硫氧还蛋白1表位及与其特异性结合的单克隆抗体制造技术

本发明专利技术涉及硫氧还蛋白1(Trx1)抗原的表位及其用途，更详细地，提供上述表位及与其结合的抗体或抗原结合片段。在本发明专利技术中证实的人类Trx1抗原抗原的表位位点可有效利用于用作改善抗‑Trx1抗体的结合亲和性的改良抗体的开发。并且，本发明专利技术的经改良的抗体与现有的抗‑Trx1抗体相比，对硫氧还蛋白1的结合亲和性优秀，灵敏度及特异性非常高，因此有利于改善乳腺癌诊断试剂盒的性能。此外，使用本发明专利技术的与硫氧还蛋白1特异性结合的抗体检测硫氧还蛋白1的灵敏度及特异性显著优于检测现有的作为其他乳腺癌诊断生物标志物的CA15‑3，因此可显著提高乳腺癌诊断的准确性及可靠性。

Thioredoxin 1 epitope and its specific binding monoclonal antibody

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】硫氧还蛋白1表位及与其特异性结合的单克隆抗体
本专利技术涉及硫氧还蛋白1(Trx1)抗原的表位及与其特异性结合的单克隆抗体，更详细地，涉及上述表位及与其结合的单克隆抗体或其抗原结合片段、用于编码上述抗体或其抗原结合片段的重链和/或轻链的核酸分子、包含上述核酸分子的重组载体、宿主细胞、上述抗体或其抗原结合片段的制备方法、乳腺癌诊断用试剂盒、为乳腺癌诊断提供所需信息的方法。
技术介绍
硫氧还蛋白(thioredoxin，Trx)为借助硫氧还蛋白还原酶进行NADPH依赖还原的12kDa左右的小的氧化还原蛋白质，包括哺乳类硫氧还蛋白1(Trx1)及硫氧还蛋白2(Trx2)。硫氧还蛋白作为生长因子起作用，去除在细胞内产生毒素的过氧化氢，在细菌中用作核糖核苷酸还原酶且起到使与转录活动相关的重要的要素与DNA结合的作用，在真核细胞中，对作为与转录相关的因子的NF-kB(nucleartranscriptionfactorkB)的活性产生影响。因此，硫氧还蛋白由于对细胞凋亡和肿瘤产生影响而具有调节癌细胞生长的重要的作用，通过切断氧化的其他蛋白质的二硫键来帮助其重新具有还原状态的活性。硫氧还蛋白1酶和硫氧还蛋白2酶在哺乳动物细胞内去除半胱氨酸的氧化氮而对细胞凋亡产生影响，在包括炎症疾病、心脏麻痹、癌症在内的多种疾病中具有潜在性的重要性。并且，在利用抗-硫氧还蛋白抗体的免疫组织化学分析中，在包括肝脏、结肠、胰脏以及子宫颈的人类癌组织产生硫氧还蛋白的表达，这种表达意味着可能在肿瘤诱发过程中的硫氧还蛋白牵涉可能性。在这种背景下，本专利技术人在研究能够在早期预测乳腺癌的诊断或预后的乳腺癌诊断用标记物的过程中，发现了硫氧还蛋白1在正常乳腺组织中产生低表达，但在乳腺癌组织中产生非常高的表达，且证实了硫氧还蛋白1作为乳腺癌诊断用标记物而非常有用(韩国授权专利第10-1058230号)。为了开发具有高准确性和精密度的基于酶联免疫吸附分析法(ELISA，Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay)的体外诊断(Invitrodiagnostics，IVD)，需要相同抗原蛋白质的各个其他部位具有高亲和性(affinity)的抗体对(两种)。同时，也需要具备每次以低成本生产具有规定的亲和性的抗体的系统。对此，本专利技术中，为了检测存在于人类血清中的硫氧还蛋白1(thioredoxin-1，Trx1)，开发了两种高性能的重组单克隆抗体，上述抗体有效地与硫氧还蛋白1特异性结合，从而确认了上述抗体有用于筛选乳腺癌患者，并且，确认了上述两种抗体与人类Trx1抗原抗原相结合的位点，由此完成了本专利技术。
技术实现思路
