一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂及制备方法，包括采用纳米金颗粒，在纳米金颗粒中加入水溶性光敏剂，得到纳米金‑光敏剂复合物，然后再将纳米金‑光敏剂复合物再与肌红蛋白单克隆抗体进行偶联，通过纳米金颗粒所具有的电荷性将肌红蛋白单克隆抗体在其等电点环境条件下使两者产生静电吸附，从而使肌红蛋白单克隆抗体偶联至纳米金颗粒表面。按本发明专利技术的制备方法得到的一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂，提高了光敏剂的利用率，简化生产工艺，降低生产成本，使用时采用夹心法检测原理对检测物进行检测，提高了照射的有效光剂量，使得更多的光敏剂被激活并产生更强的光敏效果，且使激发光波长与发射波长的差距加大，提高检测的辨识度。

A homogeneous chemiluminescent reagent for myoglobin detection and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂及制备方法
本专利技术涉及生物
，特别是一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂及制备方法。
技术介绍
抹香鲸肌红蛋白三级结构于1960年由Kendrew用X线衍射法阐明，这是世界上第一个被描述的蛋白质三级结构。肌红蛋白(MYO)是一种细胞内结合氧血红素蛋白，普遍存在于心肌和骨骼肌中，分子量为17,800道尔顿。在急性心肌损伤时，MYO最先被释放入血液中，在症状出现约2-3小时后，血中MYO可超出正常上限，9-12小时达到峰值，24-36小时后恢复正常。因此，测定血清或血浆肌红蛋白可作为急性心肌梗死(AMI)诊断的早期最灵敏的指标，具有良好的临床诊断价值，可用于评估潜在的急性心肌梗塞病症，并辅助诊断急性心肌梗塞，还可用于再梗死的诊断，结合临床，如MYO重新升高，应考虑为再梗死或者梗死延展。对于肌红蛋白的检测法，现有光激化学发光方法需采用非水溶性光敏剂(卟啉、叶绿素和酞菁及其衍生物等)，未经修饰的光敏剂的单线态氧量子产率较低，影响检测性能；而衍生化的光敏剂，化学合成困难、工艺复杂。现有光激发光系统使用的光敏剂需在有机相中包埋入聚苯乙烯微球，需要经过复杂的离心、超滤等纯化方式，且需再恢复到水相基质中，光敏剂在包埋、纯化等处理过程中易产生损耗，降低感光效应。现有光激化学发光技术激发波长与检测波长差异不大，易受干扰，荧光背景影响较大。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决上述现有技术的不足而提供的一种增强检测精密度、准确度和灵敏度且不易受激发光的干扰的均相法肌红蛋白化学发光检测试剂及制备方法。为了实现上述目的，本专利技术所设计的一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂，它包含有光敏剂成份，它是一种纳米金-光敏剂复合物与肌红蛋白单克隆抗体进行偶联体。本专利技术所设计的一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂的制备方法，包括采用纳米金颗粒，获得纳米金颗粒后进行纳米金-光敏剂复合，所述纳米金-光敏剂的复合是在纳米金颗粒中加入水溶性光敏剂，并在室温下暗室中搅拌过夜，然后通过离心最后得到沉淀的纳米金-光敏剂复合物，然后再用缓冲液将纳米金-光敏剂复合物复溶；复溶后的纳米金-光敏剂复合物再与肌红蛋白单克隆抗体进行偶联，所述纳米金-光敏剂与肌红蛋白单克隆抗体的偶联是在复溶后的纳米金-光敏剂复合物的溶液中加入肌红蛋白单克隆抗体，调整反应pH值至肌红蛋白单克隆抗体的等电点(通常为等电点值的正负0.5之间)，通过纳米金颗粒所具有的电荷性将肌红蛋白单克隆抗体在其等电点环境条件下使两者产生静电吸附，从而使肌红蛋白单克隆抗体偶联至纳米金颗粒表面，再通过离心方式除去未结合的肌红蛋白单克隆抗体，然后再加入复溶缓冲液进行复溶，获得悬浮于复溶缓冲液中的纳米金-光敏剂复合物与肌红蛋白单克隆抗体进行偶联体。本专利技术所提供的纳米金-光敏剂复合物，使光敏剂利用率更高，检测灵敏度更高。为了使纳米金颗粒与光敏剂能够获得良好的复合以及纳米金-光敏剂复合物与肌红蛋白单克隆抗体具有更好的偶联效果，所述纳米金颗粒与光敏剂的摩尔比可以是2:1-10，所述水溶性光敏剂可以是卟啉衍生物、酞菁衍生物或叶绿素衍生物，如铜酞菁-3,4',4″,4″′-四磺酸四钠盐或叶绿素铜钠盐，所述的静电吸附时间可以是1小时至2小时。为了使纳米金-光敏剂复合物在缓冲液中的复溶效果更显著，所述的缓冲液可以是PBS、HEPES、硼酸盐、碳酸盐、Tris-HCl、柠檬酸中的一种；为了使纳米金-光敏剂复合物与肌红蛋白的偶联体在复溶缓冲液中的复溶效果更显著，所述的复溶缓冲液可以是PBS、HEPES、碳酸盐、Tris-HCl中的一种；为了提高悬浮于复溶缓冲液中的纳米金光敏颗粒悬浮液的稳定性，在复溶缓冲液中可以含有确定比例的稳定剂、表面活性剂、盐离子和防腐成份，所述的稳定剂可以是BSA、Blockmaster、吐温等；所述的表面活性剂可以是曲拉通、吐温、SDS等，如Tween-20、曲拉通-X100；所述的盐离子可以是氯化钠、氯化钾等；所述的防腐成分可以是Proclin300、叠氮钠、硫柳汞等。按本专利技术的制备方法得到的一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂，提高了光敏剂的利用率，简化生产工艺，降低生产成本，使用时，将市售的发光微球制成发光微粒，并与本专利技术提供的纳米金-光敏剂复合物与肌红蛋白单克隆抗体进行偶联体组成试剂盒，并采用夹心法检测原理对检测物进行检测，使之在检测过程中提高了照射的有效光剂量，使得更多的光敏剂被激活并产生更强的光敏效果，且使激发光波长与发射波长的差距加大，提高检测的辨识度。附图说明图1是夹心法检测原理图；图2是校准曲线图；图3是实施例1线性范围图；图4是实施例2线性范围图；图5是实施例3线性范围图；图6是实施例1准确度-比对实验线性图；图7是实施例2准确度-比对实验线性图；图8是实施例3准确度-比对实验线性图。图中：激发光1、纳米金颗粒2、水溶性光敏剂3、肌红蛋白单克隆抗体4、检测物5、发光微粒6。具体实施方式下面结合实施例及对应的检测数据图表对本专利技术作进一步说明。实施例1：本实施例提供的一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂，它包含有光敏剂成份，它是一种纳米金-光敏剂复合物与肌红蛋白单克隆抗体的偶联体。本实施例提供的一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂的制备方法，包括采用纳米金颗粒，获得纳米金颗粒后进行纳米金-光敏剂复合，所述纳米金-光敏剂的复合是在纳米金颗粒中加入水溶性光敏剂，并在室温下暗室中搅拌过夜，然后通过离心最后得到沉淀的纳米金-光敏剂复合物，然后再用缓冲液将纳米金-光敏剂复合物复溶；复溶后的纳米金-光敏剂复合物再与肌红蛋白单克隆抗体进行偶联，所述纳米金-光敏剂与肌红蛋白单克隆抗体的偶联是在复溶后的纳米金-光敏剂复合物的溶液中加入肌红蛋白单克隆抗体，调整反应pH值至肌红蛋白单克隆抗体的等电点，在实施过程中，通常为等电点的pH值控制在其等电点的正负0.5之间，通过纳米金颗粒所具有的电荷性将肌红蛋白单克隆抗体在其等电点环境条件下使两者产生静电吸附，从而使肌红蛋白单克隆抗体偶联至纳米金颗粒表面，再通过离心方式除去未结合的肌红蛋白单克隆抗体，然后再加入复溶缓冲液进行复溶，获得悬浮于复溶缓冲液中的纳米金-光敏剂复合物与肌红蛋白单克隆抗体的偶联体。在本实施例中，其具体操作步骤可以是：(1)纳米金颗粒的制备取0.01％氯金酸水溶液100ml加热至沸腾，搅动下准确加入l％柠檬酸三钠水溶液0.7ml，金黄色的氯金酸水溶液在2分钟内变为紫红色，继续煮沸15分钟，冷却后以蒸馏水恢复到原体积，获得10纳米-50纳米的纳米金颗粒溶液。(2)纳米金-光敏剂复合物的合成在纳米金颗粒溶液里面加入铜酞菁-3,4',4″,4″′-四磺酸四钠盐，纳米金与铜酞菁-3,4',4″,4″′-四磺酸四钠盐摩尔比为2:1。在室温下暗室中搅拌过夜，用12000rpm离心得到最后的复合物沉淀，用50mlP本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂，它包含有光敏剂成份，其特征在于它是一种纳米金-光敏剂复合物与肌红蛋白单克隆抗体进行偶联体。/n

