一种卵巢过度刺激综合征的生物标记物及其应用和试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种卵巢过度刺激综合征的生物标记物及其应用和试剂盒，所述的生物标记物为miRNA‑27‑3p，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。目前，本领域尚未有能对卵巢过度刺激综合征预测的相关生物标志物，特别是通过特异性相关外泌体miRNA来对卵巢过度刺激综合征进行快速和准确的检测或预测的方法、试剂盒。本发明专利技术则提供了一种生物标记物能够快速准确的预测或检测到卵巢过度刺激综合征。

A biomarker for ovarian hyperstimulation syndrome and its application and kit

【技术实现步骤摘要】
一种卵巢过度刺激综合征的生物标记物及其应用和试剂盒
本专利技术涉及分子生物学和疾病发病基础研究和诊断领域。具体的，本专利技术涉及一种卵巢过度刺激综合征(OHSS)的卵泡液外泌体microRNA生物标记物，以及所述卵泡液外泌体microRNA在制备用于诊断或检测卵巢过度刺激综合征的试剂盒的应用。
技术介绍
卵巢过度刺激综合征(OvarianHyperstimulationSyndrome，OHSS)是接受不孕治疗女性的一种最常见的医源性并发症，主要是由治疗过程中注射人绒毛膜促性腺激素(HCG)引起的[1]。卵巢过度刺激综合征目前被定义为患者在接受促性腺激素治疗期间变现为恶心、呕吐、腹部不适、体重增加、卵巢增大、胸腔积液、少尿、水电解质紊乱等一系列症状[2]。据统计，32％的不孕患者在接受促排卵治疗中会发生卵巢过度刺激，而5％-8％的患者会发生重度卵巢过度刺激[3]。卵巢过度刺激综合征是一种可致死性的并发症，如果不及时进行治疗最终会导致患者死亡。目前卵巢过度刺激的病因还不完全清楚，大部分研究认为血管内皮生长因子(VEGF)及其他的一些炎症因子如前列腺素，白介素6(IL-6)等是引起卵巢过度刺激的主要因素，但如何调控的相关机制仍然未知[4]。因此，进一步了解OHSS的病理生理的分子机制可能有助于鉴定新的诊断和治疗靶点。miRNA是mRNA的重要转录后调节因子，通过靶向性结合可以调控目的基因的表达。外泌体介导的miRNA转移是细胞间通讯的重要形式，可以传递多种物质如DNA、microRNA、蛋白质等[5]，其对细胞的正常生理活动十分关键[14]。外泌体携带的miRNA的异常表达与多种疾病相关，其可以调控细胞的多种功能[6]，可以根据其表达谱的改变在疾病发生的较早期就可以预测疾病[7,8,9]。此外，由于miRNA的靶向调控能力也意味着其可能有治疗相关疾病的潜力。近年来随着卵泡液外泌体提取技术的发展，其在女性生殖系统中的作用受到越来越多的重视。已有文献报道来自不同大小卵泡的卵泡液外泌体对颗粒细胞增殖有不同的刺激作用，并介导颗粒细胞中的AKT信号通路[15]。此外Bi等发现miRNA-21-5p可以通过靶向PTEN调节颗粒细胞的凋亡[16]。本领域需要一种早期对卵巢过度刺激综合征(OHSS)的诊断，特别是通过相关外泌体miRNA的表达水平对OHSS进行早期快速和准确的检测或预测的方法、试剂盒。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种卵巢过度刺激综合征(OHSS)的外泌体miRNA生物标记物；本专利技术提供了通过在样品，特别是在卵泡液外泌体样品中检测所述生物标记物的miRNA的表达水平变化来检测或诊断OHSS的方法以及用于这些方法的试剂盒。在本专利技术的其中一个方面，本专利技术提供了miR-27-3p在研究或者检测卵巢过度刺激综合征中的用途。在本专利技术的其中有一个方面，提供了使用miRNA-27-3p在研究或检测卵巢过度刺激综合征中的用途。所述研究或检测通常是对卵泡液外泌体中的miRNA的表达来进行的，所述研究或检测是在卵泡液样品中进行。在本专利技术的其中一个方面，本专利技术提供了miRNA-27-3p单独在用于制备或检测卵巢过度刺激综合征的试剂盒或装置中的用途。所述研究或检测通常是通过对卵泡液外泌体中的miRNA的表达分析来进行的。所述研究或检测是在卵泡液外泌体样品中进行的。对卵巢过度刺激综合征的检测也包括对卵巢过度刺激综合征的诊断。在本专利技术的其中一个方面，所述试剂盒为用于实时荧光定量PCR方法研究或检测多囊卵巢综合征的试剂盒。本专利技术还提供了用于研究或检测卵巢过度刺激综合征的试剂盒或装置，其中包括测量miRNA-27的表达水平的试剂。所述试剂盒或装置用于在卵泡液外泌体样品中研究或检测卵巢过度刺激综合征。在本专利技术的其中一个方面所述试剂盒为用于通过实时荧光定量PCR方法研究或检测卵巢过度刺激综合征的试剂盒。