技术问题本专利技术为了解决如上所述的问题而提出，并且提供可通过高灵敏度和特异性来诊断乳腺癌的单克隆抗体或其抗原结合片段。本专利技术的再一目的在于，提供用于编码上述单克隆抗体或其抗原结合片段的重链和/或轻链的核酸分子。本专利技术的另一目的在于，提供包含上述核酸分子的重组载体。本专利技术的还一目的在于，提供包含上述重组载体的宿主细胞。本专利技术的又一目的在于，提供与上述单克隆抗体或其结合片段结合的人硫氧还蛋白1抗原的表位、编码其的核酸分子、包含上述核酸分子的重组载体以及包含上述重组载体的宿主细胞。本专利技术的又一目的在于，提供包括培养上述宿主细胞的步骤的与硫氧还蛋白1特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段的制备方法。本专利技术的又一目的在于，提供包含上述的单克隆抗体或其抗原结合片段的乳腺癌诊断试剂盒。本专利技术的又一目的在于，提供利用上述的单克隆抗体或其抗原结合片段来为乳腺癌诊断提供所需信息的方法。解决问题的手段为了解决如上所述的问题，本专利技术提供与硫氧还蛋白1特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含：轻链可变区，包含由序列1的氨基酸序列形成的轻链CDR1、由序列2的氨基酸序列形成的轻链CDR2及由序列3的氨基酸序列形成的轻链CDR3；以及重链可变区，由序列4的氨基酸序列形成的重链CDR1、由序列5的氨基酸序列形成的重链CDR2及由序列6的氨基酸序列形成的重链CDR3。根据本专利技术一优选实施例，上述抗体可包含由序列13的氨基酸序列形成的轻链可变区及由序列14的氨基酸序列形成的重链可变区。根据本专利技术再一优选实施例，上述抗体可包含由序列17的氨基酸序列形成的轻链及由序列18的氨基酸序列形成的重链。本专利技术还提供与硫氧还蛋白1特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含：轻链可变区，包含由序列7的氨基酸序列形成的轻链CDR1、由序列8的氨基酸序列形成的轻链CDR2及由序列9的氨基酸序列形成的轻链CDR3；以及重链可变区，包含由序列10的氨基酸序列形成的重链CDR1、由序列11的氨基酸序列形成的重链CDR2及由序列12的氨基酸序列形成的重链CDR3。根据本专利技术一优选实施例，上述抗体可包含由由序列15的氨基酸序列形成的轻链可变区及由序列16的氨基酸序列形成的重链可变区。根据本专利技术再一优选实施例，上述抗体可包含由序列19的氨基酸序列形成的轻链以及由序列20的氨基酸序列形成的重链。根据本专利技术另一优选实施例，上述抗体可包含由序列25的氨基酸序列形成的轻链以及由序列26的氨基酸序列形成的重链。根据本专利技术还一优选实施例，上述抗体可包含IgG1重链及κ轻链。根据本专利技术又一优选实施例，上述抗原结合片段可以为Fab、F(ab')、F(ab')2、Fv或单链抗体分子。根据本专利技术又一优选实施例，上述抗体可以为嵌合抗体、人源化抗体或人类抗体。本专利技术还提供用于编码上述的抗体或其抗原结合片段的重链和/或轻链的核酸分子。根据本专利技术一优选实施例，用于编码上述轻链的核酸分子可由序列21的核苷酸序列、序列23的核苷酸序列或序列37的核苷酸序列形成。根据本专利技术一优选实施例，用于编码上述重链的核酸分子可由序列22的核苷酸序列、序列24的核苷酸序列或序列28的核苷酸序列形成。本专利技术还提供包含用于编码上述重链的核酸分子、用于编码上述轻链的核酸分子或用于编码上述重链及轻链的核酸分子的重组载体、以及包含其的宿主细胞。本专利技术还提供由选自由序列32至34及序列172至176组成的组中的一种氨基酸序列形成的人硫氧还蛋白1抗原的表位及编码其的核酸分子。根据本专利技术一优选实施例，上述核酸分子可由选自由序列35至37及177至181组成的组中的一种核苷酸序列形成。本专利技术还提供包含上述核酸分子的重组载体以及包含其的宿主细胞。本专利技术还提供与硫氧还蛋白1特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段的制备方法，该方法包括培养包括包含用于编码上述抗体的重链的核酸分子、用于编码轻链的核酸分子或用于编码重链及轻链的核酸分子的重组载体的宿主细胞的步骤。本专利技术还提供包含上述抗体或其抗原结合片段的乳腺癌诊断试剂盒。根据本专利技术一优选实施例，上述试剂盒可以为酶联免疫吸附分析(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay)试剂盒。...

