一种多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物及其制备方法和其在制备抗真菌药物中的用途技术

本发明专利技术公开了一种多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物及其制备方法和其在制备抗真菌药物中的用途。本发明专利技术从覆盆子中提取分离得到2α,3α,23‑三羟基齐墩果烷‑12‑烯‑28‑酸，并对该化合物进行了真菌抑制活性实验，试验结果表明该化合物具有明显的真菌抑制活性，可用于制成抗真菌药物或是作为该类药物的先导化合物，具有潜在临床应用价值。

A polyhydroxy substituted oleanolane pentacyclic triterpenoids and its preparation method and application in the preparation of antifungal drugs

【技术实现步骤摘要】
一种多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物及其制备方法和其在制备抗真菌药物中的用途
本专利技术属于医药领域，具体涉及一种多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物及其制备方法和其在制备抗真菌药物中的用途。
技术介绍
现代医学将真菌感染分为浅部真菌感染和深部真菌感染两大类。浅部真菌感染是指皮肤角蛋白组织(包括角质层、甲板、毛发等)感染；深部真菌感染也叫侵袭性真菌感染(Invasivefungalinfections,IFI)，是指真菌侵入人体，在组织、器官或血液中生长、繁殖，并导致炎症反应及组织损伤的疾病。近年来，由于激素、抗生素类药物的广泛使用，骨髓、器官移植和抗肿瘤药物使用频率的增加，使得侵袭性真菌感染的发病率逐年剧增(Brownetal.,Science2012,647-648；Brownetal.,Sci.Transl.Med.2012,165rv13)。据估计，每年大约有150万到200万人的死亡是由侵袭性真菌感染造成。侵袭性真菌感染已成为免疫力低下患者死亡的主要原因，而其中念珠菌感染尤其是白色念珠菌感染始终居于首位，且在接受治疗后其死亡率仍然高达40％。因此，真菌感染已成为临床上急需解决的问题(Ostrosky-Zeichneretal.Nat.Rev.DrugDiscov.2010,719-727；Oddsetal.TrendsMicrobiol.2003,272-279)。自20世纪50年代以来虽有一系列抗真菌药物上市，但面临着产品种类有限(Ostrosky-Zeichneretal.Nat.Rev.DrugDiscov.2010,719-727)和毒副作用大(Ostrosky-Zeichneretal.,Clin.Infect.Dis.2003,415-425)等诸多问题。目前，抗真菌药物的研发进展缓慢，近几十年来缺乏实质性的进展，可供临床选择治疗侵袭性真菌感染的药物仍然十分有限。氟康唑(fluconazole)是目前临床应用最广泛的抗真菌药物，但该药物在重复治疗和长期给药的过程中，促进了真菌耐药的快速发展，并引起交叉耐药，使得现有药物对越来越多的耐药真菌束手无策。抗真菌药物的有限储备，突显了研发新一代抗真菌(尤其抗耐药真菌)药物的迫切需要。天然产物被认为是具有独特药理活性的新型化学实体的重要来源，长期以来一直被视为药物设计的宝贵来源(Hattumetal.,J.Am.Chem.Soc.2014,11853-11859；Harveyetal.,Nat.Rev.DrugDiscov.2015,111-119；Kochetal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA2005,17272-17277；Eschenbrenner-Luxetal.,Angew.Chem.Int.Ed.2014,2134-2137；Tiagoetal.,NatureChem.2016,531-541)，尤其在抗癌及抗感染类疾病药物研发中占据重要地位(NewmanandCragg,J.Nat.Prod.2016,629-661；Newmanetal.,Nat.Prod.Rep.2000,215-234)。由此可见，从天然产物中寻找新型的抗真菌药物具有重要的研究价值。我国中药资源十分丰富，且部分中药用于治疗真菌感染具有悠久的历史，故而从中药及其化学成分中筛选抗真菌药物并研究其作用机制已成为目前抗真菌药物研发的重要方向。传统中药覆盆子为蔷薇科(Rosaceae)悬钩子属(Rubus)植物华东覆盆子(RubuschingiiHu)的干燥果实，为中国药典收载的常用中药，具有益肾、固精、缩尿和养肝明目之功效(中华人民共和国药典.一部,2015,382)。本专利技术从其中首次分离得到的多羟基齐墩果烷型三萜化合物2α,3α,23-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-酸，经多次体外药理试验表明该化合物具有显著的抗白色念珠菌SC5314活性。这是首次发现该化合物具有此活性并可在制备抗真菌药物中应用。
技术实现思路
