所述rh‑bFGF的药物组合物及其用途。
Recombinant human basic fibroblast growth factor (RH bFGF) and pharmaceutical composition containing RH bFGF
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)以及包含rh-bFGF的药物组合物
本专利技术涉及DNA重组和生物制药领域。更具体地，本专利技术涉及编码重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human-basic fibroblast growth factor，rh-bFGF)的突变核酸分子、包含所述rh-bFGF的药物组合物以及所述药物组合物用于治疗干眼症的用途。
技术介绍
干眼症是指任何原因造成的泪液质量异常或动力学异常，导致泪膜稳定性下降，并伴有眼部不适和/或眼表组织病变的多种疾病的总称，又称角结膜干燥症。当泪膜液性泪液产生减少，粘液分泌异常，和睑板腺功能障碍等各种原因，引起泪膜各成分的绝对和相对缺乏，眼表泪液分布异常，泪液蒸发增加时，可以引起干眼症。常见的症状包括眼睛干涩、容易疲倦、眼痒、有异物感、痛灼热感、分泌物黏稠、怕风、畏光、对外界刺激很敏感；有时眼睛太干，基本泪液不足，反而刺激反射性泪液分泌，而造成常常流泪；较严重者眼睛会红肿、充血、角质化、角膜上皮破皮而有丝状物黏附，这种损伤日久则可造成角结膜病变，并会影响视力。如今干眼症患者日益增多，目前市售产品例如玻璃酸钠滴眼液、聚乙烯醇滴眼液、聚乙二醇滴眼液等能缓解干眼症状，但仅能起人工泪液的作用。天然泪液成分复杂，且天然泪膜三层结构的完整性是实施其有效功能的基础，人工泪液不能完全替代。另外，目前市售产品中含有防腐剂，长期使用含防腐剂的药物会对眼表造成损害并且可能导致眼表疾病加重。目前没有将bFGF用于治疗干眼症的产品，并且目前没有报道将人源的bFGF用于干眼症的治疗。
技术实现思路
在一个方面，本专利技术提供一种编码重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)的突变核酸分子。在一个方面，本专利技术提供一种由所述突变核酸分子编码的重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)。在一个方面，本专利技术提供一种药物组合物，其包含所述重组人碱性成纤维细胞生长(rh-bFGF)和至少一种药学上可接受的赋形剂。在一个方面，本专利技术提供一种药物组合物，其包含所述重组人碱性成纤维细胞生长(rh-bFGF)和至少一种选自甘氨酸、组氨酸、精氨酸、吐温、肝素钠或人血白蛋白(HSA)的稳定剂。在一个方面，所述药物组合物不含防腐剂。在一个方面，本专利技术提供一种治疗干眼症的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的所述药物组合物。附图说明图1为pET-30a(+)质粒结构图。图2为rh-bFGF的Western Blot结果。图3显示了通过高效液相色谱而检测的rh-bFGF纯度。图4显示了rh-bFGF完整蛋白的分子量质谱图。图5显示了天然人bFGF的cDNA序列、氨基酸序列以及经突变的人bFGF氨基酸序列。图6显示了rh-bFGF体外活性检测的四参数拟合曲线，其中C为EC50值。图7显示了在热压力条件下，不同氨基酸，包括组氨酸、甘氨酸和精氨酸以及吐温对rh-bFGF纯度变化的影响，其中95％LINE指rh-bFGF原液的纯度质量标准；原液纯度低于95％则表示纯度不合格。图8显示了在热压力条件下，HSA对rh-bFGF纯度变化的影响。图9显示了不同浓度的rh-bFGF滴眼液对碱烧伤新西兰兔干眼症模型泪液分泌的影响。符号“*”或“**”表示显著差异(p＜0.05或p＜0.01)。图10显示了不同浓度的rh-bFGF滴眼液对碱烧伤新西兰兔干眼症模型泪膜破裂时间的影响。符号“*”或“**”表示显著差异(p＜0.05或p＜0.01)。专利技术详述在一个方面，本申请专利技术人首次开发了一种包含重组人碱性成纤维细胞生长因子和一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一个方面，本专利技术提供一种药物组合物，其包含所述重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)和至少一种选自甘氨酸、组氨酸、精氨酸、吐温、肝素钠或人血白蛋白(HSA)的稳定剂。在这一方面，预料不到地发现，所述重组人碱性成纤维细胞生长因子与所述稳定剂构成了特定的稳定性组合。在一个方面，所述药物组合物不含防腐剂。在一个方面，本专利技术提供一种编码重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)的突变核酸分子。