【技术保护点】
1.一种与硫氧还蛋白1特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含：/n轻链可变区，包含由序列1的氨基酸序列形成的轻链CDR1、由序列2的氨基酸序列形成的轻链CDR2以及由序列3的氨基酸序列形成的轻链CDR3；以及/n重链可变区，包含由序列4的氨基酸序列形成的重链CDR1、由序列5的氨基酸序列形成的重链CDR2以及由序列6的氨基酸序列形成的重链CDR3。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171012 KR 10-2017-01325361.一种与硫氧还蛋白1特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含：
轻链可变区，包含由序列1的氨基酸序列形成的轻链CDR1、由序列2的氨基酸序列形成的轻链CDR2以及由序列3的氨基酸序列形成的轻链CDR3；以及
重链可变区，包含由序列4的氨基酸序列形成的重链CDR1、由序列5的氨基酸序列形成的重链CDR2以及由序列6的氨基酸序列形成的重链CDR3。


2.一种与硫氧还蛋白1特异性结合的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，包含：
轻链可变区，包含由序列7的氨基酸序列形成的轻链CDR1、由序列8的氨基酸序列形成的轻链CDR2以及由序列9的氨基酸序列形成的轻链CDR3；以及
重链可变区，包含由序列10的氨基酸序列形成的重链CDR1、由序列11的氨基酸序列形成的重链CDR2以及由序列12的氨基酸序列形成的重链CDR3。


3.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述抗体包含由序列13的氨基酸序列形成的轻链可变区及由序列14的氨基酸序列形成的重链可变区。


4.根据权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述抗体包含由序列15的氨基酸序列形成的轻链可变区及由序列16的氨基酸序列形成的重链可变区。


5.根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述抗体包含由序列17的氨基酸序列形成的轻链及由序列18的氨基酸序列形成的重链。


6.根据权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述抗体包含由序列19的氨基酸序列形成的轻链及由序列20的氨基酸序列形成的重链。


7.根据权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述抗体包含由序列25的氨基酸序列形成的轻链及由序列26的氨基酸序列形成的重链。


8.根据权利要求1至4中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述抗体包含IgG1重链及κ轻链。


9.根据权利要求1至7中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述抗原结合片段为Fab、F(ab’)、F(ab’)2、Fv或单链抗体分子。


10.根据权利要求1至7中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于，上述抗体为嵌合抗体、人源化抗体或人类抗体。


11.一种核酸分子，其特征在于，用于编码根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的轻链。


12.根据权利要求11所述的核酸分子，其特征在于，上述核酸分子由序列21的核苷酸序列形成。


13.一种核酸分子，其特征在于，用于编码根据权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的重链。


14.根据权利要求13所述的核酸分子，其特征在于，上述核酸分子由序列22的核苷酸序列形成。


15.一种核酸分子，其特征在于，用于编码根据权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的轻链。


16.根据权利要求15所述的核酸分子，其特征在于，上述核酸分子由序列23或27的核苷酸序列形成。


17.一种核酸分子，其特征在于，用于编码根据权利要求2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段的重链。


18.根据权利要求17所述的核酸分子，其特征在于，上述核酸分子由序列24或28的核苷酸序列形成。


19.一种重组载体，其特征在于，包含根据权利要求11所述的用于编码轻链的核酸分子、根据权利要求13所述的用于编码重链的核酸分子或所有上述核酸分子。


20.一种重组载体，其特征在于，包含根据权利要求15所述的用于编码轻链的核酸分子，包含根据权利要求17所述的用于编码重链的核酸分子或所有上述核酸分子。


21.一种宿主细胞，其特征在于，包含根据权利要求19所述的重组载体。


22.一种宿主细胞，其特征在于，包含根据权利要求20...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐经薰，金大中，金龍，金美庆，郑钟焕，李基世，
申请(专利权)人：ES医疗保健有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国;KR