本专利技术是为了解决上述技术问题，所提供一种多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物及其制备方法和其在制备抗真菌药物中的用途。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物，所述多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物为2α,3α,23-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-酸，结构式如下：一种多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物的制备方法，包括以下步骤：a.将覆盆子果实进行干燥并粉碎；b.常温下用75％乙醇提取3～5次，每次12～24小时；c.合并提取液减压浓缩除去甲醇得到浸膏；d.用水分散浸膏，并依次用等体积的石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇各萃取2～3次，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水四个组分；e.步骤d中获得的乙酸乙酯部分经过硅胶柱以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，再经过MCI柱以甲醇-水梯度洗脱，最后经凝胶柱色谱和半制备型HPLC进一步纯化，得到化合物2α,3α,23-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-酸。在本具体实施方案中，步骤e中，石油醚-乙酸乙酯的洗脱比例为30:1-0:1,v/v；甲醇-水的洗脱比例为50:50-70:30–85:15-100:0,v/v。在本具体实施方案中，2α,3α,23-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-酸可通过上述方法从植物中分离纯化得到；也可经本领域技术人员熟知的化学方法合成获得。一种多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物在制备抗真菌药物中的用途。在本具体实施方案中，所述多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物为2α,3α,23-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-酸。在本具体实施方案中，所述抗真菌药物为抗白色念珠菌SC5314药物。在本具体实施方案中，所述化合物可单独应用或者合用，亦可与药学上可接受的载体或赋形剂结合，按照常规方法制成口服或者非口服剂型。一种抗真菌类药物，所述抗真菌类药物以2α,3α,23-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-酸为活性成分。在本具体实施方案中，所述抗真菌类药物含有药学上可接受的辅料，制成药学上可接受的剂型。在本具体实施方案中，所述抗真菌类药物的剂型包括片剂、胶囊、注射剂。本专利技术的有益效果是：本专利技术的多羟基五环三萜类化合物2α,3α,23-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-酸具有显著的抑制真菌活性，对现代人群中高发的真菌感染所致疾病具有良好的应用前景。具体实施方式为了使本
的人员更好地理解本专利技术技术方案，下面结合实施例来进一步说明本专利技术的技术方案。质谱(ESI-MS)由Agilent1100LC/MSD型质谱仪获得，使用ESI离子源同时获得正负离子模式；NMR数据从BrukerAvanceII400型核磁共振仪或AvanceⅡ600型核磁共振仪获得，化学位移参照未氘代的残余溶剂峰，用δ(ppm)表示；分析所用的薄层层析板(TLC)购自烟台江友硅胶开发有限公司，使用UV(λ:254nm,365nm)和本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物，其特征在于：所述多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物为2α,3α,23-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-酸，结构式如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物，其特征在于：所述多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物为2α,3α,23-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-酸，结构式如下：

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2.一种权利要求1所述的多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
a．将覆盆子果实进行干燥并粉碎；
b．常温下用75%乙醇提取3~5次，每次12~24小时；
c．合并提取液减压浓缩除去甲醇得到浸膏；
d．用水分散浸膏，并依次用等体积的石油醚、乙酸乙酯以及正丁醇各萃取2~3次，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水四个组分；
e．步骤d中获得的乙酸乙酯部分经过硅胶柱以石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，再经过MCI柱以甲醇-水梯度洗脱，最后经凝胶柱色谱和半制备型HPLC进一步纯化，得到化合物2α,3α,23-三羟基齐墩果烷-12-烯-28-酸。


3.根据权利要求2所述的一种多羟基取代齐墩果烷型五环三萜类化合物的制备方法，其特征在于：步骤e中，石油醚-乙酸乙酯的洗脱比例为30:1-0:1,v/v；甲醇-水的洗脱比例为50:50-70:30–85:15-100:0,v/v。


4.一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩冰，曹永兵，王晓娟，陈辉，张雷，刘伟，叶招浇，喻轶群，郭楠，胡金锋，
申请(专利权)人：上海市闵行区中心医院，
类型：发明
国别省市：上海;31