本专利技术还要解决的技术问题是提供上述生物标记物在制备检测卵巢过度刺激综合征产品中的应用。本专利技术还要解决的技术问题是提供含有上述生物标记物的试剂盒。为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种卵巢过度刺激综合征的生物标记物；其中，所述的生物标记物为miRNA-27-3p，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示(表1)。表1本专利技术中有关miRNA的序列如下miRNAmiRBaseAccession序列(5’to3’)hsa-miRNA-27-3pMIMAT0014534UUCACAGUGGCUAAGUUCUGC上述的卵巢过度刺激综合征的生物标记物在制备检测卵巢过度刺激综合征产品中的应用也在本专利技术的保护范围之内。其中，所述的卵巢过度刺激综合征的受检样品为卵泡液外泌体；其中，外泌体是细胞外囊泡的一类。其中，所述的卵泡液外泌体的预处理方法为向卵泡液中加入PBS稀释(PBS体积为卵泡液体积的两倍)，于4℃2500g离心30分钟，得到第一上清液；将第一上清液于4℃12000g离心4分钟，得到第二上清液；将第二上清液用0.22μm的滤器过滤，得到滤液和沉淀物；将滤液于4℃120000g离心4小时，收集沉淀物，即为卵泡液外泌体。一种检测卵巢过度刺激综合征中的试剂盒也在本专利技术的保护范围之内。其中，所述的试剂盒包括上述所述的生物标记物miRNA-27-3p。其中，所述的试剂盒包括实时荧光定量PCR试剂组，其包括两条生物标记物miRNA-27-3p的扩增引物，其核苷酸序列分别为SEQIDNO.2和SEQIDNO.3所示。其中，所述的试剂盒还包括RNA提取试剂组和RNA逆转录试剂组；其中，所述的RNA提取试剂组为TRIZOL(Invitrogen,USA)；所述的RNA逆转录试剂组为AMVenzymereversetranscriptionsystem(Taraka,Japan)。其中，所述的试剂盒通过检测miRNA-27-3p的表达水平变化来检测卵巢过度刺激综合征的存在。其中，可以使用适用与检测生物样品中的RNA表达水平的任意技术，可以测量样品中miRNA基因产物的水平。用于测定生物样品(例如，细胞，组织)中RNA表达水平的合适技术(例如，RNA印迹分析，RT-PCR，原位杂交)是本领域技术人员已知的。上述试剂盒的使用方法包括如下步骤：(1)用所述的RNA提取试剂组从卵泡液外泌体中提取总RNA；(2)用RNA逆转录试剂组对步骤(1)提取的总RNA进线逆转录；(3)用实时荧光定量PCR试剂组对步骤(2)逆转录得到的产物进行实时荧光定量PCR扩增。(4)对其扩增循环数进行比较，如果患者为卵巢过度刺激综合征，其外泌体miRNA-27-3p含量低于正常患者，正常患者卵泡液外泌体miRNA-27-3p是卵巢过度刺激征患者的4.05倍。在本专利技术中，对miRNA的表本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种卵巢过度刺激综合征的生物标记物，其特征在于，所述的生物标记物为miRNA-27-3p，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种卵巢过度刺激综合征的生物标记物，其特征在于，所述的生物标记物为miRNA-27-3p，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。


2.权利要求1所述的卵巢过度刺激综合征的生物标记物在制备检测卵巢过度刺激综合征产品中的应用。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的卵巢过度刺激综合征的受检样品为卵泡液外泌体。


4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的卵泡液外泌体的预处理方法为向卵泡液中加入PBS稀释，于4℃2500g离心30分钟，得到第一上清液；将第一上清液于4℃12000g离心4分钟，得到第二上清液；将第二上清液用0.22μm的滤器过滤，得到滤液和沉淀物；将滤液于4℃120000g离心4小时，收集沉淀物，即为卵泡液外泌体。


5.一种检测卵巢过度刺激综合征中的试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的生物标记物。


6.根据权利要求5所述的检测卵巢过度刺激综合征中的试...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘凯鲁，聂晓伟，张頔，贺茜，
申请(专利权)人：江苏省中医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32