一种广谱抗流感疫苗免疫原及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种新型的抗流感免疫原，其序列包括如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示的氨基酸序列，或其免疫原性片段，或其组合。此外，本发明专利技术还提供了采用该免疫原的重组载体疫苗及其免疫方法在抗流感疫苗中的应用。通过表达该新型流感免疫原的多种载体疫苗序贯应用，并采用全身系统免疫和局部免疫的组合，在呼吸道局部诱导高水平T细胞免疫应答，可对多种流感病毒感染产生广谱性保护作用。

Immunogen of a broad-spectrum anti influenza vaccine and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】一种广谱抗流感疫苗免疫原及其应用
：本专利技术涉及工程性疫苗的研究、设计和生产，特别涉及一种广谱抗流感病毒的疫苗免疫原及其应用，其包括一种新型的免疫原、重组载体疫苗及其免疫方法。
技术介绍
：流感是由流感病毒感染引起的传染力极强、传染速度极快的急性呼吸道传染病。流感病毒属正粘病毒科，为反义单链RNA病毒。流感病毒引起的季节性流感和频繁且不可预测的流感大流行已严重危害人类健康和公共卫生。根据世界卫生组织(WorldHealthOrganization,WHO)报告统计，在全世界范围内，每年有300-500万人感染A型流感病毒，其中约25万-50万人死亡。由于近年来H5N1、H1N1、H3N2、H7N9等高致病性流感的频繁爆发，研究对不同亚型流感病毒均具有交叉保护作用的通用型流感疫苗意义重大。预防流感最为有效和经济的措施是接种疫苗。目前世界卫生组织批准使用的流感疫苗均为季节性流感疫苗，和国际上多数流感疫苗的研究热点，均集中在针对流感病毒包膜血凝素蛋白(Haemagglutinin,HA)诱导抗体应答来达到保护效果。虽然，HA头部在诱导中和抗体的产生时具有显著得免疫优势，但此部位最易发生抗原漂变，因此针对HA头部的中和抗体具有较强的毒株特异性，且病毒会选择性的向逃逸中和抗体方向突变，抗体很难实现交叉保护效果。近年来研究发现了一些靶向HA杆部的广谱中和抗体，但对不同组的流感病毒缺乏交叉保护作用，由于自然感染状态下HA杆部的免疫原性属次优势部位，且对病毒的中和能力较弱，很难成功应用。目前已有研究证实，在H7N9流感患者体内，流感特异性CD8+T细胞具有广谱抗流感的作用，可以杀死被不同亚型流感感染的细胞。并且，在流感感染之后，流感病毒抗原特异性CD8+记忆T细胞可以在呼吸道内维持长达一年的时间,并且这群特异性CD8+细胞的数量与宿主抵抗流感感染的交叉保护能力相关，为设计高效和广谱抗病毒的流感疫苗提供理论基础。目前WHO批准使用的流感疫苗均为季节性流感疫苗，其中最为广泛使用的为三价灭活疫苗，包含2种A型流感病毒(H1N1和H3N2)和1种B型流感病毒。另外，以皮下接种的疫苗、以鼻腔喷雾方式接种的减毒活疫苗等也获批准使用。然而，这些疫苗都存在共同的挑战，即疫苗的保护效果依赖于当年流行的流感毒株与疫苗毒株的一致性。流感病毒不断变异，WHO的监测与预测费时费力且准确性不够，为了保证当季的疫苗供应，需提前至少七、八个月的时间进行生产，大大增加了疫苗预测的不确定性，且对可能发生的大流行流感也基本无效。目前的疫苗生产主要依然依赖于鸡胚，生产周期过长，工艺复杂，费时费力，成本相对较高。目前有很多策略用于尝试构建流感疫苗，其中常用的灭活疫苗和减毒活疫苗缺乏有效性且生产工艺复杂，生产时间长。目前DNA疫苗与病毒载体疫苗应用较多，DNA疫苗已被证实是一种最为有效的初免疫苗形式，采用DNA疫苗初免，蛋白疫苗或病毒载体疫苗加强的策略组合免疫也是疫苗免疫策略的研究热点。目前最常用的腺病毒疫苗载体为人五型腺病毒，虽具有较好的外源基因表达能力，但由于是人来源的腺病毒载体，很容易被大多数人体内预存的腺病毒抗体中和，使得疫苗失效，由此限制了该疫苗载体的应用。