【技术特征摘要】
1.一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂，它包含有光敏剂成份，其特征在于它是一种纳米金-光敏剂复合物与肌红蛋白单克隆抗体进行偶联体。


2.一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂的制备方法，包括采用纳米金颗粒，其特征是获得纳米金颗粒后进行纳米金-光敏剂复合，所述纳米金-光敏剂的复合是在纳米金颗粒中加入水溶性光敏剂，并在室温下暗室中搅拌过夜，然后通过离心最后得到沉淀的纳米金-光敏剂复合物，然后再用缓冲液将纳米金-光敏剂复合物复溶；复溶后的纳米金-光敏剂复合物再与肌红蛋白单克隆抗体进行偶联，所述纳米金-光敏剂与肌红蛋白单克隆抗体的偶联是在复溶后的纳米金-光敏剂复合物的溶液中加入肌红蛋白单克隆抗体，调整反应pH值至肌红蛋白单克隆抗体的等电点，通过纳米金颗粒所具有的电荷性将肌红蛋白单克隆抗体在其等电点环境条件下使两者产生静电吸附，从而使肌红蛋白单克隆抗体偶联至纳米金颗粒表面，再通过离心方式除去未结合的肌红蛋白单克隆抗体，然后再加入复溶缓冲液进行复溶，获得悬浮于复溶缓冲液中的纳米金-光敏剂复合物与肌红蛋白单克隆抗体进行偶联体。


3.根据权利要求2所述的一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂的制备方法，其特征在于，所述纳米金颗粒与光敏剂的摩尔比为2:1-10。


4.根据权利要求2或3所述的一种均相法肌红蛋白化学发光检测试剂的制备方法，其特征在于所述水溶性光敏剂为卟啉衍生物、酞菁衍生物或叶绿素衍生物。


5.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：梅义武，刘兴，叶佳颖，
申请(专利权)人：浙江卓运生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33