在一个方面，本专利技术提供一种编码重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)的突变核酸分子，其包含选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3的序列，或与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3具有至少95％、96％、97％、98或99％同一性的序列。在一个方面，本专利技术提供一种编码重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)的突变核酸分子，其为选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3的序列。在一个方面，本专利技术提供一种由所述突变核酸分子编码的重组人碱性成纤维细胞生长因子(rh-bFGF)。在一个方面，本专利技术提供一种药物组合物，其包含所述重组人碱性成纤维细胞生长(rh-bFGF)和至少一种药学上可接受的赋形剂。在一个方面，所述赋形剂包括，但不限于，缓冲体系、增稠剂、稳定剂、中和试剂、保湿剂等。在一个方面，本专利技术提供一种药物组合物，其包含所述重组人碱性成纤维细胞生长(rh-bFGF)和至少一种选自甘氨酸、组氨酸、精氨酸、吐温、肝素钠或人血白蛋白(HSA)的稳定剂。在一个方面，所述赋形剂包括缓冲体系。所述缓冲体系包括，但不限于，磷酸二氢钠-磷酸氢二钠、枸橼酸-磷酸氢二钠或硼酸-硼砂。在一个方面，所述缓冲体系为磷酸二氢钠-磷酸氢二钠。在一个方面，所述缓冲体系为枸橼酸-磷酸氢二钠。在一个方面，当磷酸二氢钠和磷酸氢二钠作为缓冲体系时，磷酸二氢钠、磷酸氢二钠分别以0.25mg/mL-1.25m妙mL、1.25mg/mL-3.75mg/mL的浓度存在。在一个方面，当磷酸二氢钠和磷酸氢二钠作为缓冲体系时，磷酸二氢钠、磷酸氢二钠分别以0.2-2.5mg/mL、0.5-5.0mg/mL的浓度存在。在一个方面，当磷酸二氢钠和磷酸氢二钠作为缓冲体系时，磷酸二氢钠、磷酸氢二钠分别以0.425mg/mL、2.50mg/mL的浓度存在。在一个方面，所述赋形剂包括增稠剂。所述增稠剂包括，但不限于，聚乙烯醇，透明质酸钠、甲基纤维素、羟甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙甲纤维素、泊洛沙姆或卡波姆的增稠剂。在一个方面，所述增稠剂为聚乙烯醇。在一个方面，所述增稠剂为卡波姆。在一个方面，所述卡波姆例如卡波姆940、卡波姆934、卡波姆974、卡波姆980等系列，优选卡波姆980系列。在一个方面，所述增稠剂通常以0.1-20.0mg/mL的浓度存在。在一个方面，所述增稠剂通常以5.0-15.0mg/mL，例如5.0mg/mL、6.0mg/mL、7.0mg/mL、8.0mg/mL、本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种编码重组人碱性成纤维细胞生长因子的突变核酸分子，其包含选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3的序列，或与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3具有至少95％、96％、97％、98或99％同一性的序列。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】一种编码重组人碱性成纤维细胞生长因子的突变核酸分子，其包含选自SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3的序列，或与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3具有至少95％、96％、97％、98或99％同一性的序列。
权利要求1的突变核酸分子，其序列如SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：3所示。
一种重组人碱性成纤维细胞生长因子，其由权利要求1或2的突变核酸分子编码。
一种药物组合物，其包含权利要求3的人碱性成纤维细胞生长因子和至少一种药学上可接受的赋形剂，所述赋形剂包括至少一种选自甘氨酸、组氨酸、精氨酸、吐温、肝素钠或人血白蛋白(HSA)的稳定剂。
权利要求4的药物组合物，其中所述稳定剂为甘氨酸。
权利要求4的药物组合物，其中所述稳定剂为组氨酸。
权利要求4-6的药物组合物，其中所述赋形剂还包括选自磷酸二氢钠-磷酸氢二钠、枸橼酸-磷酸氢二钠或硼酸-硼砂的缓冲体系。
权利要求4-7的药物组合物，其中所述赋形剂还包括选选自聚乙烯醇，透明质酸钠、甲...
【专利技术属性】
技术研发人员：方海洲，戴佩旻，杨波，王新志，王振恒，严贤龙，薛琦，熊璎珞，
申请(专利权)人：珠海亿胜生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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