近年来发现了大猩猩来源的68型腺病毒疫苗载体，人体内极少有针对该腺病毒的抗体，很好的克服了上述问题，且大猩猩68型腺病毒可感染分裂细胞和非分裂细胞，可转导肺细胞、肝细胞、骨细胞、血管、肌肉、脑、中枢神经细胞等，具有很好地基因稳定性和优异的外源基因表达能力，可用HEK293细胞进行大量生产，已被广泛用于艾滋、埃博拉、流感、疟疾、丙肝等疫苗的研究。天坛株痘病毒疫苗载体具有很广的宿主范围，繁殖滴度高，诱导的免疫反应非常持久，且可插入外源基因的容量极大，理论上可达25-50kb，天坛株痘病毒可有效刺激机体产生抗体应答和T细胞免疫应答，已被证实具有极高的安全性，免疫缺陷人群也可使用。因此，如何有效利用流感病毒内部保守蛋白，设计针对流感病毒内部CD8T细胞表位的免疫原，通过多种不同的疫苗载体及其免疫组合策略，更为全面、有效、持久地激发免疫系统，提供更广泛有效的保护作用，是目前广谱流感疫苗面临的严峻挑战。
技术实现思路
：在本专利技术的一个方面，提供了一种抗流感疫苗免疫原，所述免疫原包括选自SEQIDNo.:1和SEQIDNo.:2所示的氨基酸序列或其免疫原性片段，或这些序列的组合。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述免疫原包含流感病毒内部保守蛋白，或保守蛋白的免疫原性片段。在本专利技术的又一具体实施方案中，所述流感病毒内部保守蛋白包括流感病毒基质蛋白(M1、M2)、核蛋白(NP)、碱性聚合酶(PB1、PB2)和酸性聚合酶(PA)。在本专利技术的又一具体实施方案中，所述免疫原源自所有流感病毒亚型的重组蛋白，或其共享序列的重组蛋白，或其组合，所述流感病毒亚型包括甲型流感病毒的H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、H16、H17、H18亚型、乙型流感病毒。在本专利技术的另一方面，提供了一种抗流感病毒重组载体疫苗，其是通过使如上所述的抗流感疫苗免疫原或其免疫原性片段或其组合在多种不同载体中表达并构建的重组载体疫苗。在本专利技术的一个具体实施方案中，所述重组载体疫苗包括重组蛋白疫苗、重组DNA疫苗、重组病毒载体疫苗、重组细菌载体疫苗、重组酵母载体疫苗或重组病毒样颗粒疫苗等；所述病毒载体包括腺病毒载体、痘病毒载体、腺相关病毒载体、单纯疱疹病毒载体、巨细胞病毒载体等。在本专利技术的又一方面，提供了一种免疫方法，其使用如上所述的抗流感疫苗免疫原或其免疫原性片段或其组合构建重组流感疫苗进行免疫，包括如下步骤：每次免疫采用如权利要求5所述的不同重组载体疫苗进行序贯接种，每一种重组载体疫苗至少接种一次，接种程序中至少包含一次呼吸道内免疫和一次全身系统免疫接种。在本专利技术的一个具体实施方案中，在上述疫苗免疫过程中，每一针采用不同载体来源的重组疫苗进行免疫接种。在本专利技术的一个具体实施方案中，在上述疫苗免疫过程中，该疫苗采用“初免-加强-再加强”的免疫策略进行免疫接种，每一种重组疫苗至少接种一次，接种程序中至少包含一次呼吸道内疫苗免疫和一次全身系统免疫接种。在本专利技术的一个具体实施方案中，在上述疫苗免疫过程中，疫苗全身接种的方式包括肌肉注射、皮下接种、皮内接种。疫苗呼吸道接种的方式包括雾化、滴鼻。在本专利技术的一个具体实施方案中，在上述疫苗免疫过程中，接种流程为：重组DNA疫苗肌肉注射初免，重组腺病毒载体疫苗呼吸道免疫加强，重组痘病毒疫苗肌肉注射再次加强的策略进行疫苗构建与免疫接种。在本专利技术的一个具体实施方案中，在上述疫苗免疫过程中，接种流程为：重组痘病毒疫苗作为最后一针疫苗接种。在本专利技术的一个具体实施方案中，在上述疫苗免疫过程中，每两次接种之间的间隔至少为1周，优选为2周或更多周。本专利技术所述疫苗与免疫技术可用于接种禽类动物以预防禽流感向人传播，还可用于接种人以降低人感染禽流感的致病性，还可用于接种人以降低人感染人流感本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗流感疫苗免疫原，其特征在于，所述免疫原包括SEQ ID No.:1和SEQ ID No.:2所示的序列或其免疫原性片段，或其组合。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】一种抗流感疫苗免疫原，其特征在于，所述免疫原包括SEQIDNo.:1和SEQIDNo.:2所示的序列或其免疫原性片段，或其组合。


根据权利要求1所述的抗流感疫苗免疫原，其中所述免疫原包含流感病毒内部保守蛋白，或保守蛋白的免疫原性片段。


根据权利要求1所述的抗流感疫苗免疫原，其中所述流感病毒内部保守蛋白包括流感病毒基质蛋白(M1、M2)、核蛋白(NP)、碱性聚合酶(PB1、PB2)和酸性聚合酶(PA)。


根据权利要求1-3所述的抗流感疫苗免疫原，其中所述免疫原源自所有流感病毒亚型的重组蛋白，或其共享序列的重组蛋白，或其组合，所述流感病毒亚型包括甲型流感病毒的H1、H2、H3、H4、H5、H6、H7、H8、H9、H10、H11、H12、H13、H14、H15、H16、H17、H18亚型、乙型流感病毒。


一种抗流感疫苗，其为通过使用权利要求1-4中任一项所述的抗流感疫苗免疫原在多种不同载体中表达并构建的重组载体疫苗。


根据权利要求5中所述的抗流感疫苗，其中所述重组载体疫苗包括重组蛋白疫苗、重组DNA疫苗、重组病毒载体疫苗、重组细菌载体疫苗、重组酵母载体疫苗或重组病毒样颗粒疫苗。


根据权利要求5所述的抗流感疫苗，其中所述病毒载体包括腺病毒载体、痘病毒载体、腺相关病毒载体、单纯疱疹病毒载体、巨细胞病毒载体。


根据权利要求1-4所述的抗流感疫苗免疫原在制备抗流感病毒的疫苗中的用途。


一种使用如权利要求1-4中任一项所述的流感疫苗免疫原构建重组流感疫苗进行免疫的方法，包括如下步骤：每次免疫采用如权利要求5所述的不同重组载体疫苗进行序贯接种，每一种重组载体疫苗至少接种一次，接种程序中至少包含一次呼吸道内免疫和一次全身系统免疫接种。


根据权利要求9所述的方法，在疫苗免疫过程中，每一针采用不同载体来源的重组疫苗进行免疫接种。


根据权利要求9所述的方法，该疫苗采用“初免-加强-再加强”的免疫策略进行免疫接种，每一种重组疫苗至少接种一次，接种程序中至少包含一次呼吸道内疫苗免疫和一次全身系统免疫接种。


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【专利技术属性】
技术研发人员：徐建青，张晓燕，谢辛慈，
申请(专利权)人：上海市公共卫生临床中心，
类型：发明
国别省市：上海;31